Vidéo 5 6 Flashcards
qu est ce que la technologie de l adn recombinant?
morceau ADN que l on prend dans un organisme et que l on met dans un autre organisme = TRANSGENIQUE
depuis mendel, a quoi se limitait l analyse genetique?
observation des phenotype a partir des croisement controle
il semblait impossible d isole un gene a partir d un genome
aujourd hui qu est ce qui est une operation de routine dans les laboratoire
isoler et clonage d un gene
pourquoi l isolement d un gene est si important?
1) determiner la sequence d un gene
2) transfere des genes d un organisme a un autre
donnez un exemple de transgenique
gene insuline produit par la levure, isoler la proteine et injecte chez les humain qui sont depourvu de cette gene
pourquoi modifie t on un gene?
comprendre son fonctionnement
donner les 4 processus dans la construction de l’ADN recombinant
1) ADN donneur est isole et coupe avec enzyme de restriction
2)fragment (insert) insere dans plasmide que l’on ouvre (replication autonome)=ADN recombinant
3)melange ADN recombinant est utilise pour transformer les cellules bacterienne
4)Bacterie sont etale sur le petri et se multiplie en formant des colonies =>chaque colonie possede le meme vecteur mais avec des insert different (clone ADN)
V ou F pour construire une banque d ADN on peut mettre un genome complet
Faux diapo 144 on ne peut pas car le plasmide est petit comparer au genome donc elle a des limites
a quoi sert le vecteur?
transporter notre morceau ADN exogene que l on veut etudier dans d autre organisme
quels types d enzyme de restriction peut on utiliser pour couper a l interieur de l ADN?
-endonuclease = reconnait sequence specifique de 4 a 6nt
-RNAse DNAse
quel est la particularite de ces enzymes?
elle couple en reconnaissant des sequence a 4 a 6nt en laissant des bout COLLANT et FRANC
expliquer comment ,a l aide de l exemple du drosophile avec une aile manque , peut on construire une banque D ADN
1) identifier le mutant
2) croiser le mutant avec drosophile normalpour obtenir des homo ou heterozygote
3) couper L’ADN du drosophile qui possede les genes croiser
4) inserer dans plamide et etaler dans les petri
5) choisir la bacterie avec le gene qui possede les 2 ailes
avant de purifier pour obtenir notre ADN recombinant que doit-on faire?
AMPLIFICATION = faire 10^9 copie de notre plasmide
apres la purification de notre ADN recombinant que peut on faire?
etudier ces morceaux et mettre en lien avec les pathologie
si on ne fait rien apres avoir ouvert le plasmide que se passe t il?
elle se referme et il ne se passe rien
Quel est est le rôle de ECORI?
endonuclease (enzyme de restriction) qui reconnait 6nt et fait un bout collant
bacterie l utilise pour combattre le virus
qu est ce que l hybridation?
processus de ligation qui reconnait les sequence complementaire du plasmide
qu est ce que le Bromure d ethidium
molecule utiliser pour faire la migration lors de l electrophorese et est intercalante qui emet lumiere UV pour la detecte
qu est ce que le chlorure de calcium?
rend membrane permeable lors du choc thermique en expulsant le Ca2+ et le plasmide peut rentrer en meme temps
u est ce que le chlorure de cesium?
separer les molecule en fonction des poids moleculaires lors de l electrophorese
qu est ce qu une bacterie competente?
bacterie pretraiter que l on peut modifier pour nos experience
qu est ce que le trizol?
agent qui permet de faire la lyse
expliquer les 3 etapes de la culture bacterienne?
1) clonage bacterie avec gene resistant aux antibio
2) etale dans petri nutritive, formation des colonies et introduction antibio
3)seul Bacterie avec gene resistant pousse
pourquoi est il important d avoir des site de restriction dans nos gene de resistance?
sinon on couperai n importe ou lors du clonage
et on peut faire une selection lorsqu on veut mettre different antibiotique pour savoir si notre insert s estfait aubon endroit et si nos gene est vrament cloner
V ou F les ORI sont pareil dans tous les especes?
Faux diapo 156 les ORI sont different selon les especes
qu est ce que BAMH I 375?
endonuclease de restriction
que permet les ORI?
permert au plasmide de se repliquer de facon autonome c est a dire ORIgine de replication qui permet ouverture de la double helice sans cela le plasmide ne pourrait pas se multiplier.
qu est ce que le polylinker cloning site?
court segment ADN qui contient pleins de site de restriction permet l’insertion d’ADN étranger sans perturber le reste du plasmide = sans elle le plasmide sera plus fonctionnelle
qu est ce que pUC?
origine de replication
citez une autre origine de replication?
SV40 et f1 ori
qu est ce que le neomycin?
utilise chez les eucaryotes et a besoin de queu poly A pour fair ARNm sinon elle ne fonctionnera pas
qu est ce que pCMV?
capable de faire la transcription car c est un promoyeur fort
qu est ce que BGH pA?
poly A de bovin
pourquoi dans un plasmide on a besoin de toutes ces structures BGH PA, SV40 PA pCMV…?
pour que le plasmide se replique dans toute les systemes
a quoi sert l enzyme topoisomerase?
faire les liens phosphodiester de chaque cote pour relier l ADN ou coupe la double helice lors de la replication
pour faire la purification de nos proteine d interet quel autre TAG peut on utiliser?
V5 epitope => utilisation des AC qui vont se fixer sur nos protein d interet qui contient His6
lors du lavage con va se debarasser de tout et ce qui vont rester sont nos proteine marque par l ac
V ou F les enzyme de Restriction qui reconnait 6 nucleotides sont plus frequents que les enzyme de restriction qui reconnait 4 nucleotides
faux diapo 160 4 nucleotide sont plus frequent
expliquez ce qu ‘une enzyme de restriction
1) permis dev de la technologie recombiant
2) prod par Bacterie pour defense contre les phages
3) coupe a des endroit precis dans l ADN et inactive les phages
qu est ce qu un palindrome?
2 brins brins ont la meme sequence mais une orientation antiparallele
pourquoi la bacterie a t elle developper un systeme de methylation?
la bacterie veut que les enzyme de restriction degrade les intrus et non s autodetruire.
donc si on a trop de EcoRI elle va degrader son propre genome
methyl ajoute a different endroit dans les molecule ADN et empeche la reconnaissance de la structure
sur quel AA la methylation se fait elle?
Adenosine et cytosine
les bacterie utilisees en biologie moleculaire sont deficiente en quoi?
methylase et enzyme de restriction
V ou F la methylation est un mecanisme dit transgenique
Faux diapo 165 mecanisme epigenetique
V ou F la bacterie peut survivre avec enormement de plasmide a l interieur
faux diapo 168 Proteine synthetise vont devenir toxique pour elle donc elle va mourir
qu est ce qui est important de faire lors du clonage?
orienter le clonage car sinon on va se retrouver avec des proteine qui vont faire n importe quoi
quel est la solution pour orienter un clonage ?
utiliser 2 enzyme de restriction au lieu de 1 enzyme de restriction qui vont laisser des extremite cohesive non compatible
avant de faire le clonage il est essentiel de faire une etape pour eviter que la molecule se recircularise quel est cette etape?
Dephosphorylation par phospatase pour eviter que la molecule se recircularise
qu est ce qui permert de relier les molecule d ADN ?
adn ligase
