Vidéo 5 6

Question 1

qu est ce que la technologie de l adn recombinant?

Answer 1

morceau ADN que l on prend dans un organisme et que l on met dans un autre organisme = TRANSGENIQUE

Question 2

depuis mendel, a quoi se limitait l analyse genetique?

Answer 2

observation des phenotype a partir des croisement controle

il semblait impossible d isole un gene a partir d un genome

Question 3

aujourd hui qu est ce qui est une operation de routine dans les laboratoire

Answer 3

isoler et clonage d un gene

Question 4

pourquoi l isolement d un gene est si important?

Answer 4

1) determiner la sequence d un gene
2) transfere des genes d un organisme a un autre

Question 5

donnez un exemple de transgenique

Answer 5

gene insuline produit par la levure, isoler la proteine et injecte chez les humain qui sont depourvu de cette gene

Question 6

pourquoi modifie t on un gene?

Answer 6

comprendre son fonctionnement

Question 7

donner les 4 processus dans la construction de l’ADN recombinant

Answer 7

1) ADN donneur est isole et coupe avec enzyme de restriction
2)fragment (insert) insere dans plasmide que l’on ouvre (replication autonome)=ADN recombinant
3)melange ADN recombinant est utilise pour transformer les cellules bacterienne
4)Bacterie sont etale sur le petri et se multiplie en formant des colonies =>chaque colonie possede le meme vecteur mais avec des insert different (clone ADN)

Question 8

V ou F pour construire une banque d ADN on peut mettre un genome complet

Answer 8

Faux diapo 144 on ne peut pas car le plasmide est petit comparer au genome donc elle a des limites

Question 9

a quoi sert le vecteur?

Answer 9

transporter notre morceau ADN exogene que l on veut etudier dans d autre organisme

Question 10

quels types d enzyme de restriction peut on utiliser pour couper a l interieur de l ADN?

Answer 10

-endonuclease = reconnait sequence specifique de 4 a 6nt
-RNAse DNAse

Question 11

quel est la particularite de ces enzymes?

Answer 11

elle couple en reconnaissant des sequence a 4 a 6nt en laissant des bout COLLANT et FRANC

Question 12

expliquer comment ,a l aide de l exemple du drosophile avec une aile manque , peut on construire une banque D ADN

Answer 12

1) identifier le mutant
2) croiser le mutant avec drosophile normalpour obtenir des homo ou heterozygote
3) couper L’ADN du drosophile qui possede les genes croiser
4) inserer dans plamide et etaler dans les petri
5) choisir la bacterie avec le gene qui possede les 2 ailes

Question 13

avant de purifier pour obtenir notre ADN recombinant que doit-on faire?

Answer 13

AMPLIFICATION = faire 10^9 copie de notre plasmide

Question 14

apres la purification de notre ADN recombinant que peut on faire?

Answer 14

etudier ces morceaux et mettre en lien avec les pathologie

Question 15

si on ne fait rien apres avoir ouvert le plasmide que se passe t il?

Answer 15

elle se referme et il ne se passe rien

Question 16

Quel est est le rôle de ECORI?

Answer 16

endonuclease (enzyme de restriction) qui reconnait 6nt et fait un bout collant

bacterie l utilise pour combattre le virus

Question 17

qu est ce que l hybridation?

Answer 17

processus de ligation qui reconnait les sequence complementaire du plasmide

Question 18

qu est ce que le Bromure d ethidium

Answer 18

molecule utiliser pour faire la migration lors de l electrophorese et est intercalante qui emet lumiere UV pour la detecte

Question 19

qu est ce que le chlorure de calcium?

Answer 19

rend membrane permeable lors du choc thermique en expulsant le Ca2+ et le plasmide peut rentrer en meme temps

Question 20

u est ce que le chlorure de cesium?

Answer 20

separer les molecule en fonction des poids moleculaires lors de l electrophorese

Question 21

qu est ce qu une bacterie competente?

Answer 21

bacterie pretraiter que l on peut modifier pour nos experience

Question 22

qu est ce que le trizol?

Answer 22

agent qui permet de faire la lyse

Question 23

expliquer les 3 etapes de la culture bacterienne?

Answer 23

1) clonage bacterie avec gene resistant aux antibio
2) etale dans petri nutritive, formation des colonies et introduction antibio
3)seul Bacterie avec gene resistant pousse

Question 24

pourquoi est il important d avoir des site de restriction dans nos gene de resistance?

