PCR Flashcards

1
Q

Una PCR requiere (4)

A
  • Secuencia de ADN
  • Enzima DNA polimerasa
  • Desoxirribonucleótidos (nNTP)
  • Primers o iniciadores
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2
Q

La PCR se realiza en un _______.

A

Termociclador

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3
Q

La DNA polimerasa queríamos proviene de un geisegrg y y se llama ______.

A

Thermus acuáticus

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4
Q

La temperatura de soporte de la DNA polimerasa es de _____ grados.

A

95

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5
Q

Es un cofactor de la taw polimerasa.

A

Cloruro de magnesio

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6
Q

Se encarga de mantener el Ph

A

Amortiguador o buffer

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7
Q

Los iniciadores los diseñamos haciéndolos complementarios a la secuencia de DNA que estoy buscando, vamos a tener 2 tipos de amortiguadores que son …

A
  • Forward: Va de 5’ a 3’

- Reverse: Va de 3’ a 5’

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8
Q

Amortiguador que va de 5’ a 3’

A

Forward

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9
Q

Amortiguador que va de 3’ a 5’

A

Reverse

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10
Q

Los primers o amortiguadores tienen muchas (2) para que sean más estables y complementarios al DNA.

A

Citosinas y Guaninas

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11
Q

Fases de la PCR (3)

A
  • Desnaturalización
  • Hibridación
  • Temperatura de extensión
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12
Q

Describa la fase de desnaturalización.

A

Hay que separar la hélice de ADN y como no hay elicasa usamos una temperatura de 95 grados.

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13
Q

Describa la fase de hibridación:

A

Hacer que los primeros encuentren su complemento bajando la temperatura a temperatura de alineamiento. Tm

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14
Q

Describa la fase de temperatura de extensión.

A

Ponemos la temperatura de extensión (72 grados) para que la polimerasa empiece a poner nucleótidos.

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15
Q

Se deben realizar ___ - ____ ciclos de PCR.

A

30-40

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16
Q

PCR que dice si existe o no el gen que estoy buscando pero no dice cuántos de estos hay.

A

PCR punto final

17
Q

PCR que permite ver varios genes en una sola toma de muestra.

A

PCR múltiple

18
Q

PCR que usamos para buscar RNA.

A

PCR transcriptas reversa

19
Q

Para Covid usamos esta mezcla de PCR’s

A
  • Transcriptasa reversa y tiempo real
20
Q

PCR que nos sirve para conocer la CARGA VIRAL.

A
  • PCR tiempo real.
21
Q

Para poder cuantificar la carga viral en PCR tiempo real le ponemos ______.

A

Colorantes

22
Q

Tipos de colorantes que usamos en PCR tiempo real.

A
  • Específicos

- No específicos

23
Q

Colorante que se une a una DOBLE cadena de DNA

A

NO específicos

24
Q

Se dice que los colorantes no específicos son no específicos porque ….

A

Los primers son un T-loop y como un t-loop tiene doble cadena se pueden unir a los primers y marcarlo como si fueran el segmento que buscamos.

25
Q

Colorantes que se unen a una sola cadena de DNA.

A

Específicos

26
Q

Los colorantes son específicos porque…

A

Son complementarios a la cadena de DNA que estamos buscando.

27
Q

Después de hacer la PCR hacemos una _____.

A

Electroforesis

28
Q

Si queremos buscar la presencia de DNA de bacterias en una PCR buscaremos el gen.

A

16s

29
Q

Para hacer una electroforesis se necesita (3)

A
  • Cámara de electroforesis
  • Gel de agarosa
  • Marcador de peso molecular
30
Q

Electroforesis:
Es la mezcla de moléculas de ADN o proteínas de tamaño conocido que permite determinar por comparación el tamaño de las moléculas sometidas a electroforesis.

A

Marcador de peso molecular.

31
Q

Tipos de cuantificación: (2). y sus características.

A
  • Absolura: Mide y cuantifica los genes (Ejemplo: Carga viral).
  • Relativa: Evalúa los cambios en la expresión de un gen en una mezcla de ácidos nucleicos