Technologies de l'ADN Flashcards
Enzyme qui coupe les ADN/ARN à partir d’une extrémité
Exonucléase
Enzyme qui coupe les ADN/ARN au milieu de la chaine
Endonucléase
Que produisent les endonucléases ?
Des fragments
Endroits caractérisés par des séquences de nucléotides spécifiques
Sites de restriction
Pourquoi les bactéries ont des enzymes de restriction ?
Défense contre virus/bactéries en coupant ADN étranger en morceaux
Type de séquence reconnu par la grande majorité des enzymes de restriction ?
Palindromique
Type de bouts produits par l’enzyme de restriction HAEIII
Francs
Type de bouts produits par l’enzyme de restriction EcoRI
Collants
Type de bouts produits par l’enzyme de restriction HindIII
Collants
Cartographie de restriction des ADN isolés d’organismes / virus ?
Restriction mapping
Une fois coupés, les fragments d’ADN peuvent être séparés selon la taille par ___________.
Électrophorèse sur gel d’Agarose
L’ADN est chargé _____________.
Négativement
Que permet le mélange de l’ADN à la Bromure d’Éthidium ?
Savoir la taille des fragments d’ADN
Enzyme qui permet de joindre deux fragments d’ADN ensemble ?
Ligase
Élément nécessaires au processus de ligation ?
Ligase
ATP
V/F : la ligation de bouts francs est 100x plus efficace que celle de bouts collants ?
FAUX ; les bouts collants se lient plus efficacement
Ligament du fragment d’ADN dans un vecteur
Cloning
Cercle d’ADN bicaténaire qui peut se répliquer de façon autonome dans un organisme hôte
Plasmide
Qu’est-ce qu’un vecteur ?
Plasmide manipulé en laboratoire dans lequel ont peut insérer des fragments d’ADN
V/F : lors de la transformation, toutes les C vont recevoir un plasmide
FAUX ; l’efficacité de la transformation n’est PAS 100%
Moyen d’identification des C qui ont reçu un plasmide
Marqueur de sélection
Quel gène est généralement utilisé comme marqueur de sélection ?
Résistance à un antibiotique
Ex : Ampicilline
Utilisations possibles de l’ADN amplifié
- Préparer une grande Qt d’insert (séquencer l’insert)
- Poursuivre un autre clonage avec ce plasmide
- Production de protéines recombinantes
Exemples de protéines recombinantes
Insuline
Hormone de croissance humaine (GH)
Que permet d’étudier les GFP ?
- Niveau de transcription d’un gène
- Niveau de traduction
- Localisation cellulaire de protéines
- Co-localisation cellulaire
V/F : l’ADN dénaturé peut se renaturer en ADN double brin lorsqu’on revient aux bonnes conditions
VRAI
Moyen de détecter une mutation dans un gène
Méthode de Sanger
Étapes de la méthode du didéoxy
- Séparation des brins et ajout d’amorce
- Ajout (amorce, desoxynucléotides, dNTPs, ADN pol)
- Séparation du gel et détection des brins synthétisées par extension de l’amorce
- Lecture de la séquence sur gel
V/F : l’ADN polymérase de nécessite PAS d’amorce
FAUX ; nécessite une amorce
Étapes du cycle PCR
- Séparation des brins (95)
- Hybridation des amorces (55)
- Synthèse par TaqI ADN polymérase (72)
Température de synthèse par la Taql ADN polymérase
72 degrée C
Plus les amorces sont longues, plus elles sont ________.
Spécifiques
Combien de cycle de PCR pour obtenir 1 milliard de copies ?
30
STR
2-6 nucléotides
VNTR
10-100 nucléotides
Emplacement précis et invariable sur un chromosome
Locus
V/F : un locus se situe toujours sur un gène
FAUX ; pas nécéssairement
Qu’est-ce qui permet de distinguer l’ADN d’une personne à une autre ?
Polymorphisme de STR/VNTR
Site dans l’ADN où les individus diffèrent selon une seule base d’ADN
SNP
Traits génétiques pouvant être associés aux SNPs
Couleur yeux / cheveux
Performance musculaire
Comportement social
Hérédité / susceptibilité maladies
Réponse aux médicaments
2 types de SNPs
Liés
Causatifs
2 types de SNPs causatifs
Régions codantes
Régions non-codantes
Particularités des SNP liés
Sont à proximité d’un géne causant un trait génétique
Ne causent pas de traits mais servent de marqueurs
Particularités des SNP causatifs
Causent un trait génétique
Particularités des SNP causatifs de régions codantes
Peuvent affecter la séquence et la fonction des protéines
Particularités des SNP causatifs de régions non-codantes
Peuvent affecter l’épissage de pré-ARNm, la régulation d’un gène , niveau d’expression
Que permet CRISPR ?
Edition de génome de façon spécifique