Prueba De Ciclo

Question 1

¿Es necesario medir la concentración de proteína en la muestra antes de hacer un western blot?

Answer 1

No. No es un paso imprescindible, aunque sí recomendable para ajustar la cantidad de muestra que se va a cargar en el gel

Question 2

2. ¿Por qué podrían aparecer más bandas que las deseadas en un Western Blot?

Answer 2

Por la mala realización del bloqueo, podrían haber unión inespecífica del anticuerpo a otras proteínas.

Question 3

3. Dibuje el armado del “sandwich” para la transferencia especificando el orden de los componentes.

Answer 3

Ánodo -> almohadilla de fibra -> 2 papel filtro -> membrana de transferencia -> gel -> 2 papel filtro -> almohadilla de fibra -> Cátodo

Question 4

1. Determine el volumen de solución al 18% p/v que se puede preparar con 25 g de soluto y suficiente agua.
   a) 75mL
   b) 139 mL
   c) 72mL
   d) 142 mL
   e) 150 mL

Answer 4

b) 139 mL cc (regla de 3, 18g -> 25g y 100mL -> XmL)

Question 5

2. La masa de hidróxido de sodio (NaOH, MM = 40 g/mol) necesaria para preparar 1000 mL de una solución 0,05 M es:
   a) 0,2g
   b) 5,1g
   c) 2,0g
   d) 0,05 g

Answer 5

c) 2,0g cc masa = ( NaOH(g) / MM (g/mol) ) x Vsolución (L)

Question 6

3. Disponemos de una disolución acuosa de HCI de concentración 2M. Calcule el volumen le esta disolución necesario para preparar 500 ml de disolución 0,5M
   a) 250 mL
   b) 500 mL
   b) 125 mL
   d) 100 mL
   e) 1000mL

Answer 6

b) 125 mL cc c1v1 = c2v2

Question 7

1. Usted construye una curva de calibración cuya ecuación de la recta fue la siguiente: Y=0,01532+0,03841X. Calcule la concentración de una muestra problema cuya absorbancia fue de 0,354.
   a) 8,82 mg/mL
   b) 20,6 mg/mL
   c) 10,3 mg/mL
   d) 4,41 mg/mL.

Answer 7

a) 8,82 mg/mL cc Reemplazar absorbancia en y, despejar x

Question 8

2. La absorbancia de una muestra de DNA doble hebra es 0,233. Calcule la concentración de dicha muestra.
   a) 8,62 ug/mL
   b) 11,65 ug/mL
   c) 9,32 ug/mL
   d) 7,69 ug/mL

Answer 8

b) 11,65 ug/mL cc cte DNA 50 ug/mL. Concentración DNA = 0,233 x 50 ug/mL.

Question 9

3. El método colorimétrico de cuantificación de proteínas que posee un máximo de absorción a 595 nm es:
   a) Método de Biuret
   b) Método de absorción ultravioleta
   c) Método de Bradford
   d) Todos los métodos absorben a la misma longitud de onda

Answer 9

c) Método de Bradford cc

Question 10

1. Las fosfatasas son enzimas que:
   a) Catalizan la formación de enlaces monésteres agregando fosfato inorgánico
   b) Catalizan la hidrólisis de enlaces monoésteres agregando fosfato inorgánico
   c) Catalizan la hidrólisis de enlaces monoésteres liberando fosfato inorgánico
   d) Catalizan la formación de enlaces éster

Answer 10

c) Catalizan la hidrólisis de enlaces monoésteres liberando fosfato inorgánico cc

Question 11

2. La actividad de la fosfatasa ácida de germen de trigo puede ser determinada ya que el producto liberado puede ser cuantificado debido a que:
   a) Es un compuesto coloreado
   b) Es un cromóforo estable a pH básico
   c) Se rige por la ley de Lambert-Beer
   d) Todas las anteriores son correctas

Answer 11

d) Todas las anteriores son correctas cc

Question 12

3. El ensayo enzimático que realizará en el práctico tiene las siguientes características
   a) Se usa como sustrato p-nitrofenol
   b) La generación de color del producto ocurre en medio ácido
   c) El producto de la reacción es p-nitrofenolato
   d) El producto absorbe a 540 nm

