Techniques de biologie moléculaire Flashcards
En quoi, lors d’un Northern Blot, utiliser une sonde complémentaire du gène de l’actine est utile ?
L’actine est une protéine présente dans toutes les cellules. Elle sert de témoin de charge car si l’on ne révèle pas de bande pour l’actine sur une piste, c’est qu’il y a eu un problème de manipulation.
Qu’est-ce qu’un consensus ?
C’est le fait d’aligner des séquences de nucléotides pour en déduire les nucléotides communs à ces séquences.
Pour marquer radioactivement de l’ADN, faut-il utiliser du Phosphate-32 ou du Souffre-35 ?
Il faut utiliser du Phosphate-32 car le souffre est absent des acides nucléiques.
Citez les 5 techniques d’hybridation :
Les sondes L'hybridation in-situ Western Blot Southern Blot Northern Blot
Qu’est-ce qu’une sonde ?
C’est une molécule d’ADN simple brin de séquence connue capable de se fixer après dénaturation sur une séquence complémentaire.
Qu’est-ce que l’hybridation in-situ ?
C’est une application directe de l’utilisation des sondes.
Quel est le principe des Blots ?
C’est de faire migrer un mélange de molécules sur gel par électrophorèse, puis le transférer sur une membrane mise en contact avec une sonde.
A quelle question répond un Southern Blot ?
“Est-ce que ce gène est présent dans tel génome ?”
A quelle question répond un Northern Blot ?
“Est-ce que ce gène est exprimé dans la cellule ?”
Quel est le principe de la transgénèse ?
C’est d’introduire un gène dans une cellule afin de le faire exprimé par le biais d’un plasmide.
Donner un exemple d’une transgénèse :
Gène codant pour la GFP chez la Souris (Fluorescence)
Quel est le principe de l’invalidation d’un gène par K.O. ?
C’est d’annuler l’effet d’un gène présent dans toutes les cellules d’un organisme.
Quel est le principe de la technique du gène rapporteur ?
C’est la transgénèse d’une fusion du promoteur de ce gène avec un gène codant pour une protéine facile à mettre en évidence.
A quelle question répond la technique de retard sur gel ?
“Est-ce que la protéine qu’on étudie est capable de se fixer sur la séquence ?”
Quel est le principe de la technique du retard sur gel ?
On fait migrer par électrophorèse la séquence d’ADN étudié sur une piste, et sur une autre piste, cette même séquence mise en contact avec une protéine susceptible de se fixer dessus.
Qu’est-ce qu’une enzyme de restriction ?
C’est une endonucléase spécifique d’une séquence.
Qu’est-ce qu’une endonucléase ?
C’est une enzyme qui coupe un acide nucléique en fragments plus courts. Elle est capable de couper en milieu de chaine.
