Prática - teste 1 Flashcards
Metabolismo respiratório: Prova da CATALASE: identificação de?
Usada na identificação das bactérias AERÓBIAS (a maioria são catalase +; a maioria das anaeróbias são catalase negativas)
Metabolismo respiratório: Prova da CATALASE: distinção entre?
MUITO ÚTIL na distinção entre estafilo e estreptococos Gram +:
ESTAFILOCOCOS – CATALASE +
ESTREPTOCOCOS – CATALASE –
As colónias a pesquisar devem estar em meios isentos de sangue?
SIM
Metabolismo respiratório: Prova da CATALASE: Resultados
A libertação de bolhas gasosas indica um resultado positivo (resultado imediato)
Metabolismo respiratório: Prova da CATALASE: Conclusões
- Existem bactérias que possuem genes que codificam a síntese de catalase e outras não
- A “prova da catalase” serve para distinguir entre cocos Gram +:
Streptococcus spp. com reacção negativa
Staphylococcus spp. com reacção positiva
Metabolismo respiratório: Prova da OXIDASE: útil para?
Devido ao facto de algumas espécies de bactérias Gram – serem oxidase positivas, contrariamente à Família das Enterobacteriaceae que são oxidase negativas.
Metabolismo respiratório: Prova da OXIDASE: para que serve o reagente de cor rosa claro?
O reagente de cor rosa claro serve como um substrato artificial, dando electrões ao citocromo oxidase, ficando, durante este processo, oxidado, adoptando uma cor azul cada vez mais escura na presença de O2 e da oxidase.
A presença desta cor escura indica uma prova positiva (+);
A não alteração de cor indica ausência de oxidase, prova negativa (-)
Metabolismo respiratório: Prova da OXIDASE: resultados
No estado reduzido é incolor enquanto que no estado oxidado é azul, o que indica reação positiva (resultado imediato)
Metabolismo respiratório: Prova da OXIDASE: conclusões
- Existem bactérias que são detentoras do sistema citocromo oxidase de transporte de electrões e outras não
- A “prova da oxidase” serve para distinguir os membros da família Enterobacteriaceae (E. coli e Salmonella) com reacção negativa, de outras espécies Gram – (Campylobacter spp, Pseudomonas spp) que são oxidase positiva.
Qual o objetivo da análise do perfil bioquímico das estirpes bacterianas?
Tem como objetivo determinar quais as enzimas que as bactérias
possuem
Metabolismo glucídico
Tal como os seres superiores, os microrganismos utilizam vários hidratos de carbono (mono, di e trissacáridos, álcoois polihidricos e sais catiónicos de ácidos orgânicos) como fontes carbono e energia. Certas bactérias podem hidrolisar uma ampla gama de H.C. podendo originar vários produtos finais:
- ácidos orgânicos (c/ alteração do pH do meio) – láctico, acético, butírico, propiónico e fórmico
- produtos neutros (acetona, vários álcoois)
- vários gases (metano, anidrido carbónico, hidrogénio)
Usado para identificar enterobacteriáceas
Fermentação
Reacções bioquímicas produtoras de energia em que as moléculas orgânicas servem como dadores ou receptores de electrões
Metabolismo glucídico: Meios base com Hidratos de Carbono: Resultados
(Incubar durante 18 a 24 horas a 37ºC)
A fermentação dos hidratos de carbono é importante para a identificação de muitas estirpes bacterianas (especialmente enterobacteriáceas).
Os ácidos e gases resultantes são detectados pela alteração da cor do meio em função da modificação do pH e pelo aparecimento de uma calote gasosa no tubo de Durham respectivamente.
