PCR Flashcards
La PCR inicia con
- La desnaturalización por calor de la muestra de ADN de hebras
simples.
Qué sucede extremos 3` del ADN
- Se añaden dos oligonucleótidos sintéticos complementarios a los extremos 3’ del ADN.
A cuánto disminuye la temperatura
- Temperatura disminuye hasta 50°C o 60 °C.
Los oligonucleótidos con quien se hibrida
- Los oligonucleótidos se hibridan con secuencias complementarias -> ADN.
Oligonucleótidos hibridados
- Los oligonucleótidos hibridados sirven luego como iniciadores para la síntesis del
fragmento de ADN en presencia de desoxirribonucleótidos.
Thermus aquaticus
Resistentes a temperatura y los cebadores pueden extender a temperaturas de hasta 72 ºC.
Al completar la síntesis
La mezcla se vuelve a calentar a 95 ºC para desnaturalizar los dúplex de ADN.
2da bajada de temperatura
Da lugar otro ciclo de síntesis están en altas concentraciones los primers (cebadores).
Que sucede en cada ciclo de desnaturalización y síntesis
Se duplica al rededor de 1 millón
de veces la cantidad de
copias de la secuencia entre los sitios del cebador -> 20 ciclos
Qué es la PCR
Es un método de diagnóstico temprano, tiene mayor sensibilidad y especificidad que los métodos inmunológicos o microbiológicos.
Primera condición para amplificar el gen β globina
95C ->2min -> ambientación de la muestra
Segunda condición para amplificar el gen β globina
95C -> 30seg -> desnaturalización
Tercera condición para amplificar el gen β globina
55C -> 30seg -> Aliniación
Cuarta condición para amplificar el gen β globina
72C -> 1min -> elongación
Quinta condición para amplificar el gen β globina
Repetir desde desnaturalización a elongación 35 veces
