Techniques de biologie moléculaire Flashcards
En quoi, lors d’un Northern Blot, utiliser une sonde complémentaire du gène de l’actine est utile ?
L’actine est une protéine présente dans toutes les cellules. Elle sert de témoin de charge car si l’on ne révèle pas de bande pour l’actine sur une piste, c’est qu’il y a eu un problème de manipulation.
Qu’est-ce qu’un consensus ?
C’est le fait d’aligner des séquences de nucléotides pour en déduire les nucléotides communs à ces séquences.
Pour marquer radioactivement de l’ADN, faut-il utiliser du Phosphate-32 ou du Souffre-35 ?
Il faut utiliser du Phosphate-32 car le souffre est absent des acides nucléiques.
Citez les 5 techniques d’hybridation :
Les sondes L'hybridation in-situ Western Blot Southern Blot Northern Blot
Qu’est-ce qu’une sonde ?
C’est une molécule d’ADN simple brin de séquence connue capable de se fixer après dénaturation sur une séquence complémentaire.
Qu’est-ce que l’hybridation in-situ ?
C’est une application directe de l’utilisation des sondes.
Quel est le principe des Blots ?
C’est de faire migrer un mélange de molécules sur gel par électrophorèse, puis le transférer sur une membrane mise en contact avec une sonde.
A quelle question répond un Southern Blot ?
“Est-ce que ce gène est présent dans tel génome ?”
A quelle question répond un Northern Blot ?
“Est-ce que ce gène est exprimé dans la cellule ?”
Quel est le principe de la transgénèse ?
C’est d’introduire un gène dans une cellule afin de le faire exprimé par le biais d’un plasmide.
Donner un exemple d’une transgénèse :
Gène codant pour la GFP chez la Souris (Fluorescence)
Quel est le principe de l’invalidation d’un gène par K.O. ?
C’est d’annuler l’effet d’un gène présent dans toutes les cellules d’un organisme.
Quel est le principe de la technique du gène rapporteur ?
C’est la transgénèse d’une fusion du promoteur de ce gène avec un gène codant pour une protéine facile à mettre en évidence.
A quelle question répond la technique de retard sur gel ?
“Est-ce que la protéine qu’on étudie est capable de se fixer sur la séquence ?”
Quel est le principe de la technique du retard sur gel ?
On fait migrer par électrophorèse la séquence d’ADN étudié sur une piste, et sur une autre piste, cette même séquence mise en contact avec une protéine susceptible de se fixer dessus.
