Technique PCR

Question 1

C’est quoi une reaction en chaîne polymérases (PCR)

Answer 1

Beaucoup de copie de gene

Question 2

C’est quoi la polymérase chain reaction

Answer 2

Amplifier rapidement une séquence spécifique ADN
Rapide et efficace
Génère nombreuse copies identiques ADN

Question 3

C’est quoi les 3 étapes

Answer 3

Dénaturation
Hybridation
Élongation

Question 4

C’est quoi la dénaturation

Answer 4

Haute température
95°C
Rompe liason H
Taq polymérase thermostable

Question 5

A quelle température est fait l’hybridation

Answer 5

Basse température

Question 6

A quelle température est fait l’élongation

Answer 6

Haute température

Question 7

Vrai ou faux
Dénaturation de l’ADN, l’hybridation des amorces, élongation des amorces avec une polymérase ADN thermostable

Answer 7

Vrai

Question 8

C’est quoi les 3 méthode de PCR

Answer 8

RT-PCR
QPCR
RT-qPCR

Question 9

C’est quoi la rt-PCR

Answer 9

Reverse transcriptase
ARN convertie en ADN
Peut pas amplifier - converti ADN - PCR normal

Question 10

C’est quoi la qPCR

Answer 10

Quantification acides nucléiques
Très sensible et spécifique
Basé sur fluorescence- pic sur graphique

Question 11

C’est quoi la RT-qPCR

Answer 11

Temps reel
Transcriptase inverse
Quantification ADN en temps reel
2 techniques combined

Question 12

C’est quoi les matériel nécessaire pour la PCR

Answer 12

Termocycler

Question 13

C’est quoi un thermocycler

Answer 13

Bloc thermique

Question 14

C’est quoi les méthodes de PCR qualitatif

Answer 14

Roche COBRA 4800 ou 6800)

Question 15

Pourquoi utilise ton une lumière UV pour la PCR

Answer 15

Détruit amplification ADN si non peut avoir réplication à température piece qui peut contaminer autre échantillon et donner faux positifs

Question 16

Vrai ou faux
La RT-PCR demande une incubation suplémentaire au début

Answer 16

Vrai

Question 17

C’est quoi les amorces

Answer 17

Courte séquence ARN et ARN

Question 18

C’est quoi les caractéristiques des amorces

Answer 18

Connaître séquence qu’on veut amplifier
Amorces doivent être complémentaire des brins ADN existants
Amorces orientées dans le bon sens (5’ - 3’)
Longueur entre 20 et 30 pd

Question 19

Vrai ou faux

Amorce coutre prends moins de temps = augmente vitesse

Answer 19

Vrai

Question 20

C’est quoi le mastermix

Answer 20

ADN polymérase taq
Tampon
Nucléotide libre
Amorces spécifique
Sondes

Question 21

C’est quoi l’ADN polymérase

Answer 21

Responsable pour réaction polymérase
Thermostable

Question 22

Quelle substance a besoins la polymérase

Answer 22

Magnésium

Question 23

Vrai ou faux
Les sondes sont fluorophore

Answer 23

Vrai

Question 24

Vrai ou faux
On peut garder les contrôles a température de la piece

Answer 24

Faux

Garder au froid pour prévenir hybridation entre elle et l’activation non spécifique

Question 25

C’est quoi la stringence

Answer 25

Ensemble de conditions expérimentales de température Ph Force ionique Permet l’hybridation moléculaire

Question 26

Vrai ou faux Condition forte stringence = hybridation plus difficile = hybridation spécifique

Answer 26

Vrai

Question 27

Comment est ce que la température affecte la stringence

Answer 27

Aspect le plus contrôlable

Question 28

Si la température est plus haut que Tm qu’arrive t’il

Answer 28

Pas hybridation

Question 29

Si la température est égale au Tm qu’arrive t’il

Answer 29

Hybridation spécifique

Question 30

Si la température est plus bas que Tm qu’arrive t’il

Answer 30

Hybridation sur séquence complémentaire Non spécifique

Question 31

C’est quoi les caractéristiques de la sonde

Answer 31

Tm est plus bas le plus court la sonde Réaction plus vite avec sonde courte

Question 32

Comment est ce que la concentration de sel et pH affecte l’hybridation

Answer 32

Force ionique Ph alcalin favorise dissociation Ph acide peut dépuriner (brise ADN)

Question 33

C’est quoi le role des contrôles interne

Answer 33

Confirme reaction arrive Utilise virus inoffensif pour l’humain

Question 34

C’est quoi le contrôle négative

Answer 34

Spécimen négatif Tester en parallèle Prouve absence de contamination

Question 35

C’est quoi le contrôle positif

Answer 35

Spécimen positif Assuré bon fonctionnement