T3- Transformação de bactérias por DNA recombinante Flashcards
Para que serve o IPTG e porque se utiliza na transformação de bactérias?
O IPTG é um análogo da lactose que se liga ao repressor e inativa-o , fazendo com que o operão da lactose fique ativo e a transcrição se dê.
Neste caso, utilizamos o IPTG para que ocorra a ativação do repressor do operão da lactose, levando à expressão dos genes estruturais, neste caso, a β-galactosidade.
Para que serve o X-Gal?
O X-Gal é um cromogénio que por oxidação, na presença da β-galactosidase apresenta cor azul. Se a β- galactosidase não estiver ativa, o composto não é degradado e origina colónias brancas (o gene MCP1 não foi inserido).
Duas razões para, na preparação de células competentes, se colocar as células em gelo.
-Permitir que as nuclease não degradem o DNA
- A maturação das células competente em gelo previne o aparecimento de mutações espontâneas
O que é a Ampicilina e qual a sua função?
A ampicilina é um antibiótico adicionado ao meio para selecionar todas as bactérias em que o plasmídeo foi introduzido, uma vez que este possui um gene que codifica para a β-lactomase, que degreda antibióticos β-lactâmicos como a ampicilina.
Indique os métodos mecânicos de lise bacteriana?
Homegenizador de alta pressão, sonicação e moinho de contas.
Porque é que na transformação de células competentes, deixamos o DNA que queremos transformar em contacto com células transformantes durante 15 minutos?
É o tempo necessário para a bactéria expressar resistência ao antibiótico conferida pelo plasmídeo.
Num plasmídeo, qual a função do gene que confere resistência a um antibiótico?
Um gene que confere resistência a um antibiótico permite ao plasmídeo, quando inserido na bactéria, transmita-lhe esse gene e este ganhe a resistência ao mesmo. Desta forma, podemos verificar se a bactéria recebeu o plasmídeo ou não.
