Prática - teste 1

Question 1

Metabolismo respiratório: Prova da CATALASE: identificação de?

Answer 1

Usada na identificação das bactérias AERÓBIAS (a maioria são catalase +; a maioria das anaeróbias são catalase negativas)

Question 2

Metabolismo respiratório: Prova da CATALASE: distinção entre?

Answer 2

MUITO ÚTIL na distinção entre estafilo e estreptococos Gram +:

ESTAFILOCOCOS – CATALASE +

ESTREPTOCOCOS – CATALASE –

Question 3

As colónias a pesquisar devem estar em meios isentos de sangue?

Answer 3

SIM

Question 4

Metabolismo respiratório: Prova da CATALASE: Resultados

Answer 4

A libertação de bolhas gasosas indica um resultado positivo (resultado imediato)

Question 5

Metabolismo respiratório: Prova da CATALASE: Conclusões

Answer 5

• Existem bactérias que possuem genes que codificam a síntese de catalase e outras não
• A “prova da catalase” serve para distinguir entre cocos Gram +:
  Streptococcus spp. com reacção negativa
  Staphylococcus spp. com reacção positiva

Question 6

Metabolismo respiratório: Prova da OXIDASE: útil para?

Answer 6

Devido ao facto de algumas espécies de bactérias Gram – serem oxidase positivas, contrariamente à Família das Enterobacteriaceae que são oxidase negativas.

Question 7

Metabolismo respiratório: Prova da OXIDASE: para que serve o reagente de cor rosa claro?

Answer 7

O reagente de cor rosa claro serve como um substrato artificial, dando electrões ao citocromo oxidase, ficando, durante este processo, oxidado, adoptando uma cor azul cada vez mais escura na presença de O2 e da oxidase.

A presença desta cor escura indica uma prova positiva (+);

A não alteração de cor indica ausência de oxidase, prova negativa (-)

Question 8

Metabolismo respiratório: Prova da OXIDASE: resultados

Answer 8

No estado reduzido é incolor enquanto que no estado oxidado é azul, o que indica reação positiva (resultado imediato)

Question 9

Metabolismo respiratório: Prova da OXIDASE: conclusões

Answer 9

• Existem bactérias que são detentoras do sistema citocromo oxidase de transporte de electrões e outras não
• A “prova da oxidase” serve para distinguir os membros da família Enterobacteriaceae (E. coli e Salmonella) com reacção negativa, de outras espécies Gram – (Campylobacter spp, Pseudomonas spp) que são oxidase positiva.

Question 10

Qual o objetivo da análise do perfil bioquímico das estirpes bacterianas?

Answer 10

Tem como objetivo determinar quais as enzimas que as bactérias
possuem

Question 11

Metabolismo glucídico

Answer 11

Tal como os seres superiores, os microrganismos utilizam vários hidratos de carbono (mono, di e trissacáridos, álcoois polihidricos e sais catiónicos de ácidos orgânicos) como fontes carbono e energia. Certas bactérias podem hidrolisar uma ampla gama de H.C. podendo originar vários produtos finais:

• ácidos orgânicos (c/ alteração do pH do meio) – láctico, acético, butírico, propiónico e fórmico
• produtos neutros (acetona, vários álcoois)
• vários gases (metano, anidrido carbónico, hidrogénio)

Usado para identificar enterobacteriáceas

Question 12

Fermentação

Answer 12

Reacções bioquímicas produtoras de energia em que as moléculas orgânicas servem como dadores ou receptores de electrões

Question 13

Metabolismo glucídico: Meios base com Hidratos de Carbono: Resultados

Answer 13

(Incubar durante 18 a 24 horas a 37ºC)

A fermentação dos hidratos de carbono é importante para a identificação de muitas estirpes bacterianas (especialmente enterobacteriáceas).

Os ácidos e gases resultantes são detectados pela alteração da cor do meio em função da modificação do pH e pelo aparecimento de uma calote gasosa no tubo de Durham respectivamente.

Question 14

Metabolismo glucídico: Meios base com Hidratos de Carbono: Conclusões

Answer 14

A análise do comportamento diversificado das estirpes bacterianas frente a substratos com hidratos de carbono fornece-nos um conjunto de dados de extrema valia, importantes para a sua identificação

Question 15

Metabolismo glucídico: Hidrolases Glucídicas - Pesquisa da β-galactosidase

Answer 15

O ONPG é muito semelhante estruturalmente à lactose, não necessita da permease para atingir o citoplasma bacteriano, sendo hidrolisado pela β-galactosidase, originando:

• Galactose
• Ortonitrofenol (em vez de glucose)

Question 16

Metabolismo glucídico: Hidrolases Glucídicas - Pesquisa da β-galactosidase: Resultados

Answer 16

O ONPG intracelular ao ser hidrolisado pela β-galactosidase origina galactose e ortonitrofenol (confirmado pelo aparecimento de coloração amarela após 15 minutos)

Question 17

Metabolismo glucídico: Hidrolases Glucídicas - Pesquisa da β-galactosidase: Conclusões

Answer 17

A detecção deste sistema enzimático é fundamental para a detecção de enterobacteriáceas. Verifica-se no entanto que a velocidade de reacção varia consideravelmente entre as bactérias com reacção positiva ao teste (o que indica, para as mais tardias, deficiência ao nível da enzima β-permease).

Para o estudo da lactose pode ainda utilizar-se o meio de cultura MacConkey (agar ou caldo) pq possui lactose como único H.C. na sua constituição

Question 18

Metabolismo glucídico: Prova de Voges Proskauer – V.P. / Prova do Vermelho de Metilo – M.R.

