Vf. Método de transferencia de material genético Flashcards
En las bacterias, ¿Con qué mecanismos se hace la transferencia de material genético?
Conjugación
Transducción
Transformación
La conjugación es un proceso de ____________de material genético entre 2 células bacterianas mediante un contacto ____________
Transferencia horizontal
Directo
¿Cómo se descubrio la conjugación?
Al juntar 2 cepas auxótropas de E. coli y se aislaban colonias protótofas
Es el proceso mediante el cual el DNA es transferido de una bacteria a un bacteriofago
Transducción
¿Cómo se clasifica la transducción?
Generalizada
Especializada
¿Qué tipo de transducción hace la transferencia de cualquier región del genoma bacteriano?
Generalizada
¿Qué tipo de transducción hace la transferencia de loci adyacente al sitio de integración del profago?
Especializada
La transducción es utilizada para el proceso mediante el cual el _________________ entre a una célula mediante un _________________
DNA exógeno
vector viral
En la transducción, un _________________ puede infectar una bacteria e integrarse en el ______________________ manteniendo el ciclo lisogénico antes de activar el ____________________
bacteriofago
genoma bacteriano
ciclo lítico
En la transducción, el DNA puede integrarse al genoma de la bacteria por….
Recombinación sitio específica (Homología de secuencia)
Es la variación hereditaria de una célula bacteriana originada con la combinación de DNA desnudo libre en el medio con la DNA exogeno en el genoma celular
Transformación
¿Qué es el transformante?
Célula transformada
Es el estado fisiológico limitado en el tiempo que permite captar DNA en el medio exterior
Competencia
Factores ambientales que influyen a la competencia
Densidad del cultivo
Temperatura
pH
Nutrientes
V o F. La competencia es variable en cada especie que pueda transformarse
Verdadero
La competencia es codificada en el ______________ o _______________
genoma
Artificial
¿Cómo se clasifica la transformación?
Natural
Artificial
Tipo de transformación donde algunas especies de bacterias cuentan con la maquinaria para llevar el DNA a través de la membrana
Natural
¿Dónde se códifica la transformación natural?
Genes celulares
V o F. La transformación artificial se codifia en los genes celulares
Falso, no esta coficada en los genes celulares, es inducida por procedimientos
Para que se induzca la transformación de la célula estas son convertidas en __________ en condiciones que no ocurren en la naturaleza
Permeables
La transformación artificial induce el estado de ________________ en células que no lo presentan de forma natural
Competencia
La transformación artificial es una técnica basada en tratamientos químicos o físicos que producen __________ en la célula, permitiendo que el _________________ se introduzca
Microporos
DNA exogeno
¿Cuáles son las 6 técnicas que permiten la transformación artificial?
Química
Microinyección
Lipofección
Electroporación
Vectores virales
Biobalística
En la técnica química para la transformación artificial, las células se incuban en ____________ con _____________ en presencia de _________ ___________
Hielo
DNA exógeno
Cationes divalentes
¿Qué productos preparan a la membrana célular para que sea permeable al DNA exogeno en la técnica química?
Cationes divalentes
¿Qué factor permite al DNA entrar a la célula?
Células incubadas a 42° por 30 seg
(Shock termico)
Técnica donde se agrega manualmente el DNA con ayuda de microagujas y micromanipuladores
Microinyección
Técnica donde el DNA se encapsula en liposomas
Lipofección
Técnica donde se aumenta la permeabilidad de la membrana célular por un campo eléctrico
Electroporación
¿A qué voltaje/cm se utiliza para permitir la permeabilidad de la membrana celular?
10-20kV/cm
En la electroporación por ___________________ se abren los ___________ donde pasará el ________________
Corriente eléctrica
Poros
DNA exógeno
V o F. Una excesiva potencia a la célula, genera más rapidez para meter DNA
Falso, una excesiva potencia puede matar la célula
Técnica donde se aprovecha la característica de los virus para ingresar su info a la célula blanco
Por Vectores virales
Con los vectores virales, se selecciona un ______ y se fabrican ___________ conteniendo la info genética de interés
Virus
Pseudovirus
V o F. Al usar vectores virales, estos no obstaculizan la replicación del virus
Falso, si la obstaculiza
En la Biobalística se usan pequeñas partículas de _____ y de __________ cubiertas de DNA para después dispararse a la célula
Oro
Tugsteno
V o F. La mayoria de las células humanas puede ser transformadas por la biobalística
Falso, las plantas son las que pueden
Procesos que producen copias genéticamente idénticas de un ente biológico
Clonación
Mecanismos por los que se puede clonar DNA
In vitro
In vivo
La clonación de DNA _________, amplifica las moléculas de ________ ____________ mediante su introducción asistida por _________ en células de cultivo
In vivo
ácid nucleicos
Vectores
Tecnicas usada en la clonación de proteínas
Sistema de traducción in vitro
In vivo (celular)
En la clonación de proteínas _________, se producen ______________ mediante la introducción asistida de ____________
In vivo
Proteínas
Vectores
La clonación celular requiere del empleo de…
Vectores
El vector es un _________, una molécula de _____ cuya misión es unirse con el _______, para facilitar su entrada a la célula anfitriona
Portador
DNA
Inserto
Los vectores son elementos _________ con capacidad de _____________
Genéticos
Autorreplicarse
V o F. El inserto normalmente puede ser cualquier DNA de doble cadena
Verdadero
Ejemplos de Insertos
cDNA
Producto de autorreplicación de RNA
Producto de PCR
Son los tres aspectos a considerar al seleccionar un vector
Tamaño de inserto
Tipo de célula anfitriona
Plásmidos/virus
V o F. A la hora de elegir un vector, los virus son empleados en células eucariotas y los plásmidos en compuestos terapéuticos
Verdadero
V o F. El plásmido puede ser un vector de clonación y almacenación
Verdadero
V o F. El virus solo puede ser un vector de clonación
Falso, también de almacenamiento
¿Cuáles son los insertos más grandes?
