PCR Flashcards
Was heisst PCR? Was macht sie ganz grob?
Polymerase Ketten Reaktion
Sie ermöglicht gezieltes Vervielfältigen von einem beliebigen Abschnitt des DNA Moleküls
Was braucht man um die PCR zu starten?
Man muss die Frequenz an den Enden des ausgewählten DNA Bereichs (Template) kennen, da Oligonukleotidprimer erstellt werden müssen
Was gibt man in einen “Topf” um PCR durchzuführen?
- Ziel DNA (Template)
- Taq-Polymerase
- Oligonucleotidprimer
- freie Nucleotide
Warum erhitzt man in der PCR erst die DNA auf 94 Grad und lässt sie dann wieder auf 50-60 Grad abkühlen? Warum schaltet man dann auf 70 Grad?
94 Grad löst die H-Brücken wodurch sich die Doppelstränge lösen, wenn man sie dann wieder senkt renaturieren zwar die Doppelhelixen teilweise, aber auch die Oligonucleotidprimer binden an einen Einzelstrang (Annealing)
Auf 70 Grad arbeitet dann die Taq-Polymerase im optimalen Bereich.
Was ist die Elongation in der PCR?
Neusynthese des fehlenden Doppelstrangs
Warum heisst es Polymerase KETTEN Reaktion?
Der erste Durchlauf sorgt für ein Langen Strang als Ergebnis, der Abbruch geschieht dabei zufällig. Dieser Ergebnis Strang ist das Template für die nächste PCR, das heisst, dass das Ergebnis immer kleiner wird, mit jeder Wiederholung.
Was ist das Ergebnis der ersten PCR?
4 Doppelsträngige DNA Sequenzen
2 davon identisch mit den langen Produkten der ersten PCR und 2 aus völlig anderer kürzerer DNA (wird mit jedem mal exponentiell kürzer)
Wie viele PCR Wiederholungen sind üblich?
ca. 40
Was definiert die kurzen Fragmente der PCR
Die Amplifikation, sprich die Primer
Warum macht man PCR?
Vaterschaftstests
Sequenznachweis
DNA Sequenzierung
Was braucht der Klonierungsvektor der PCR-Produkte?
Überstehende T-Nucleotide die auf die A-Nucleotide passen welche die Taq-Polymerase an die gebildeten Stränge hängt