Answer 12

c) El producto de la reacción es p-nitrofenolato cc

Question 13

1) De acuerdo a la definición del parámetro cinético Km, es CORRECTO afirmar que:
a) A menor Km, menor afinidad entre la enzima y el sustrato
b) A menor Km, mayor afinidad entre la enzima y el sustrato
c) A mayor Km, mayor afinidad entre la enzima y el sustrato
d) Km no es un parámetro de afinidad entre la enzima y el sustrato

Answer 13

b) A menor Km, mayor afinidad entre la enzima y el sustrato cc

Question 14

2) La velocidad máxima de una reacción CORRESPONDE a:
a) La velocidad cuando la mitad de los sitios activos están unidos a sustrato
b) La velocidad cuando todos los sitios activos están unidos a sustrato
c) La velocidad cuando la mitad de los sitios activos están unidos a producto
d) La velocidad cuando todos los sitios activos están unidos a producto

Answer 14

b) La velocidad cuando todos los sitios activos están unidos a sustrato cc

Question 15

3) La enzima fosfatasa ácida cataliza la conversión de ______ a _______.
a) p-nitrofenil fosfato; p-nitrofenol
b) p-nitrofenol; p-nitrofenil fosfato
c) p-nitrofenolato; p-nitrofenol
d) p-nitrofenol; p-nitrofenolato

Answer 15

a) p-nitrofenil fosfato; p-nitrofenol cc

Question 16

1.- De acuerdo a los datos entregados en la tabla, determine Km y Vmáx de la reacción catalizada por la enzima hexoquinasa. Considere las unidades en sus resultados.
Vo (umol/min) [Glucosa] (mol/L)
130 65 x 10^-5
116 23 x 10^-5
87 7.9 x 10^-5
63 3.9 x 10^-5
30 1.3 x 10^-5
10 0.37 x 10^-5

Answer 16

No se esta wea

Question 17

2.- Construya un gráfico de actividad enzimática (umol de producto vs tiempo) que muestre claramente diferencias entre condiciones óptimas (pH 5 y 37 °C), efecto del pH (pH 7) y efecto de la temperatura (25 °C) para una enzima X.

Answer 17

⤢ ⤢ ⤢ ⤢ pH 5 y 37°C
| ⤢
| ⤢ ⤢ ⤢ ⤢ pH 7 y 25°C
| ⤢ ⤢
| ⤢⤢
____________________________________
Dos líneas curvas, una debajo de la otra en un gráfico tiempo (x) vs umol producto (y)

Question 18

Usted realiza una cromatografía de exclusión molecular de una muestra problema de origen proteico. Al analizar el cromatograma se observa lo siguiente:
Gráfico de columna (x) vs absorbancia (y), pico A antes y más alto que B.

Con la información proporcionada por la gráfica, selección la(s) aseveración(es) correcta(s).
a) La proteína A tiene un mayor tamaño que la proteína B.
b) En la muestra problema existen solo dos proteínas, A y B.
c) La proteína B está en mayor cantidad que la proteína A en la muestra
d) La proteína A esta en mayor cantidad que la proteína B en la muestra
e) La proteína B tiene un mayor tamaño que la proteína A
f) La proteína A eluye más rápido que la proteína B
g) No es posible determinar la cantidad de proteínas en la muestra
h) La proteína B tarda más tiempo en eluír a través de la columna.

Answer 18

a) La proteína A tiene un mayor tamaño que la proteína B. cc
h) La proteína B tarda más tiempo en eluír a través de la columna. cc

Question 19

2. Usted quiere separar 2 proteínas mediante exclusión molecular una de 10 kDa y otra de 100kDa, para esto utiliza una resina G-100 (separa entre 4 kDa a 150 kDa). Al recolectar las fracciones solo obtiene absorbancia en 1 sola fracción, A qué se debe esto?

Answer 19

Puede deberse a múltiples razones, entre estas, puede ser que se dejó correr por menos tiempo del necesario para que una proteína grande como la de 100 kDa se separase. Puede ser posible que dentro del proceso de la cromatografía una se denaturo, o un problema en la toma de absorbancia.