Bac y Yac
V o F. Los insertos de virus tienen 300 kpb ocupados para la clonación o almacenamiento
Falso, tienen 20 Kpb
¿Cuántos kpb hay en los insertos de BAC y YAC?
300 y 2000
V o F. BAC y YAC son insertos usados en vectores para la expresión
Falso, son para clonación y almacenamiento
¿Cómo se clasifican los vectores?
-De clonación
-De expresión
Tipo de Vector que almacena las secuencias y permite la obtención de grandes cantidades del inserto
Vector de clonación
Tipo de Vector que tiene la capacidad de expresar DNA recombinante
Vector de expresión
¿Cuál es el objetivo del vector de expresión?
Producir un transcrito de RNA o la proteína que es procedente de la expresión
¿Cuáles son características que poseen los vectores de clonación?
Secuencias para mantener su replicación y la del DNA
Secuencias codificadoras para un gen
Sitios multiples de clonación
El producto de la secuencia de codificadora del gen en un vector de clonación, ______ debe estar presente en _________ u __________________
No
Tejidos u organismos
La secuencia que mantiene la replicación del vector de clonación origina la ______________ y secuencias ___________
Replicación
Reguladoras
V o F. La secuencia que permite mantener la replicación y el DNA, es independiente del DNA genómico
Verdadero
La secuencia codificadora para un gen de selección en un vector de clonación, es usada para métodos _____________ o de ________________ ________________
Genéticos
Selección fenotípica
¿Qué genes codifica la sección codificadora de genes el vector de clonación?
-Genes de resistencia
-Genes reporteros
-Genes que complementan defectos nutricionales
Ejemplos de genes resistentes en la secuencia de codificadora de genes del vector de clonación
Ampicilina
Ejemplos de genes reporteros en la secuencia de codificadora de genes del vector de clonación
Lac Z
GFP (proteína verde fluorescente)
Luciferasa
¿Qué función tienen los sitios múltiples de clonación en el vector de clonación?
Selección de sitios de restricción para la clonación
Ejemplo de vector de clonación
Vector pBR322
Características adicionales del vector de expresión
-Secuencia reguladora
- Promotor
- Operador
- Sitio de unión a ribosoma
- Secuencia de término de la transcripción
- Secuencia de poliadenilación
-Codón de inicio y de paro de la traducción
Secuencia del vector de expresión que estabiliza el mRNA
Secuencia de termino de transcripción
Ejemplo de vector de expresión
Vector pCMVTnT
En el vector pCMVTnT, en la región _____________________ de CMV permite la expresión ___________________________ de muchas células
Potenciadora o promotora
Constitutiva
¿Cuáles son los 7 pasos para la inserción de genes?
1- Prepara el inserto
2- Preparar el vector
3- Preparar la constitución o constructo final
4- Transformación
5- Selección de transformadores
6- Propagación de transformantes
7- Purificación de vectores o de proteínas recombinantes
Paso donde el vector es cargado con el inserto
En la preparación de la construcción o constructo final
En la preparación del inserto el DNA se corta con las _____________ de ______________ las secuencias __________
Enzimas de restricción
Palindromicas
Ejemplo de enzimas de restricción que cortan el DNA
Eco RI y Pvu
En la preparación del vector el __________________ emplea cualquier clonación de enzimas de restricción
Policonector o sitiomultiple de clonación
En la preparación de la construcción, el inserto se une ___________ al vector
covalentemente
¿De qué depende la especificidad de la construcción del vector?
Tipo de extremos
Paso donde la célula bacteriana ha sido transformada y crece en medios de cultivos sólidos
Selección de transformantes
