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PRC - Procesamiento Citológico Y Tisular > TEMA 2: Microscopía Y Procesamiento De Muestras. > Flashcards

TEMA 2: Microscopía Y Procesamiento De Muestras. Flashcards

1
Q

¿Qué nos permite ver la microscopía?

A

Permite visualizar la organización y composición de los tejidos, tal como las características internas de las células.

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2
Q

¿Qué son los microscopios?

A

Son instrumentos de óptica que permiten observar organismos y estructuras que son imposibles de ver a simple vista.

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3
Q

¿Qué nos permite la microscopía óptica?

A

Permite conocer las microestructuras de las muestras biológicas mediante la interacción con un haz de luz (fotones).

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4
Q

Tipos de microscopio óptico:

A
  • Simple o lupa.
  • Óptico convencional.
  • Campo oscuro.
  • Contraste de fases.
  • Interferencia.
  • Estereoscópico.
  • Invertido.
  • De fluorescencia.
  • Confocal.
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5
Q

¿Qué nos permite la microscopía electrónica?

A

Permite observar estructuras y componentes intracelulares con un poder de resolución superior a cualquier otro tipo de microscopios.

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6
Q

Características de la Microscopía Electrónica:

A
  • No usa lentes, sino imanes que concentran los haces de electrones emitidos por un filamento.
  • Los cambios de aumentos se consiguen variando la velocidad de los electrones.
  • Son aparatos grandes.
  • El viaje de los electrones ocurre en vacío.
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7
Q

Tipos de Microscopios Electrónicos:

A
  • Microscopio Electrónico de Transmisión —> TEM.
  • Microscopio Electrónico de Barrido —> SEM.
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8
Q

Características del TEM (Microscopio Electrónico de Transmisión):

A
  • Funciona por desplazamiento de electrones en el vacío de un tubo, en el que termina atravesando la muestra.
  • Se observan como zonas oscuras.
  • Puede llegar al millón de aumentos.
  • Se puede visualizar la mayor parte de las macromoléculas biológicas.
  • Portaobjetos: Rejillas de cobre o níquel.
  • El haz de electrones no es capaz de atravesar el vidrio del portaobjetos.
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9
Q

Características del SEM (Microscopio Electrónico de Barrido):

A
  • Un haz de electrones no atraviesa la muestra, sino que realiza un barrido por la superficie de esta.
  • La muestra está recubierta de una capa metalizada que produce una emisión de electrones secundarios.
  • Los electrones son captados por un detector, integrados y proyectados en la pantalla de un monitor.
  • Permite observar la superficie de especímenes gruesos, e incluso de organismos enteros que previamente han sido fijados y metalizados.
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10
Q

¿Para qué se realiza un registro de la muestra?

A

El registro de la muestra es obligatorio, pues es para evitar su pérdida.

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11
Q

¿Qué debe incluir la petición para el estudio de la muestra?

A
  • Datos del paciente.
  • Datos del servicio de biopsia.
  • Origen anatómico de la muestra.
  • Anamnesis y posible diagnóstico.
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12
Q

¿Qué se hace con las muestras que NO son de interés?

A

Se conservan y almacenan temporalmente, que esto depende de lo que se tarde en proporcionar un diagnóstico definitivo.

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13
Q

¿Qué debemos incluir en el registro?

A

Tallado, método de fijación y tinción, características macroscópicas, descripción microscópica y diagnóstico de patólogos.

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14
Q

¿Qué se debe tener en cuenta en la descripción macroscópica de órganos huecos?

A
  • Forma, tamaño, serosa.
  • Peso.
  • Pared: Espesor y consistencia.
  • Mucosa: Color, pliegues, aspecto.
  • Luz.
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15
Q

¿Qué se debe tener en cuenta en la descripción macroscópica de órganos parenquimatosos?

A
  • Forma, tamaño, color.
  • Peso.
  • Consistencia.
  • Superficie.
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16
Q

¿Cómo se pueden llamar también a los órganos parenquimatosos?

