PSV IV

Question 1

def vésicules extracell

Answer 1

vésicule dérivée de membranes cell sécrétée dans le milieu extracell

Question 2

membrane extracell

Answer 2

bicouche lipidique d’origine membranaire

des protéines sont enchâssées dans cette membrane:

-complexe CMH
-Marqueurs cell

Question 3

contenu ou cargo des vésicules extracell

Answer 3

protéines

acides nucléiques

acides aminés

Question 4

origine de ces vésicules

Answer 4

de tous les types cell

toutes les cellules en produisent

Question 5

localisation des vésicules

Answer 5

tous les liquides biologiques

Question 6

fonction des vésicules

Answer 6

outil de communication

signaux échangés:

-positifs
-négatifs

pour les chercheurs elles sont une source d’information via reconnaissance de leurs types de membranes, cette origine inclut le type cell mais également l’état de la cell d’origine

Question 7

types de vésicules extracell

Answer 7

exosomes
microvésicules
corps apoptotiques

Question 8

exosome

Answer 8

petites vésicules extracell
30-200nm
trop petite pour les voir au MO
formées par des phénomène d’exocytose et de relargage

Question 9

microvésicules

Answer 9

taille supérieur à 200nm

formées par bourgeonnement

Question 10

corps apoptotiques

Answer 10

encore de plus grande taille

Question 11

hétérogénéité des vésicules extracells

Answer 11

-mécanisme de biogénèse

-types cell d’origine

-état fonctionnel des cells qui les produisent

-diversité cargo

-diversité fonctions

Question 12

isoler les vésicules extracell

Answer 12

-des cultures in vitro: on récupère le surnageant
peut concernés les microorganismes car unicell

-des fluides biologiques:
-sang : il y a beaucoup de vésicules extracell

-l’urine

-des organes et tissus

Question 13

en clinique isolement

Answer 13

prélèvement sur une cohorte

taille et densité rendent difficile l’isolement , la taille des vésicules et proche de celle des VLDL et des Chylomicrons

densité proche de celles des HDL

proximité avec des caractéristiques de lipoprotéines

méthode d’isolement , être adaptée en fct de la source et des objectifs de recherche, on doit doubler le critère taille par le critère densité

Question 14

méthodes d’isolement

Answer 14

purifier les vésicules

il faut que la technique soit rapide et reproductible

Question 15

chromatographie par exclusion de taille

Answer 15

filtrations

utilisation de colonnes de chromatographie , où se trouve une phase stationnaire pourvue de pores au travers desquels seules les petites particules passent comme les vésicules

on peut faire une chromatographie basées sur la charges

Question 16

ultracentrifugation différentielle

Answer 16

centrifugation à très grande vitesse

centrifugation successives, on fait à chaque fois centrifugé le surnageant

Question 17

ultracentrifugation avec un gradient de densité

Answer 17

pls solutions d’un produit non réactif de densité croissante

ségrégation des constituants cells en étages de densité

Question 18

ultrafiltration

Answer 18

filtre qui ne laisse pas passer les VE

Question 19

précipitation

Answer 19

polyethylène , glycol

précipitation physico-chimique

Question 20

immuno isolation capture sur des perles

Answer 20

billes recouvertes d’anticorps dirigés contre les protéines membranaires des VE , les billes capturent les vésicules

Question 21

technique émergentes

Answer 21

fractionnement asymétrique de flux de champ-flux

Question 22

méthodes de detection et analyse

Answer 22

étudier les VE et leurs constituants membranaires mais également leur cargo

types cell similaires mais d’état différent

Question 23

microscopie

Answer 23

microscopie électronique:

-TEM
-Cryo-TEM

depuis plus récemment la microscopie à force atomique ou AFM

la microscopie permet l’analyse en particulier de la taille et de la orphologie des vésicules

mais ces techniques de microscopie sont difficiles à mettre en place nécessitent des plateformes dédiées, du temps de préparation et de manipulation de l’argent

Question 24

Western Blot

Answer 24

anticorps dirigés contre des prot
on réalise une migration des protéines dans un gel avant le transfert sur un membrane de détection des protéines d’intérêt par des anticorps spécifiques

la migration dépend de la taille

peut être utilisé pour étudier les protéines de membrane des vésicules mais également son cargo

Question 25

ELISA

Answer 25

on peut détecter via ELISA des protéines membranaires ou des protéines du cargo

travailler à partir de vésicules extracell entières

on peut réaliser 96 échantillons ce qui facilite les analyses rapides et standardisées

Question 26

cytométrie en flux

Answer 26

la cytométrie en flux permet d’étudier la taille et la morphologie des vésicules

on peut également grâce à des anticorps connaitre la composition membranaire des vésicules

on peut perméabiliser la membrane pour faire pénètrer des anticorps et donc étudier le cargo

Question 27

analyse des acides nucléiques

Answer 27

pour cela on peut utiliser

technique sur la PCR

d’autres types de blot

des puces à ADN/ARN

Question 28

mesures de la quantité de vésicules

Answer 28

analyse par videodrop
NTA: nanon tracking analysis

dossage qNano

Question 29

standardisation

Answer 29

objectifs cliniques:

-reproductibilité
-minimiser les variation des analyses dépendant de l’expérimentateur

on constitue des biocollections qui sont stockées , on peut utiliser du matériel de référence sous forme de VE artificielles

ce processus passe beaucoup par la communication entre les chercheurs

Question 30

biomarqueurs

Answer 30

biomarqueurs diagnostique: identifier la maladie

biomarqueurs pronostique: suivre une pathologie

biomarqueurs thérapeutique:
suivre l’efficacité d’un traitement

Question 31

marqueurs sanguins du cancer

Answer 31

-numérotation des cells sanguines
-marqueurs du fonct de certains organes

-protéines circulantes

-biomarqueurs tumoraux

on cherche à utiliser les vésicules extracell comme biomarqueurs des cancers

Question 32

projet de recherche

Answer 32

biopsies liquides

Question 33

1-isolement des vésicules extracell

Answer 33

vésiculémie: concentration de vésicule dans le sang

puis on étudie les protéines de ces vésicules par Western-Blot

Question 34

2-caractérisation des vésicules extracell

Answer 34

les vésicules sont plus petites et moins nombreuses chez les patient attient d’un cancer

et plus petites lors d’un pic de vésiculémie

chimiothérapie induit une augmention de la vésiculémie

Question 35

3-étude du cargo des vésicule extracell

Answer 35

augmentation du nbr de protéines dns les vésicules extracell plasmatiques des patients cancereux par rappot aux sujets sains

Question 36

4-lipides dans le cas du cancer du sein

Answer 36

peut être utilisé lors de la détection des cells tumorales pour le cancer du sein chez la femme

Question 37

5-Perspectives

Answer 37

dév d’un compagnon thérapeutique afin de prédire l’éfficacité d’un traitement

-thérapie ciblées à s’adapter
-prise en charge unique et personnalisé