Versuch 5 Flashcards
Wie kann man auch kleine RNAs in SDS-Gel halten?
Ethanolgehalt des Puffer erhöhen
2 Methoden RNA zu denaturieren
Formaldehyd
Glyoxylierung
Was wird analysiert mit Northern Blot/ Southern Blot/ Western Blot
Northern: RNA
Southern: DNA
Western: Proteine
Wie färbt Midori Green RNA an?
Interkaliert zw. Basen
Was ist problem mit Midori Green? Alternatives Färbemittel?
Wird durch Formaldehyd zerstört
Ethidiumbromid
In welchen zellen weißt gleiche Person gen. Variation auf?
Immunzellen: B-Lymphozyten
Was kann mit RNA-Analysen untersucht werden?
Spleßvorgang
alternatives Spleißen
Gen-Aktivität
Worüber kann RNA aufgereinigt werden?
PolyA-Schwanz bindet Oligo-dT
Wovon ist Hybridisierungstemperatur abhängig?
Basen, pH-Wert, Temperatur
4 Grad für GC
2 Grad für AT
Welche Primergröße erhöht Spezifität? Warum?
Kleine Primer
weniger zufällige Bindungsmöglichkeiten
Welcher Solzgehalt erhöht Spezifität? Warum?
Geringer Salzgehalt
Hydrathülle verändert Interaktion
Welche Substanzen zerstören Zellwände?
Chaotrope Salze
Was macht DEPC?
Inhibiert alle Enzyme
Warum kann man mit RNA keine PCR durchführen?
RNA-Pol benötigt sehr spezifischen Primer
Welche DNA-Pol ist hitzebeständig?
Taq-Pol
In welchen Organismen gibt es hitzebeständige DNA-Pol und welche hat einen Vorteil?
Bakterien
Archaeen (Vorteil: Proofreading)
Welche Temperaturschritte laufen bei PCR ab?
Schmelztemperatur
Annealingtemperatur
optimale Arbeitstemperatur d. DNA-Pol
von vorne
2 Arten Hot Start zu machen
DNA-Pol mit Ak inhibieren
Paraffinkugel formt Wachsdeckel, Pol oben aufgeben