A

Órganos macizos.

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17
Q

¿Qué se debe tener en cuenta en la descripción macroscópica de muestras de pequeño tamaño?

A
  • Tamaño.
  • Color.
  • Consistencia.
  • Peso.
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18
Q

¿Qué se debe hacer en el tallado de muestras?

A

Se deposita en el casete identificado con el nº de biopsia y región anatómica de donde procede:
- Muestra pequeña: Se deposita directamente.
- Muestra grande: Se realiza un tallado macroscópico antes.

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19
Q

¿Cuáles son las etapas de la técnica histológica?

A
  1. Fijación.
  2. Lavado, deshidratación y aclaramiento.
  3. Inclusión.
  4. Tinción.
  5. Montaje.
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20
Q

¿Para qué sirve la fijación?

A

Para mantener las mismas características de la muestra a cuando estaba en el organismo, pues se provoca la interrupción de los procesos de degradación que aparecen tras la muerte celular.

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21
Q

¿Qué errores pueden ocurrir en la fijación?

A
  • Defecto en la fijación.
  • Fijador inadecuado.
  • No se fija de manera indefinida.
  • Tejido mal fijado —> Inservible.
22
Q

Características para elegir un buen fijador:

A
  • Velocidad de penetración.
  • Velocidad de fijación.
  • Endurecimiento.
  • Ósmosis y pH —> Soluciones amortiguadoras.
  • Efecto mordiente.
  • Generación de artefactos = Errores.
23
Q

¿Cuál es la diferencia de la “velocidad de penetración” y la “velocidad de fijación”?

A

La velocidad de penetración depende más del tipo de muestra que tengas que del fijador, en cambio la velocidad de fijación, depende del fijador, no de la muestra.

24
Q

¿A qué nos referimos con “efecto mordiente”?

A

A la afinidad que tiene el fijador por cierto tipo de tinte.

25
Q

¿De qué depende la clasificación de un fijador?

A

Se clasifican dependiendo del mecanismo de actuación, de si es físico o químico.

26
Q

Dentro de los Métodos Físicos de fijadores: ¿Qué tipos hay?

A
  • Congelación.
  • Criodesecación.
  • Criosustitución.
27
Q

¿En qué se diferencian los métodos de fijación físicos de los químicos?

A

Los métodos físicos se llaman como tal porque realizan una congelación rápida del tejido para su estabilización, en cambio, los químicos emplean soluciones fijadoras para mantener las moléculas del tejido original.

28
Q

Características de la congelación:

A
  • Sirven para realizar estudios morfológicos y funcionales, pues las enzimas y anticuerpos se conservan bien.
  • Es inmediato, adecuado para análisis transoperatoria (N líquido: -196ºC; Hielo seco: -78ºC).
  • Conservación complicada.
  • Se aplican crioprotectores.
29
Q

Pon ejemplos de crioprotectores:

A
  • Dimetrilsulfóxido.
  • Alcoholes —> Glicerol o etilenglicol.
  • Azúcares —> Sacarosa.
30
Q

Características de la criodesecación:

A
  • Dos pasos para fijar:
    1. Fijación instantánea en N líquido —> Se congela.
    2. Desecación porque se sublima (sólido —> gaseoso) el hielo, entonces se elimina el agua.
  • No se producen las reacciones químicas, por lo que la estructura antigénica del tejido se conserva intacta.
31
Q

Características de la criosustitución:

A
  • También se comienza sometiendo el tejido a una congelación.
  • Se sustituye poco a poco el agua del tejido por una solución fijadora.
  • Todo ocurre en un congelador: Para mantener la Tª y no disminuir el punto de congelación del fijador.
32
Q

¿Cómo se le puede llamar también a la “criodesecación”?

A

Liofilización.

33
Q

¿Cuál es el método físico de fijación que no se suele utilizar?

