Vaja 1: Mutageneza z UV

Question 1

Kakšne vrste mutacija so UV žarki?

Answer 1

Fiziklni dejavnik inducirane mutacije

Question 2

Zakaj smo uporabili MgSO4?

Answer 2

?

Question 3

Potek vaje?

Answer 3

1.) Nacepimo CSH100 in damo na stresalnik cez noč na 37C
2.) Določitev št. bakterij v izhodni kulturi -> naredimo redčitve (-8 in -9) in damo na LB
čez noč, preverimo odpornost, tako da damo na gojišče s Kn
3.) Izpostavitev celic žarkom UV in ponovne redčitve na LB
4.) Nekaj obsevanih celiv damo v tekoči LB
5.) Preštejemo zrasle kolonije in računamo titer in % preživelih
6.) Na plošče LB Kn damo kulturo iz tekočega gojišča, naredimo redčitve (-7 in -8) ter damo na LB
7.) Pikiranje (100 kolonij na novo LB z zobotrebcem)
8.) Kolonije odtisnemo na LB, MG z glc in MG z glc in pro
9.) Primerjava in % avksotrofnih mutant ter mutant z okvaro v biosintezi prolina

Question 4

Kako se izračuna titer?

Answer 4

Titer = (2010^4 + 28210^3)/2

Question 5

Kako se izračuna % preživelih?

Answer 5

Titer po UV/ titer pred UV * 100