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Laboratoire de Biochimie (BCM-1004) > Sondes moléculaires > Flashcards

Sondes moléculaires Flashcards

1
Q

Une sonde est une molécule qui a une _______ ________ pour la molécule que l’on veut détecter/quantifier. Qu’est-ce qui permet la détection de la molécule de manière stable, sensible et spécifique?

A
  • Affinité spécifique.

- Un traceur.

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2
Q

VRAI OU FAUX : un traceur est présent naturellement sans l’échantillon analysé et ne modifie pas l’affinité de la sonde pour sa cible.

A

FAUX, ne modifie pas l’affinité de la sonde pour sa cible mais n’est pas présent naturellement dans l’échantillon.

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3
Q

Nomme les 2 fragments d’un anticorps.

A
  • Fragment variable (Fab) → le haut du Y

- Fragment constant (Fc) → bas du Y

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4
Q

VRAI OU FAUX : les anticorps sont des immunoglobuline IgG, IgE ou IgM.

A

Vrai.

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5
Q

Nomme les deux types d’isotopes utilisés comme traceurs pour le marquage des sondes.

A
  • Instables (éléments radioactifs)

- Stables (ex : en RMN et spectrométrie de masse)

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6
Q

Tous les atomes d’un même élément possèdent …?

A

Le même nombre de protons (donc le même numéro atomique → mêmes propriétés chimiques). MAIS propriétés nucléaires différentes.

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7
Q

La stabilité du noyau dépend du ratio _____.

A

Ratio N/Z, N = nombre de neutrons et Z = nombre de protons.

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8
Q

Que ce passe t-il s’il y a trop de neutrons ou pas assez dans un noyau?

A

L’atome est instable et il émettra un rayonnement radioactif pour se stabiliser.

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9
Q

Suite à l’émission d’un rayonnement radioactif (alpha), que fait le noyau?

A

Le noyau instable se transforme en éjectant 2 neutrons et 2 protons simultanément.

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10
Q

Le rayonnement radioactif alpha est associé au élément du tableau périodique… ?

A

Z est plus grand ou égal à 52. Pouvoir pénétrant de quelques centimètres.

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11
Q

La majorité des traceurs radioactifs utilisés en biochimie sont des émetteurs de rayonnement …?

A

Beta. (si le nombre de protons change, il y a transmutation → transformation d’un élément chimique en un autre) . Pouvoir pénétrant = quelques mètres, aluminium = écran protecteur.

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12
Q

Décrit les rayonnements gamma et les rayons X.

A
  • Rayonnements très énergétiques
  • L’émission de ces particules peut accompagner l’émission de particules alphas ou beta.
  • Pouvoir pénétrant très élevé → quelques centaines de mètres (écran protecteur = béton ou plomb)
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13
Q

Nomme 3 exemples d’enzymes utilisés comme traceurs usuels pour le marquage des sondes.

A
  • Phosphatase alcaline.
  • Peroxydase du raifort (HRP)
  • B- galactosidase
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14
Q

Qu’est-ce qu’un traceur colorimétrique?

A

Une enzyme liée de façon covalente à la sonde. La réaction enzymatique avec un substrat est spécifique et génère un produit coloré que l’on peut mesurer.

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15
Q

VRAI OU FAUX : L’intensité de la couleur n’est pas proportionnelle à la quantité de sonde fixée à la cible lors de l’utilisation de traceurs colorimétriques.

A

Faux, habituellement proportionnel.

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16
Q

Explique comment faire un ELISA (traceur colorimétrique).

A
  1. Enrobage des puits avec un antigène (essai direct) ou capture d’un antigène avec un anticorps (méthode en sandwich).
  2. Blocage des sites de liaisons non-spécifiques.
  3. Ajout d’un anticorps spécifique qui se lie à l’antigène (anticorps primaire → détection directe) ou d’un anticorps spécifique et d’un anticorps secondaire (détection indirecte).
  4. Mesure du signal.
17
Q

Explique le principe des traceurs luminescents (enzymes).

A
  • Utilisation d’un substrat qui produit de la lumière lorsqu’il est transformé en produit → chimioluminescence.
  • L’intensité du signal lumineux est habituellement proportionnelle à la quantité de sondes fixées à la cible.
18
Q

Comment détecte-t-on la lumière lors de l’utilisation de traceurs luminescents?

A
  1. Luminomètre (ex : caméras CCD).

2. Autoradiographie → lumière émise impressionne le film au niveau du lieu de l’émission.

19
Q

Qu’est-ce que la fluorescence?

A

L’émission de la lumière par une substance absorbant des radiations et les émettent à des longueurs d’ondes plus grandes.

20
Q

Qu’est-ce qu’un fluorochrome?

A

Une molécule émettant de la fluorescence. (émission de lumière arrête dès que l’illumination cesse).

21
Q

Qu’est-ce que la phosphorescence?

A

L’émission de lumière continue après que l’illumination ait cessée.

22
Q

L’émission (en fluorescence) est toujours à une longueur d’onde ___ ______ que celle utilisée pour l’excitation.

A

Plus élevée.

23
Q

Que se passe-t-il si l’excitation n’est pas réalisée au pic d’absorption maximale?

A

L’intensité de la fluorescence émise est plus faible.

24
Q

Que peut-on utiliser pour exciter spécifiquement dans une gamme de longueurs d’onde (si la source de lumière est la lumière blanche)?

A

Des filtres, des LEDs ou des lasers dans une gamme de longueur d’onde très étroite ou une longueur d’onde précise.

25
Q

Des filtres de bandes passantes étroites permettent …?

A

L’excitation et la mesure de la fluorescence émise dans des gammes étroites de longueurs d’ondes → par exemple, peut permette de détecter le signal de fluorescence originant d’une molécule en particulier.

26
Q

À quoi sert un spectrofluorimètre?

A

Nécessaire pour connaître des longueurs d’ondes des pics d’absorption et d’émission.

27
Q

Nomme 3 applications courantes impliquant des fluorochromes.

A
  1. Détection des acides nucléiques sur gel
  2. Séquençage de l’ADN
  3. Microscopie à fluorescence.
28
Q

Nomme 4 applications courantes impliquant des sondes fluorescentes.

A
  1. Cytométrie en flux
  2. Hybridation des puces à ADN
  3. Microscopie à fluorescence
  4. FRET
29
Q

Comment s’effectue le marquage des sondes (conjugaison chimique)?

A

Couplage par la formation d’un lien chimique stable entre un traceur et une molécule de reconnaissance froide pour générer la sonde.

30
Q

Comment s’effectue le marquage des sondes (synthèse biochimique)?

A
  • Biosynthèse de composés complexes à partir de précurseurs munis du traceur.
  • Coupler un gène à celui codant pour une protéine fluorescente afin d’obtenir une protéine de fusion.
31
Q

Quelles sont les applications des sondes pour les acides nucléiques?

A
  • ELISA
  • Buvardage Southern/Nothern
  • Microscopie, cytométrie en flux, FRET et puces dADN
32
Q

Qu’est-ce que la digoxigénine?

A

Hormone de plante très rarement retrouvée dans les systèmes vivants. Hormone peut être détectée à l’aide d’un anticorps spécifique.

Laboratoire de Biochimie (BCM-1004) (4 decks)

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