Prototočna citometrija, FACS (T i B limfociti)

Question 1

jednostanična suspenzija

Answer 1

= disperzni sustav u kojem su stanice odvojene od vezivnog tkiva i međusobno

Question 2

postupak

Answer 2

1. jednostanična suspenzija (da se ne ošteti citometar, kako bismo mogli primijeniti protutijela)
2. brojanje stanica (kako bismo primijenili odgovarajuću količinu protutijela)
3. protočna citometrija (propuštanje uzorka)
4. analiza podataka

Question 3

eksperimentalni modeli

Answer 3

genetika: vinska mušica
kirurgija: veće životinje
istraživanja: miš (brzo dijeljenje, dostupnost)

Question 4

Miš kao eksperimentalni model

Answer 4

genetički: homozigoti, singenični (smanjenje varijabilnosti: različita aktivnost enzima)

istraživanja:
knock-out
knock-in (= transgenični)

Question 5

etika

Answer 5

4R
Reduction
Replacement (beskralježnjaci i kompjuterske metode)
Refinemnt
Rehabilitacija

Question 6

limfna tkiva

Answer 6

1. primarna, generativna
   > sazrijevanje, susretanje vlastitog antigena
2. sekundarna
   > susretanje stranog antigena

uzimamo:
timus, koštanu srž, slezenu, limfne čvorove

koštana srž: nezrele stanice mijeloidne i limfoidne linije
timus: nezrele stanice T
limfni čvor: limfociti T (70%), limfociti B (10%)
slezena: limfociti T( otp 30%), limfociti B (otp 40%)

Question 7

postupak pripremanja suspenzije stanica limfnih organa

Answer 7

1. uzimanje uzorka tkiva
2. mehaničko usitnjavanje uzorka
3. centrifugiranje
4. filtracija (kroz poriranu mrežicu)

Question 8

postupak brojanja stanica

Answer 8

Burker-Turckova komora
- brojanje u znanom volumenu (1/250 mm3, 1/4000 mm3)

• broje se one koje su pale na lijevi i gornji rub, a ignoriraju one na desnom i donjem
• u smjeru spirale
• račun: n (broj stanica u kadratima)/ n (koliko smo kvadrata brojali)površina jednog kvadratarazrijeđenje (10)

Question 9

obilježavanje stanica protutijelima

Answer 9

protutijela za limfocite T i B:
B: anti-CD45R/B220
T: anti-CD3

> ispiranje (kako bi se uklonio višak protutijela)

Question 10

protočna citometrija

Answer 10

signal: broj događaja u sekundi

prednji detektor raspršenja: veličina stanica
postranični detektor raspršenja: složenost citoplazme (granuliranost)

boja: udio stanica (plava > crvena) > razlikovanje populacija

Question 11

FACS

Answer 11

• podjela u kvadrante

lijevi donji: - -
lijevi gorni: + (y-os), - (x-os)
desni donji: - (y-os), + (x-os)
desni gornji: + +

Question 12

protočni citometar

Answer 12

dio koji propušta uzorak
sustav fluidike koji pokreće uzorak
laser
optika
detektor
- prednje
- postranično
- fluoroscentno (do 18 različitih stanica)
računalni sustav
- promjena napona u vremenu > histogram (x-os: vrijeme, y-os: broj događaja)/ dot plot (kombinacija postraničnog i prednje detektora)

Question 13

monoklonalna protutijela

Answer 13

hibridom = plazma stanice + tumorske stanice

Question 14

fluoroscencija

Answer 14

= pojava kada obasjamo predmet nekom valnom duljinom, ona emitira svjetlost veće valne duljine

Question 15

upotreba protočne citometrije

Answer 15

klinika:
- dijagnostika leukemije
- dijagnostika imunološkog stanja pacijenta
- praćenje učinka terapije (HIV-a)
- praćenje učinka transplatacije
- određivanje HLA podudarnosti

Question 16

protočna citometrija

Answer 16

= metoda određivanja stanica na temelju veličine, granuliranosti i izražaja antigena