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Biología Molecular > Técnicas > Flashcards

Técnicas Flashcards

1
Q

De que tejidos (y mas especificamente, de que célula) se hace el cariotipo mas frecuentemente?

A

De la sangre (leucos) o de la piel (fibroblastos)

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2
Q

En la generación del cariotipo, porque se usa la colchicina?

A

Inhibe los microtúbulos- detiene la mitosis.

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3
Q

Que es un mitógeno y cual es el que mas se usa?

A

Induce la mitosis- fitohemaglutinina (FHA)
Mitogenos de LT- FHA, concavalina A, Pokeweed, IL-2
LB- LPS, VEB, Pokeweed

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4
Q

Que significa que un cariotipo sea de “alta resolución”?

A

Que fue hecho en prometafase y se ve el mayor detalle posible (3 megabases)

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5
Q

V F: El cariotipo se puede usar para diagnosticar acondroplasia.

A

FALSO. La acondroplasia se da por una mutación en el gen FGFR3. El cariotipo no ve cmabios de menos de 3 mega bases.

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6
Q

V F: Se puede utilizar el cariotipo para detectar síndrome de X frágil

A

VERDADERO. Son mas de 3 mega bases.

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7
Q

El cariotipo mas utilizado es el de Bandas G. Con que se deben teñir los cromosomas para lograr esto?

A

Giemsa-Tripsina-Giemsa

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8
Q

Qué te permite ver el cariotipo de bandas NOR?

A

regiones organizadoras nucleolares

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9
Q

Cuales son las características que separan a una molécula en la electroforesis?

A

Carga y peso molecular.

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10
Q

V F: El DNA corre de negativo a positivo en la electroforesis

A

VERDADERO

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11
Q

Cual es la capacidad de discriminación de una electroforesis en un gel de agarosa?

A

30 a 50 bases

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12
Q

V F: Las enzimas de restricción, por lo general cortan utilizan secuencias palindromicas de 4-6 pares de bases.

A

VERDADERO

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13
Q

Cuando una enzima de restricción corta, que tipo de extremos pueden quedar?

A

Extremos romos o pegajosos.

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14
Q

Tres enfermedades en las que se puede usar Souther Blotting?

A

X- Frágil, Huntington, Ataxia espinocerebelosa.

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15
Q

Cuales son los pasos del Southern Blotting?

A
  1. DNA genomico (completo)
  2. lo expones a enzimas de restriccion
  3. lo corres por electroforesis
  4. se tiñe el DNA con Bromuro de etidio y lo desnaturalizas (BTW el bromuro es cancerigeno)
  5. lo transfieres a un gel de nitrocelulosa o nylon por capilaridad
  6. se le agrega una sona especifica para revelar el fragmento que se busca (ssDNA- marcado con fluorecencia)
  7. Lavar
  8. revelar con rayos x
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16
Q

V F: El Southern Blotting se utiliza para ver alteraciones cromosimicas, alteraciones de metilacion, inserciones o duplicaciones (grandes).

A

FALSO. Se usa para ver enfermedad por expansion de trinucleotidos, mutaciones puntuales (con sonda especifica)

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17
Q

Para que se usa el Northern Blotting y el Western Blotting?

A 
Northern = RNA-DNA
Western = proteinas- Ac
18
Q

Para que sirve la PCR?

A

Amplificación enzimatica de un fragmento de DNA localizado entre 2 primers.

19
Q

Cuales son los pasos, cuanto duran y a que temperatura del PCR? (perdonen, se que es una mentada pero lo pregunto en el parcial)

A
  1. Desnaturalización del DNA- 1 min a 94º
  2. Hibridacion- 45 seg a 54º
  3. extension- 2 min a 72º
20
Q

Cuantas copias de DNA se generan en la PCR (en gral)?

A

3.4 x 10 ^10 ó 2^35

21
Q

En que paso del PCR se agrega la Taq Polimerasa?

