PCR Flashcards
Una PCR requiere (4)
- Secuencia de ADN
- Enzima DNA polimerasa
- Desoxirribonucleótidos (nNTP)
- Primers o iniciadores
La PCR se realiza en un _______.
Termociclador
La DNA polimerasa queríamos proviene de un geisegrg y y se llama ______.
Thermus acuáticus
La temperatura de soporte de la DNA polimerasa es de _____ grados.
95
Es un cofactor de la taw polimerasa.
Cloruro de magnesio
Se encarga de mantener el Ph
Amortiguador o buffer
Los iniciadores los diseñamos haciéndolos complementarios a la secuencia de DNA que estoy buscando, vamos a tener 2 tipos de amortiguadores que son …
- Forward: Va de 5’ a 3’
- Reverse: Va de 3’ a 5’
Amortiguador que va de 5’ a 3’
Forward
Amortiguador que va de 3’ a 5’
Reverse
Los primers o amortiguadores tienen muchas (2) para que sean más estables y complementarios al DNA.
Citosinas y Guaninas
Fases de la PCR (3)
- Desnaturalización
- Hibridación
- Temperatura de extensión
Describa la fase de desnaturalización.
Hay que separar la hélice de ADN y como no hay elicasa usamos una temperatura de 95 grados.
Describa la fase de hibridación:
Hacer que los primeros encuentren su complemento bajando la temperatura a temperatura de alineamiento. Tm
Describa la fase de temperatura de extensión.
Ponemos la temperatura de extensión (72 grados) para que la polimerasa empiece a poner nucleótidos.
Se deben realizar ___ - ____ ciclos de PCR.
30-40