Thème 10: Biotechnologies Flashcards
Qu’est-ce qu’est la biotechnologies?
Des techniques utilisant des organismes vivants pour en tirer des avantages
Qu’est ce que la génie génétique?
des techniques portant sur la manipulation direct des gènes à des fins pratiques (une branche de la biotechnologie)
Quelle est la différence entre le plasmide et les vecteurs?
Plasmide: Adn distinct de l’ADN bactérien
-réplication indépendante
-possède peu de gènes
-non essentiel mais avantageux
FORME: rond
Vecteur:-plasmide modifié pour les applications en biotechnologie
Quel sont les types de vecteurs?
clonage et expression
Qu’est ce qu’un vecteur de clonage?
Réplication d’un gène introduit (COPIE)
Ex: vend un vecteur avec le gène… UTILITÉ est de faire une copie
Qu’est ce qu’un vecteur d’expression?
expression du gène introduit (synthèse protéine)
Ex: gène pigment vert du colibri, veut faire un chat avec le poil vert, besoin d’une protéine
Expliquer l’amplification du gène par PCR (étapes + fonctions) ?
- Dénaturation: chauffage pour séparer brins d’ADN
- Hybridation: refroidissement permettant de coller les séquence à amplifier
- Élongation: ajout nucléotide par ADN polymérase aux extrémités
bref: ajout sites de restriction aux extrémités des amorces pour permettre le clonage d’un vecteur
Quelle est la première étape du clonage d’un vecteur et ses 3 sous-étapes?
Insertion du gène d’intérêt
1. obtention du vecteur et de l’ADN
2. Couper le vecteur et le gène d’intérêt avec la même enzyme de restriction
3. Mélange du vecteur et du gène + ligation
Quelles sont les avantages et les inconvénients de l’amplification du gène d’intérêt par PCR?
avantages:
-rapide (milliards copie en quelques heures)
-sélectif (amplifie le fragment désiré uniquement)
inconvénients:
-introduction d’erreurs par l’ADN polymérase
Qu’est ce que fait l’électrophorèse sur le gel?
-séparation fragment d’ADN selon leur taille
-permet de purifier le gène amplifié par PCR
Qu’est ce que fait l’enzyme de restriction?
-reconnaît le site de restriction
-COUPE à un endroit précis du site de restriction
Qu’est ce qu’un site de restriction?
séquence d’ADN reconnue par une enzyme de restriction
-souvent des palindromes
- 5’-GAATCC-3’
- 3’-CTTAAG-5’
Qu’est ce que l’ADN ligase?
un enzyme qui forme une liaison phosphodiester entre le nucléotide du vecteur coupé et celui du gène amplifié par PCR
Expliquer la ligation du vecteur?
réunion de deux fragments d’ADN
-appariement des extrémités cohésives complémentaires du vecteur coupé et du gène amplifié pas PCR
Quel est le but de la transformation dans le clonage moléculaire?
Faire entrer le vecteur recombiné dans une bactérie, une levure (modifications post-traductionnelles) ou celllule animale
Quel est l’avantage des levures par rapport aux bactéries dans l’étape de la transformation?
Modifications post-traductionnelles
Distinguer vecteur recombiné d’un vecteur non recombiné?
vecteur recombiné: vecteur + gène d’intérêt
vecteur non recombiné: vecteur vide (pas gène d’intérêt)
Nommer et expliquer une technique de transformation dans le clonage moléculaire?
Injection d’un vecteur recombiné avec une aiguille microscopique
Quel est le rôle des antibiotiques?
sur une gélose sélective, tue les cellules non transformé (absence vecteur), donc seulement cellules qui ont le gène survivront
Quel est le rôle du X-gal dans l’étape de la mise en culture?
Différencier les cellules ayant un vecteur recombiné vs. un vecteur non recombiné
Certains vecteur contiennent le gène lacZ mais qu’est ce que cela permet?
-hydrolyse de X-gal donc formation d’un produit bleu
-insère le gène d’intérêt dans le gène lacZ donc rend le gène lacZ non fonctionnel
(regarder TABLEAU diapo 16)
Qu’est ce que le clonage d’organismes?
une production d’organismes génétiquement identique au parent
Quelles sont les deux types de clonage d’organisme et expliquer?
- Clonage reproductif
- production de nouveaux individus (en entiers) - Clonage thérapeutique
-production de cellules souches embryonnaires pour traiter les maladies (toujours compatible, pas de rejet)
Expliquer le but du clonage humain?
BUT: production de cellules souches
ex: cellules pancréatiques, neurones (Parkinson) et cellules de la moelle osseuse (cancer)
POUR GUÉRIR LES MALADIES
Qu’est ce qu’une cellule souche totipotente?
peuvent se différencier en tous les types cellulaires présents dans l’embryon incluant les membranes extra-embryonnaires
Qu’est ce qu’une cellule souche pluripotente?
peuvent se différencier en tous les types cellulaires présents dans l’embryon excluant les membranes extra-embryonnaires
Qu’est ce qu’une cellule souche multipotente?
peuvent se différencier en plusieurs types de cellules mais déjà engagé dans une certaine direction