A

Hibridacion

22
Q

V F: el PCR sensible a metilaicon se puede utilizar para detectar el sx de Prader-Willi

A

VERDADERO

23
Q

Para que se usa el RT-PCR

A

Estudio de RNA- lo convierte en cDNA (solo exones)

24
Q

Cual es el principal uso del Q-PCR?

A

Alteraciones dosis-genica

25
Q

V F: El Q-PCR se puede usar ara detectar cargas virales.

A

VERDADERO

26
Q

V F: El Q-PCR se puede usar para detectar alteraciones cromosómicas grandes.

A

FALSO

27
Q

Que es y para que sirve el PCR-RFLP?

A

Fragmentos de resticcion de longitud polimorfica por PCR. Amplificas una region de DNA por PCR y después agregas una enzima de resticcion que tenga el sitio mutado que quieres analizar y ves si corto o no.

28
Q

Para que se utiliza PCR-RFLP?

A

Para mutaciones puntales, deleciones o duplicaicones pequeñas previamente identificadas. TIENES que saber que es lo que buscas. No se ven cambios de mas de 8 bp.

29
Q

Que tienen de especial los nucleotidos que se usan para la secuenciacion de Sanger?

A

Son ddNTP (di de oxi)- le faltan dos oxigenos, entonces ya no sigue la reaccion. Aparte los marcan con fluorecencia.

30
Q

V F: Para la secuenciación de Sanger se necesitan correr 2 PCR, una normal y otra con primers solo en el sentido 5’.

A

VERDADERO

31
Q

Cual es la utilidad de la electroforesis en la Secuenciación de Sanger?

A

Se corre la electroforesis para separar los fragmentos de diferentes tamaños para que después lo puedas leer.

32
Q

V F: La secuanciacion te permite ver mutaciones puntuales, ya sea en estado homo u heterocigoto.

A

VERDADERO. Lo que no se puede ver son deleciones grandes o duplicaciones en estado heterocigoto.

33
Q

Para que sirve MLPA?

A

Permite amplificar en una reacción, con el mismo par de cebadores y en las mismas condiciones, multiples secuencias de DNA.

34
Q

V F: Con MLPA es posible ver la dosis-génica.

A

VERDADERO, siempre y cuando lo hagas con un stuffer con inmunofluorecencia.

35
Q

Como se hace la técnica de MLPA?

A

1) pones el DNA genomico con sondas diseñadas espcificamente para la region que quieres estudiar. Cada region a estudiar le corresponden dos sondas que deben de hibridar pegaditas. Cada sonda tienen un struffer que es como un colita de diferentes tamaños que te permite identificarlo.
2) Le podes ligasa entonces van a juntar las sondas.
3) pones oligos universales que se pegan al final de los stuffers y lo metes a PCR.
4) Corres el electroforesis y como ya sabes el tamaño de las cosas, ves si hay o no.

36
Q

V F: Se pueden ver alteraciones cromosómicas con MLPA

A

VERDADERO, siempre y cuando uses sondas que cubren varias partes del mismo cromosoma.

37
Q

Como se pueden ver traslocaciones en FISH?

A

Diseñas la sonda para que se pegue justo arriba y otra justo abajo de la zona que quieres estudiar entonces si la fluorecencia se queda pegado, sabes que hay traslocacion.

38
Q

Cual es la principal desventaja del FISH?

A

Sólo se ve lo que estas buscando.

39
Q

Que se usa como control en la técnica de FISH?

A

Se marca el centrómero con DAPI

40
Q

V F: Para que la CGH se pueda llevar a cabo, se necesitan dos muestras del paciente, tomadas en diferente momento.

A

FALSO. Se necesita una muestra del paciente y una muestra del control (que si el px es mujer, el control debe de ser hombre y vice versa)

41
Q

Cómo se ve la ganancia y pérdida en la técnica de CGH?

A 
Ganacia = verde
Pérdida = rojo
42
Q

Que resolución tiene un CGH?

A

Igual que el cariotipo- 3 mega bases.

Biología Molecular (6 decks)

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