Answer 18

Produção de acetilmetil carbinol (acetoína)

Provas com aplicação na identificação (diferenciação) de enterobacteriáceas.

O seu interesse é limitado:

• resultados duvidosos;
• exige muito tempo na execução;

Question 19

V.P.

Answer 19

Certas bactérias fermentam H.C. produzindo acetil-metil carbinol ou acetoína ou o produto da sua redução butileno-glicol.

Em meio com pH alcalino e na presença do ar a acetoína é oxidada em diacetilo. Esta reage com a creatinina (derivado da guanina) ou com o α-naftol (após adição dos reagentes próprios) originando compostos de cor vermelho-rosada.

Question 20

M.R.

Answer 20

Serve para avaliar a quantidade de ácido produzido (≠ entre espécies) → pH ≤ 4,5

Question 21

Metabolismo glucídico: Prova de Voges Proskauer – V.P.: Resultados

Answer 21

A reacção é positiva quando se forma um composto de cor vermelha em poucos minutos (↑ pH)

(Agitam-se os tubos e observam-se as reacções passados 5 minutos)

Question 22

Metabolismo glucídico: Prova do Vermelho de Metilo – M.R.: Resultados

Answer 22

cor vermelha (pH ≤ 4,5) – reacção positiva;

cor amarela (pH≥6,3) – reacção negativa

(reação imediata)

Question 23

Metabolismo glucídico: Prova de Voges Proskauer – V.P. / Prova do Vermelho de Metilo – M.R.: Conclusões

Answer 23

Certas espécies bacterianas, por desmólise da glucose (presente nos meios de cultura utilizados), produzem compostos em C4 (acetilmetil carbinol ou acetoína e butileno-glicol). A acetoína, em pH alcalino e na presença do ar, é oxidada até diacetilo que reage com o α-naftol (V.P.) originando um composto de cor vermelha.

Outras espécies por seu lado originam ácidos orgânicos de cadeia curta (acético, acetilacético, fórmico). O meio (M.R.) contém fosfatos que actuam como tampão; só as bactérias que formam elevadas quantidades de ácidos orgânicos fortemente ionizados a partir da glucose podem alcançar o pH ≤ 4,5.

Não é possível uma bactéria ter as duas provas + (o piruvato origina acetoína ou ácidos orgânicos de cadeia curta); o contrário já é possível

Question 24

Metabolismo proteico: Pesquisa da gelatinase – prova da liquefacção da gelatina

Answer 24

Gelatina – tem um reduzido valor nutritivo, obtêm-se por hidrólise parcial do colagénio (componente do tecido conjuntivo e tendões dos animais), é um substrato importante para a pesquisa de enzimas proteolíticas dos microrganismos.

Gelatinases – capazes de hidrolisar a gelatina em péptidos e a.a’s.

Podem detectar-se bactérias que produzem gelatinase através da observação da liquefacção dos meios de cultura que contêm gelatina.

Se a gelatina for hidrolisada o meio fica no estado líquido mesmo depois de submetido a temperaturas baixas (4 a 8ºC).

Prova utilizada para identificar bactérias Gram - não fermentativas

Question 25

Metabolismo proteico: Pesquisa da gelatinase – prova da liquefacção da gelatina: Resultados

Answer 25

• O conteúdo dos tubos de controlo e dos inoculados com estirpes não produtoras de gelatinase solidificar-se-á.
• A gelatina hidrolisada fica em estado líquido.

(Incube os tubos a 37ºC durante 48 horas)

Question 26

Metabolismo proteico: Pesquisa da gelatinase – prova da liquefacção da gelatina: Conclusões

Answer 26

Esta reação possibilita de forma esclarecedora o registo da existência de sistemas enzimáticos proteolíticos entre as bactérias, em contraste com aquelas que não os sintetizam.

Question 27

Metabolismo proteico: Meio de ureia (pesquisa da urease)

Answer 27

O Proteus usa a ureia (composto neutro não tóxico) como fonte de azoto hidrolisando-a com formação de amónia. Por alteração do pH do meio (6,8 → 8,4) o indicador (vermelho de fenol) adopta a cor carmim

(Incubar os tubos a 37ºC durante 18 a 24 horas)

Question 28

Metabolismo proteico: Meio de Leite (pesquisa da caseínase)

Answer 28

• Algumas bactérias coagulam e digerem o leite devido a uma acidificação (por uso da lactose) e digestão enzimática da caseína (enzima caseínase).
• Importante numa primeira identificação dos clostrídeos (anaeróbios G+ esporulados).

(Incubar os tubos a 37ºC durante 18 a 24 horas.)

Question 29

Metabolismo proteico: Meio de leite tornesolado (leite + solução de tornesol)

Answer 29

• Fermentação tumultuosa da lactose com abaixamento do pH (acidez) e coagulação do leite, tornando o meio mais claro
• Digestão da caseína (caseínase) provocando o aparecimento de soro, ficando o meio com aspecto esponjoso)

(Incubar os tubos a 37ºC durante 18 a 24 horas

Question 30

Metabolismo proteico: Meio de leite tornesolado (leite + solução de tornesol): Conclusões

Answer 30

• O fenómeno de coagulação deve-se à acidificação do meio pelo uso da lactose
• O aparecimento do soro ocorre quando a bactéria possui a enzima caseínase
• O aspecto esponja resulta da libertação de gás durante a fermentação da lactose