PCR

Question 1

Una PCR requiere (4)

Answer 1

• Secuencia de ADN
• Enzima DNA polimerasa
• Desoxirribonucleótidos (nNTP)
• Primers o iniciadores

Question 2

La PCR se realiza en un _______.

Answer 2

Termociclador

Question 3

La DNA polimerasa queríamos proviene de un geisegrg y y se llama ______.

Answer 3

Thermus acuáticus

Question 4

La temperatura de soporte de la DNA polimerasa es de _____ grados.

Answer 4

95

Question 5

Es un cofactor de la taw polimerasa.

Answer 5

Cloruro de magnesio

Question 6

Se encarga de mantener el Ph

Answer 6

Amortiguador o buffer

Question 7

Los iniciadores los diseñamos haciéndolos complementarios a la secuencia de DNA que estoy buscando, vamos a tener 2 tipos de amortiguadores que son …

Answer 7

• Forward: Va de 5’ a 3’

- Reverse: Va de 3’ a 5’

Question 8

Amortiguador que va de 5’ a 3’

Answer 8

Forward

Question 9

Amortiguador que va de 3’ a 5’

Answer 9

Reverse

Question 10

Los primers o amortiguadores tienen muchas (2) para que sean más estables y complementarios al DNA.

Answer 10

Citosinas y Guaninas

Question 11

Fases de la PCR (3)

Answer 11

• Desnaturalización
• Hibridación
• Temperatura de extensión

Question 12

Describa la fase de desnaturalización.

Answer 12

Hay que separar la hélice de ADN y como no hay elicasa usamos una temperatura de 95 grados.

Question 13

Describa la fase de hibridación:

Answer 13

Hacer que los primeros encuentren su complemento bajando la temperatura a temperatura de alineamiento. Tm

Question 14

Describa la fase de temperatura de extensión.

Answer 14

Ponemos la temperatura de extensión (72 grados) para que la polimerasa empiece a poner nucleótidos.

Question 15

Se deben realizar ___ - ____ ciclos de PCR.

Answer 15

30-40

Question 16

PCR que dice si existe o no el gen que estoy buscando pero no dice cuántos de estos hay.

Answer 16

PCR punto final

Question 17

PCR que permite ver varios genes en una sola toma de muestra.

Answer 17

PCR múltiple

Question 18

PCR que usamos para buscar RNA.

Answer 18

PCR transcriptas reversa

Question 19

Para Covid usamos esta mezcla de PCR’s

Answer 19

• Transcriptasa reversa y tiempo real

Question 20

PCR que nos sirve para conocer la CARGA VIRAL.

Answer 20

• PCR tiempo real.

Question 21

Para poder cuantificar la carga viral en PCR tiempo real le ponemos ______.

Answer 21

Colorantes

Question 22

Tipos de colorantes que usamos en PCR tiempo real.

Answer 22

• Específicos

- No específicos

Question 23

Colorante que se une a una DOBLE cadena de DNA

Answer 23

NO específicos

Question 24

Se dice que los colorantes no específicos son no específicos porque ….

Answer 24

Los primers son un T-loop y como un t-loop tiene doble cadena se pueden unir a los primers y marcarlo como si fueran el segmento que buscamos.

Question 25

Colorantes que se unen a una sola cadena de DNA.

Answer 25

Específicos

Question 26

Los colorantes son específicos porque…

Answer 26

Son complementarios a la cadena de DNA que estamos buscando.

Question 27

Después de hacer la PCR hacemos una _____.

Answer 27

Electroforesis

Question 28

Si queremos buscar la presencia de DNA de bacterias en una PCR buscaremos el gen.

Answer 28

16s

Question 29

Para hacer una electroforesis se necesita (3)

Answer 29

• Cámara de electroforesis
• Gel de agarosa
• Marcador de peso molecular

Question 30

Electroforesis:
Es la mezcla de moléculas de ADN o proteínas de tamaño conocido que permite determinar por comparación el tamaño de las moléculas sometidas a electroforesis.

Answer 30

Marcador de peso molecular.

Question 31

Tipos de cuantificación: (2). y sus características.

Answer 31

• Absolura: Mide y cuantifica los genes (Ejemplo: Carga viral).
• Relativa: Evalúa los cambios en la expresión de un gen en una mezcla de ácidos nucleicos