Testes laboratoriais Flashcards
Qual a importância dos testes laboratoriais:
Esses teste são importantes da identificação completa de doenças -> Câncer de mama e COVID.
Testes que utilizam DNA/RNA
- pré natal invasivo -> anniocentese e biópsia das vilosidades coriônicas
- FISH e CGH
- PCR
- Seq. genético
Testes que usam proteínas presente no corpo:
Imunohistoquímica
ELISA
Western Blot
Diferencie os tipos de diagnóstico pré-natal invasivos:
Utilizados para identificação de doenças antes do nascimento.
Amniocentee - utiliza se o líquido amniótico retirado com auxílio de uma agulha e utrassom a fim de não machucar o feto.
Biópsia das vilosidades coriônicas - Retira se parte das vilosidades que formam o arcabouço placentário para análise.
Quais os tipos de coleta das vilosidade coronôides:
Transabdominal e transvaginal
Como é feita a preparação do material coletado no pré-natal:
Coleta -> cultura -> Agente antimitótico -> lise e fixação -> coloração com Giema -> análise.
Qual a função do agente antimitótico:
Parar o ciclo celular
Qual o papel do giemsa:
Coloração dos cromossomos
Bandas escuras -> ricas em bases A-T -> “A noiTe”
Bandas Clars -> ricas em bases G-C -> ativos
Translocação Robertosiana
Rearranjo cromossomal, onde parte de um cromossomo é recebido por outro.
Ex. Parte do 14 -> 21
Isocromossomos -> Duplicação do braço maior do cromossomo
Deleção -> perda de um ou parte de um cromossomo
Teste FISH
Neste teste utiliza-se sondas (bases complementares) com corante que emitem luz, as sondas são adicionadas aos preparados e emitem luz quando encontram seu par correspondente, permitindo a identificação da presença ou ausência de um gene.
Ao adicionar uma sonda, se ela emite luz -> ligação a sequência correspondente - preença do gene.
Ao adicionar uma sonda, se ela não emite luz -> não há ligação com o complemento - gene ausênte.
CGH
Neste teste, utiliza se grupos controle para análise de todo genoma.
- Um DNA controle é corado e o DNA a ser analisado também é corado com uma cor diferente do controle.
- Esses preparados são misturados e os resultados obtidos analisados
Se cor resultante for igual ao DNA analisado -> ganho de genes
Se cor resultante for igual ao DNA controle -> perda de gene/deleção
Se cor resultante for diferente das iniciais (mistura) -> genes comuns entre controle e DNA analisado.
Qual a diferença entre FISH e CGH
Amplitude da análise -> o FISH é um teste restrito a análise de um gene (presença/ausência). Por outro lado, o CGH é um teste mais amplo realizado a partir da análise todo genoma.
PCR
Técnica que permite analisar o DNA sem a necesidade de um organismo vivo.
- DNA é coletado
- A célula é misturada com detergente para rompimento da membrana plasmática e isolamento do material genético.
- Junto ao DNA coletado e agora separado é adicionados a TAQ-polimerase, os fragmentos de DNA (primers).
- O preparado é colocado para ciclos de 3 fases que são repetidos quantas vezes for necessário
- Coloca se o DNA amplificado em gel de agarose, onde é possível observar em qual peso molecular o primer se ligou -> se o primer não se liga -> ausência do gene estudado.
Quais são as 3 etapas do ciclo da PCR:
DESNATURAÇÃO DA FITA
ANELAMENTO - HIBRIDIZAÇÃO COM O PRIMER
EXTENSÃO
Qual a etapa a mais é acrescida na PCR, quando o objetivo é avaliar RNA:
transcriptase reversa
Sequenciamento genético
Permite a identificação de cada nucleotídeo que constituí o genoma.
Para realização deste teste, a ligações fosfodiéster entre os nucleotídeos da fita nova são modificadas. Quando a polimerase tenta adicionar um nucleotídeo a sua fita complemento, este nucleotídeo é conduzido através um capilar ao invés de serem adicionados a fita, assim é possível identificar todos os nucleotídeos que seriam o complemento da fita base.
Princípio dos testes imunoenzimáticos
Para realização destes testes, são consideradas as ligações entre antígeno e anticorpo.
- O anticorpo é modificado, de modo que, emite luz quando encontra seu antígeno -> colorimetria.
- Sem a necessidade de um organismo vivo
Testes imunohistoquímicos
Está técnica permite a identificação da presença ou ausência de um antígeno em um corte histológico.
- O corte histológico é preparado -> biopsia
- Anticorpo é adicionado e o preparado é lavado
- Anticorpo secundário é adicionado e observa-se o comportamento do preparado.
- Caso há mudança de cor/Emissão de luz observa se que a reação aconteceu e o antígeno está presente.
ELISA
Exame realizado para detecção de antígenos presente em fluídos corporais
- Em um recipiente com anticorpos é colocado o fluído do paciente
- Detecção do antígeno, caso o antígeno, o anticorpo se liga atraindo o anticorpo secundário
- Reação colorimétrica
ELISA - PRÉ NATAL
Técnica que se baseia na identificação da presença de uma proteína fetal no sangue da mãe. Essa proteína (alfa sérica materna) é produzida pelo feto na sétima semana e assa para a mãe após a décima quarta semana. Caso a proteína seja encontrada antes desse período ou não seja encontrada depois dese tempo, a indicação de um problema.
essa proteína não tem função no adulto e deve ter papel regulador da ploriferação no feto
Wastern Blot
Teste imunoenzimático que permite a observação da presença de proteínas searadas por peso molecular.
1. Proteínas são separadas
2. Recebem carga negativa para correr no gel
3. No gel as proteínas ficam separadas de acordo com seu peso
Mais leves - embaixo
mais pesada - embaixo