Question 20

1. Una cromatografía de intercambio catiónico:
   a) Utiliza una resina cargada positivamente
   b) Une proteínas con carga positiva
   c) Utiliza una fase móvil con fuerza iónica negativa
   d) Eluye primero moléculas con carga positiva

Answer 20

b) Une proteínas con carga positiva cc

Question 21

2. Una cromatografia de intercambio aniónico:
   a) Utiliza una resina cargada negativamente
   b) Une proteínas con carga positiva
   c) Utiliza una fase móvil con fuerza iónica negativa
   d) Eluye primero moléculas con carga negativa

Answer 21

c) Utiliza una fase móvil con fuerza iónica negativa cc

Question 22

3. Si hablamos de intercambio iónico, relacionamos directamente los siguientes conceptos, excepto:
   a) Afinidad
   b) Carga
   c) Tamaño
   d) pH

Answer 22

c) Tamaño cc

Question 23

II. En base al siguiente cromatograma de intercambio iónico, determine el tipo de cromatografía realizado, justifique su respuesta (3 ptos):
Gráfico n°fracción (x) vs absorbancia (y). Proteína A tiene el primer peak, proteína B el segundo. Hay un período de regeneración con NaCl.

Answer 23

El primer peak en el grafico nos indica que la primera proteína en eluir es positiva, de ello podemos inferir que es un cromatograma de intercambio aniónico. Este tiene grupo catiónicas que permitirían eluir más fácilmente proteínas con baja afinidad (en este caso, positivas) concordando con el primer peak. En el segundo peak vernos una proteína con carga negativa, que tendría más afinidad con los grupos catiónicos y por ello, le tomaría más tiempo saber.

Question 24

La movilidad electroforética en gel de las proteínas sometidas a SDS-PAGE es:
a) Directamente proporcional al logaritmo de su peso molecular.
b) Inversamente proporcional al logaritmo de su peso molecular.
c) Depende de su conformación.
d) Ninguna de las anteriores

Answer 24

b) Inversamente proporcional al logaritmo de su peso molecular. cc

Question 25

La electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS puede aportar información sobre:
a) El peso molecular de la proteína
b) El número de subunidades que forman una proteína
c) El número de cargas de la proteína
d) El número de proteínas distintas presentes en la muestra

Answer 25

a) El peso molecular de la proteína cc

Question 26

Si consideráramos a la electroforesis de proteínas un tipo de cromatografía, pues en ese caso la fase móvil corresponde a:
a) La bis-acrilamida
b) Buffer Tris-glicina
c) Campo eléctrico
d) SDS

Answer 26

c) Campo eléctrico cc

Question 27

En una electroforesis de proteínas en condiciones denaturantes (SDS-PAGE), el compuesto encargado de reducir los puentes disulfuro es:
a) TEMED
b) Persulfato de amonio
c) 2-mercaptoetanol
d) Temperatura

Answer 27

c) 2-mercaptoetanol cc

Question 28

2. Cuando se realiza un western blot utilizando el método indirecto, nos referimos a:
   a) La enzima conjugada al anticuerpo primario reacciona con el sustrato y gracias a esta interacción genera una señal detectable
   b) La enzima conjugada al anticuerpo secundario reacciona con el sustrato y gracias a esta interacción genera una señal detectable
   c) Un anticuerpo secundario reacciona con el antígeno y gracias a esta interacción genera una señal detectable
   d) Un anticuerpo primario reacciona con el sustrato y gracias a esta interacción genera una señal detectable

Answer 28

b) La enzima conjugada al anticuerpo secundario reacciona con el sustrato y gracias a esta interacción genera una señal detectable cc

Question 29

3. Según la metodología descrita para la técnica de western blot, la temporalidad de los pasos a seguir es la siguiente:
   a) Separación - Transferencia – Revelado – Visualización
   b) Revelado-Separación - Transferencia - Visualización
   c) Separación - Revelado - Transferencia - Visualización
   d) Transferencia - Revelado - Separación – Visualización

Answer 29

a) Separación - Transferencia – Revelado – Visualización cc

Question 30

4. ¿Por qué es necesario realizar un paso de bloqueo? ¿Qué utilizará como solución bloqueadora?

Answer 30

Porque la membrana tiene alta afinidad por todas las proteínas, incluidos los anticuerpos. El bloqueo evita uniones no específicas de los anticuerpos a lugares “del libres” de proteínas en membrana. Leche, gelatina, albúmina.