A

La fijación por calor, pues genera deterioro a los tejidos.
Se suele utilizar como complemento a la fijación química.

34
Q

¿Qué tipos de métodos de fijación químicos hay?

A
  • Inmersión.
  • Perfusión.
35
Q

Características de la inmersión:

A
  • El tejido es sumergido completamente en una solución fijadora.
  • La velocidad depende del tamaño y arquitectura de la muestra.
  • Es uno de los más utilizados rutinariamente en los laboratorios de Anatomía Patológica.
36
Q

Características de la perfusión:

A
  • Se introduce la solución fijadora a través del sistema circulatorio.
  • Se elimina la sangre con una solución de lavado y, seguidamente, se inserta el fijador.
  • Muy efectiva.
  • Se puede fijar un animal completo u órgano/tejido.
  • Requiere preparación previa para no romper los vasos sanguíneos —> Porque se usan bombas.
37
Q

¿Qué tipos de fijadores químicos existen?

A
  • Simples.
  • Mezclas o compuestos.
38
Q

¿Cuál es la diferencia entre los fijadores químicos simples y los compuestos?

A

Los simples están compuestos por un único agente de fijación, en cambio, los compuestos son mezclas de diferentes fijadores.

39
Q

Ejemplos de fijadores químicos simples:

A
  • Etanol.
  • Ácido acético.
  • Ácido pícrico.
  • Formaldehído = Formol.
  • Glutaraldehído.
  • Tetróxido de osmio.
40
Q

Ejemplos de fijadores químicos compuestos y los fijadores de los que están compuestos:

A
  • Líquido de Bouin = Ácido pícrico + Formaldehído + Ácido acético glacial.
  • Karnoy = Etanol absoluto + Ácido acético glacial + Cloroformo.
  • Mezclas con formaldehído = Formaldehído + Fijador complementario.
  • Glutaraldehído + Tetróxido de osmio.
41
Q

¿Qué es la descalcificación?

A

Es la completa eliminación de las sales de calcio presentes en los tejidos óseos.

42
Q

¿Cuáles son los principales reactivos que se utilizan para la decalcificación?

A

Los ácidos inorgánicos fuertes, ácidos débiles y ácidos orgánicos y los ácidos quelante.

43
Q

Ejemplos de ácidos inorgánicos fuertes:

A
  • Ácido nítrico.
  • Ácido clorhídrico.
44
Q

Ejemplos de ácidos orgánicos:

A
  • Sulfuroso.
  • Fórmico.
  • Acético.
  • Tricloroacético.
45
Q

Ejemplos de agentes quelante:

A
  • Sustancias orgánicas —> EDTA.
46
Q

¿Cuándo se realiza la descalcificación?

A

Cuando se procesan tejidos mineralizados y cuando hay minerales en los tejidos que impiden obtener buenas secciones.

47
Q

Carcterísticas de la descalcificación:

A
  • Efectiva.
  • Muy prolongado en el tiempo.
  • Temperaturas entre 25-60ºC.
  • Aplican agitación mecánica.
  • Añaden resina para el intercambio iónico.
48
Q

Características de la descalcificación y reblandecimiento tisular:

A
  • La descalcificación se realiza una vez terminada la fijación.
  • Debe encontrarse en un volumen muy elevado.
  • La concentración debe ser adecuada.
  • No dejar en el fondo.
  • Al terminar —> Lavar la pieza para quitarle los restos de ácido.
49
Q

¿Qué es un artefacto?

A

Es un fallo en el procesamiento de la muestra que puede generar efectos no deseados y resultados no adecuados en la observación microscópica.

50
Q

¿Cuáles son los artefactos más comunes?

A
  • Fallos en la tinción.
  • Aparición de burbujas.
  • Cortes muy gruesos.
  • Deterioro tisular durante el tallado.
  • Degeneración del tejido en el proceso de fijación.
  • Pliegues producidos por los cortes.

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