Procesamiento de Muestras

Question 1

Pasos de preparación de un tejido

Answer 1

1. Fijación
2. Deshidratación
3. Inclusión
4. Corte
5. Tinción

Question 2

Fijación

Answer 2

Para preservar las propiedades de la muestra, similares a su estado in vivo.
Hay fijadores fisicos y fijadores químicos.

Question 3

Fijadores Fisicos

Answer 3

Desecación
Calor seco
Calor húmedo 
Frío
Congelación y desecación

Question 4

Desecación

Answer 4

Sirve para cultivos líquidos. Los extendemos sobre el porta para que se evapore el agua, esencial para la supervivencia de patógenos y enzimas de la autólisis.
Para acelerar el proceso se puede poner el porta sobre una llama, pero esto no sirve para tejidos humanos porque se pierden las membranas de la célula.

Question 5

Calor seco

Answer 5

Poner la muestra en una estufa a 65ºC.
Solo sirve para bacterias porque el calor destruye las membranas celulares. En bacterias queda la pared celular, por lo que se pueden ver las estructuras.

Question 6

Calor humedo

Answer 6

Meter la muestra en agua hirviendo.
Desnaturaliza las proteínas y destruye patógenos.
Es muy agresivo porque degrada mucho los tejidos.

Question 7

Frío

Answer 7

Tecnica rapida, poco duradera.
Hay que hacerlo rapido para que no se formen cristales de hielo, y usar CRIOPROTECTORES.

Detienes act metabolica de patogenos y la autolisis.

Para muestras que no conservemos.

Endurece la muestra lo suficiente que se puede pasar directo al corte.

Question 8

Congelación y desecación

Answer 8

Congelar + quitar agua mediante LIOFILIZACION.

Muestra a una elevada presion para que el agua se sublime.

Question 9

Fijadores químicos

Answer 9

Sustancias que consiguen los mismos efectos que los fijadores físicos. Ej. alcohol y formol
Son simples o compuestos.

Question 10

Fijadores químicos simples

Answer 10

Un solo tipo de sustancia se usa para fijar la muestra

Question 11

Fijadores químicos compuestos

Answer 11

Varios tipos de compuestos fijadores se utilizan a la vez. Acumula las ventajas, pero también los inconvenientes.

Question 12

Deshidratación

Answer 12

Se endurece la muestra mediante una serie gradual de soluciones acuosas con concentraciones cada vez mayores de agentes deshidratantes.
Ej. alcohol o acetona
La concentracion no debe de ser tan alta que altere la forma de la muestra.

Question 13

Inclusión

Answer 13

Incluir la muestra en un material que le de la dureza necesaria para poder cortarlo. El material es gelatina o parafina.
Se sumerge en el medio en un microondas a temperaturas altas, para que el material esté liquido y se pueda infiltrar en el tejido.
Despues se deja a temperatura ambiente o 4ºC para que solidifique, de manera que este lista para cortar.
Antes de teñir la muestra hay que eliminar el medio de inclusión y rehidratar la muestra.

Question 14

Corte

Answer 14

Producir cortes de hasta 5-10 micrometros de grosor. Con diferentes aparatos como microtomo, criostato y vibratomo.

Question 15

Hematoxilina-Eosina

Answer 15

Hematoxilina es básico, y tiñe de azul-violeta las estructuras ácidas. Tiñe basófilos. Núcleos, cromatina y ribosomas.
Eosina es ácido, y tiñe de rosa las estructuras básicas. Eosinófilas.

Question 16

Wright y Giemsa

Answer 16

Se usa para diferenciar células sanguíneas.
Se usa eosina y azul de metileno (en lugar de hematoxilina).
La eosina tiñe de rosa los eritrocitos y los gránulos eosinófilos.
El azul de metileno tiñe de azul-morado el citoplasma de los monocitos y linfocitos.

Question 17

PAS (Ácido Peryódico de Schiff)

Answer 17

Ácido peryódico y reactivo de Schiff.
Tiñe polisacáridos y oligosacáridos de color magenta o púrpura.
El reactivo de Schiff es el tinte, pero sin añadir el ácido no se verá el color.
Tiñe glucógeno, moco, membrana basal y fibras reticulares, por ejemplo.

Question 18

Tricrómico de Masson

Answer 18

Se usan 3 colorantes:
1. Uno tiñe los núcleos de azul oscuro-morado
2. Fucsina: Tiñe estructuras básicas de rosa-rojo.
3. Azul de anillina: Tiñe el colágeno de color azul claro
Se utiliza para hacer comparaciones de las cantidades de colágeno que hay entre diferentes células.

Question 19

Tinción argéntica

Answer 19

Se forman sales de plata que dan lugar a unos precipitados de color negro o marrón oscuro.
Identifica fibras reticulares, dendritas, axones y prolongaciones gliales.

Question 20

Tinciones de Lípidos

Answer 20

Hay que usar un colorante hidrófobo y un disolvente hidrófobo.
El colorante más usado es el Sudán que da un color rojo, negro etc.
También se usa azul de Luxo que sirve para distinguir las vainas de mielina.
Se le da un contraste de hematoxilina-eosina.

Question 21

Histoquímica Enzimática

Answer 21

Se usa para detectar la presencia de una enzima.
Se añade un sustrato a la muestra enzimática, para que esta lo transforme en un producto detectable.
Es importante que precipite, para saber donde esta exactamente la enzima, sino se esparce.
Si no precipita o no se ve el color, hay que añadir un marcador que reaccione con el producto de la reaccion y que este enseñe donde esta.
No se pueden usar los tipos de fijacion normales, menos la congelacion, porque se degradarian las enzimas y no actuarian.

Question 22

Inmunohistoquímica

Answer 22

Se utilizan reacciones entre anticuerpos diseñados para dar una tinción, que se unen a antígenos.
Los anticuerpos usados pueden dar fluorescencia o pueden ir unidas a una enzima detectable.
Puede ser directa o indirecta.

Question 23

Inmunohistoquímica directa

Answer 23

Solamente se usa un anticuerpo (primario).
Es el que se une al antígeno y además el que lleva el marcaje.
Puede dar falsos positivos porque se una a moleculas parecidas al antígeno.

Question 24

Inmunohistoquímica indirecta

Answer 24

Se utiliza un anticuerpo primario, que se une al antígeno, y un anticuerpo secundario, que está lleva el marcaje y se une al anticuerpo primario.
Al haber más sitios de unión, hay más posibilidad de dar falsos positivos.

Question 25

Autorradiografía

Answer 25

Incorporación de isótopos radioactivos a macromoléculas. Un isotopo común es el itrio (H3).
Se usan gránulos de plata, al ser expuestos a la radiacion oscureceran en las zonas donde se encuentren los isotopos.

Question 26

Hibridación in Situ

Answer 26

Sirve para detectar ARN o ADN mediante hibridación por complementariedad de bases.
Se puede detectar el ARNm de ciertos genes y determinar asi si estos se estan expresando.

Question 27

Sonda

Answer 27

Detecta el ADN virico de un virus determinado, asi se puede detectar aquellas celulas infectadas.
Hibridacion in Situ

Question 28

Artefactos

Answer 28

Alteraciones producidas a causa del procesamiento.
Se pueden deber a retraccion por fijacion, colorante viejo precipitado, pérdida de moléculas, pliegues y mellas que provoca la cuchilla.