Metabolismo glucídico: Meios base com Hidratos de Carbono: Conclusões
A análise do comportamento diversificado das estirpes bacterianas frente a substratos com hidratos de carbono fornece-nos um conjunto de dados de extrema valia, importantes para a sua identificação
Metabolismo glucídico: Hidrolases Glucídicas - Pesquisa da β-galactosidase
O ONPG é muito semelhante estruturalmente à lactose, não necessita da permease para atingir o citoplasma bacteriano, sendo hidrolisado pela β-galactosidase, originando:
- Galactose
- Ortonitrofenol (em vez de glucose)
Metabolismo glucídico: Hidrolases Glucídicas - Pesquisa da β-galactosidase: Resultados
O ONPG intracelular ao ser hidrolisado pela β-galactosidase origina galactose e ortonitrofenol (confirmado pelo aparecimento de coloração amarela após 15 minutos)
Metabolismo glucídico: Hidrolases Glucídicas - Pesquisa da β-galactosidase: Conclusões
A detecção deste sistema enzimático é fundamental para a detecção de enterobacteriáceas. Verifica-se no entanto que a velocidade de reacção varia consideravelmente entre as bactérias com reacção positiva ao teste (o que indica, para as mais tardias, deficiência ao nível da enzima β-permease).
Para o estudo da lactose pode ainda utilizar-se o meio de cultura MacConkey (agar ou caldo) pq possui lactose como único H.C. na sua constituição
Metabolismo glucídico: Prova de Voges Proskauer – V.P. / Prova do Vermelho de Metilo – M.R.
Produção de acetilmetil carbinol (acetoína)
Provas com aplicação na identificação (diferenciação) de enterobacteriáceas.
O seu interesse é limitado:
- resultados duvidosos;
- exige muito tempo na execução;
V.P.
Certas bactérias fermentam H.C. produzindo acetil-metil carbinol ou acetoína ou o produto da sua redução butileno-glicol.
Em meio com pH alcalino e na presença do ar a acetoína é oxidada em diacetilo. Esta reage com a creatinina (derivado da guanina) ou com o α-naftol (após adição dos reagentes próprios) originando compostos de cor vermelho-rosada.
M.R.
Serve para avaliar a quantidade de ácido produzido (≠ entre espécies) → pH ≤ 4,5
Metabolismo glucídico: Prova de Voges Proskauer – V.P.: Resultados
A reacção é positiva quando se forma um composto de cor vermelha em poucos minutos (↑ pH)
(Agitam-se os tubos e observam-se as reacções passados 5 minutos)
Metabolismo glucídico: Prova do Vermelho de Metilo – M.R.: Resultados
cor vermelha (pH ≤ 4,5) – reacção positiva;
cor amarela (pH≥6,3) – reacção negativa
(reação imediata)
Metabolismo glucídico: Prova de Voges Proskauer – V.P. / Prova do Vermelho de Metilo – M.R.: Conclusões
Certas espécies bacterianas, por desmólise da glucose (presente nos meios de cultura utilizados), produzem compostos em C4 (acetilmetil carbinol ou acetoína e butileno-glicol). A acetoína, em pH alcalino e na presença do ar, é oxidada até diacetilo que reage com o α-naftol (V.P.) originando um composto de cor vermelha.
Outras espécies por seu lado originam ácidos orgânicos de cadeia curta (acético, acetilacético, fórmico). O meio (M.R.) contém fosfatos que actuam como tampão; só as bactérias que formam elevadas quantidades de ácidos orgânicos fortemente ionizados a partir da glucose podem alcançar o pH ≤ 4,5.
Não é possível uma bactéria ter as duas provas + (o piruvato origina acetoína ou ácidos orgânicos de cadeia curta); o contrário já é possível
Metabolismo proteico: Pesquisa da gelatinase – prova da liquefacção da gelatina
Gelatina – tem um reduzido valor nutritivo, obtêm-se por hidrólise parcial do colagénio (componente do tecido conjuntivo e tendões dos animais), é um substrato importante para a pesquisa de enzimas proteolíticas dos microrganismos.
Gelatinases – capazes de hidrolisar a gelatina em péptidos e a.a’s.
Podem detectar-se bactérias que produzem gelatinase através da observação da liquefacção dos meios de cultura que contêm gelatina.
Se a gelatina for hidrolisada o meio fica no estado líquido mesmo depois de submetido a temperaturas baixas (4 a 8ºC).
Prova utilizada para identificar bactérias Gram - não fermentativas
