Nukleasen Flashcards
Was ist die Aufgabe der Restriktionsendonukleasen?
Eine Nuklease- und eine Methylase-Aktivität
Wie ist die Nomenklatur der Restriktionsendonukleasen?
Name des Organismus + Nummer des Restriktionsenzyms
Bsp: Escherichia COli Enzym1 = Eco R1
Wie viele Typen von Restriktionsenzymen sind bekannt?
3 (Typ I bis III)
Die Nuklease Aktivität spaltet Nukleotide, was macht die Methylierungsaktivität?
Sie Methyliert (CH3) die eigene DNA des Baktriums und schützt sie dadurch vor den eigenen Nukleasen, welche die Virale DNA “angreift”
Was ist Typ I der Restriktionsenzyme?
3 Merkmale
“komplexe Nukleasen” die Methylase UND Nuklease sind
benötigt ATP, Mg2+ und S-Adenosylmethionin
15bp spezifische Bindungsstelle und 1000bp entfernter Schnitt
Was ist Typ III der Restriktionsenzyme?
3 Merkmale
nicht-palindromische Erkennungssequenz
Scheidet 5 bis 15bp entfernt
benötigt ATP, Mg2+
Was ist Typ II der Restriktionsenzyme?
3 Merkmale
Bindungs und Schnittstelle identisch (palindromische 4-8bp)
benötigt Mg2+
haben spezifische Puffer Anforderung (Ph und Salze)
Was sind sticky Ends?
Überstehende Enden der DNA: spezifische Basenpaarung nötig
Was sind blunt Ends?
Glatte Enden der DNA: Beliebige Kombination
Werlche Enzyme “schweissen” DNA Enden wieder zusammen?
Ligasen
Was heisst es wenn ein Restiktionsenzym ein Isoschizomer eines anderen ist?
Dass sie die gleiche Erkennungssequenz haben und auch gleich schneiden
Was heisst es wenn ein Restiktionsenzym ein Neoschizomer eines anderen ist?
Dass sie die gleiche Erkennungssequenz haben, aber unterschiedlich schneiden
Was sind Methylierungspaare?
Restriktionsenzyme mit gleicher Erkennungssequenz aber unterschiedlicher Methylierungsabhängigkeit
Wie ist eine Einheit Restriktionsenzyme definiert?
Menge des Enzyms die 1 Mikrogramm (10’-6) DNA des Phagen in einer Stunde bei 37 Grad Celsius verdaut
Was sind Exonukleasen? Nenne Beispiel!
Spalten vom 5’ oder 3’ Ende einzelne Nukleotide ab
Bal31
Exonuklease III von E. coli