Answer 24

sinon on couperai n importe ou lors du clonage

et on peut faire une selection lorsqu on veut mettre different antibiotique pour savoir si notre insert s estfait aubon endroit et si nos gene est vrament cloner

Question 25

V ou F les ORI sont pareil dans tous les especes?

Answer 25

Faux diapo 156 les ORI sont different selon les especes

Question 26

qu est ce que BAMH I 375?

Answer 26

endonuclease de restriction

Question 27

que permet les ORI?

Answer 27

permert au plasmide de se repliquer de facon autonome c est a dire ORIgine de replication qui permet ouverture de la double helice sans cela le plasmide ne pourrait pas se multiplier.

Question 28

qu est ce que le polylinker cloning site?

Answer 28

court segment ADN qui contient pleins de site de restriction permet l’insertion d’ADN étranger sans perturber le reste du plasmide = sans elle le plasmide sera plus fonctionnelle

Question 29

qu est ce que pUC?

Answer 29

origine de replication

Question 30

citez une autre origine de replication?

Answer 30

SV40 et f1 ori

Question 31

qu est ce que le neomycin?

Answer 31

utilise chez les eucaryotes et a besoin de queu poly A pour fair ARNm sinon elle ne fonctionnera pas

Question 32

qu est ce que pCMV?

Answer 32

capable de faire la transcription car c est un promoyeur fort

Question 33

qu est ce que BGH pA?

Answer 33

poly A de bovin

Question 34

pourquoi dans un plasmide on a besoin de toutes ces structures BGH PA, SV40 PA pCMV…?

Answer 34

pour que le plasmide se replique dans toute les systemes

Question 35

a quoi sert l enzyme topoisomerase?

Answer 35

faire les liens phosphodiester de chaque cote pour relier l ADN ou coupe la double helice lors de la replication

Question 36

pour faire la purification de nos proteine d interet quel autre TAG peut on utiliser?

Answer 36

V5 epitope => utilisation des AC qui vont se fixer sur nos protein d interet qui contient His6

lors du lavage con va se debarasser de tout et ce qui vont rester sont nos proteine marque par l ac

Question 37

V ou F les enzyme de Restriction qui reconnait 6 nucleotides sont plus frequents que les enzyme de restriction qui reconnait 4 nucleotides

Answer 37

faux diapo 160 4 nucleotide sont plus frequent

Question 38

expliquez ce qu ‘une enzyme de restriction

Answer 38

1) permis dev de la technologie recombiant
2) prod par Bacterie pour defense contre les phages
3) coupe a des endroit precis dans l ADN et inactive les phages

Question 39

qu est ce qu un palindrome?

Answer 39

2 brins brins ont la meme sequence mais une orientation antiparallele

Question 40

pourquoi la bacterie a t elle developper un systeme de methylation?

Answer 40

la bacterie veut que les enzyme de restriction degrade les intrus et non s autodetruire.

donc si on a trop de EcoRI elle va degrader son propre genome

methyl ajoute a different endroit dans les molecule ADN et empeche la reconnaissance de la structure

Question 41

sur quel AA la methylation se fait elle?

Answer 41

Adenosine et cytosine

Question 42

les bacterie utilisees en biologie moleculaire sont deficiente en quoi?

Answer 42

methylase et enzyme de restriction

Question 43

V ou F la methylation est un mecanisme dit transgenique

Answer 43

Faux diapo 165 mecanisme epigenetique

Question 44

V ou F la bacterie peut survivre avec enormement de plasmide a l interieur

Answer 44

faux diapo 168 Proteine synthetise vont devenir toxique pour elle donc elle va mourir

Question 45

qu est ce qui est important de faire lors du clonage?

Answer 45

orienter le clonage car sinon on va se retrouver avec des proteine qui vont faire n importe quoi

Question 46

quel est la solution pour orienter un clonage ?

Answer 46

utiliser 2 enzyme de restriction au lieu de 1 enzyme de restriction qui vont laisser des extremite cohesive non compatible

Question 47

avant de faire le clonage il est essentiel de faire une etape pour eviter que la molecule se recircularise quel est cette etape?

Answer 47

Dephosphorylation par phospatase pour eviter que la molecule se recircularise

Question 48

qu est ce qui permert de relier les molecule d ADN ?

Answer 48

adn ligase