P2 Flashcards
O que é plasmídeo? Qual é a importância dele na recombinação de RNA?
Local da bactéria onde ocorre a recombinação. É escolhido este local por apresentar DNA, diferente do Cromossomo central (DNA circular), está em grande quantidade dentro da célula.
Qual é a principal e primeira proteína produzida com recombinação genética? Por que foi importante a obtenção dessa proteína?
Insulina. Foi importante pois para a extração dessa proteína, anteriormente envolvia o sacrifício de animais, especialmente suínos.
Explique como a PCR simula o funcionamento normal da célula no quesito duplicação do DNA.
A duplicação dentro das células ocorrem da seguinte maneira:
Como a molécula de DNA se abre, necessita da DNA polimerase criando um filamento 5’ p/ 3’ continuamente no filamento de direção 3’ 5’ e descontinuamente de 5’ 3’ (formando fragmentos de Okazaki). Mas para iniciar necessita de primer (sequência de RNA de 10 a 15 nucleotídeos - esse é formado por RNA polimerase). Ela é semi-conservativa pois conserva um filamento mãe em cada DNA formado.
Da mesma forma o PCR irá criar o finalmento por meio da utilização inicialmente de um primer e em seguida a DNA polimerase. No entanto a enzima DNA polimerase utilizada é a DNA Taq polimerase retirada da bactéria Thermus aquaticos pois estes são encontrados em lava vulcânica e aquentam altas temperaturas.
Em relação ao cDNA: Qual a tecnologia para sua obtenção e qual sua aplicação?
Objetivo: tecnologia recombinante teve objetivo inicial para fazer clonagem de genes de interesse. O problema foi tentar fazer a bactéria transcrever e traduzir para formar a proteína, pois a utilização do gene eucarioto acabou falhando porque necessita de splicing para formar a proteína correta, mas o procarioto não faz splicing. Foi necessário a utilização do mRNA que foi transcrito por meio da transcriptase reversa (vírus) formando um único filamento de DNA que depois tem o outro filamento formado por DNA polimerase, formando cDNA (DNA complementar). Este pode ser inserido na bactéria para realizar a técnica de DNA recombinante.
Diferencie clonagem de DNA em bactéria de clonagem em PCR.
PCR pode clonar quantidades grandes de DNA, até cromossomos inteiros, em bactéria pode não comportar e perder o material genético. Precisa ser material pequeno para bactéria. DNA tem custo mais baixo porque a célula contém o material necessário para realização da transcrição/tradução, basta manter a bactéria viva, enquanto para o PCR necessita comprar.
Quais são as aplicações práticas para a clonagem em bactérias?
Conseguir amplificar DNA (duplicar/clonar). Desvantagem (uso no máximo 5 genes). Se deseja utilizar somente a duplicação pode utilizar gene normal, se quiser formar proteínas, utilizar cDNA. Vantagem é reprodução/multiplicação acelerada.
Quais as aplicações práticas para aplicação clonagem em termociclador.
Amplificação/clonagem de DNA/gene/cromossomo. No termociclador da pra fazer material genético em grande quantidade. Termociclador não é utilizado para formar proteína, somente gene/cromossomo. A Taq polimerase é uma DNA utlizada de uma batéria isolada de lava de vulcão por suportar altas temperaturas.
No que constitui as vacinas de RNA?
(CORRIGIR)
Vacina mais utilizada. Precisa ser refrigerada para não degradar o RNA. Maior eficiência, traduzido só ao entrar.
Vacina covid: mRNA traduzido, forma proteína da capsula,
No que constitui vacinas de DNA?
(COMPLEMENTAR)
Não precisa refrigerar, DNA demora para degradar, necessita de estabilizante, custo
Por que vacinas de RNA são consideradas mais seguras que vacinas de DNA?
Porque RNA entra no citoplasma, tem que ser transcrito e traduzido, enquanto o DNA entra direto no nucleo, estando exposto ao nosso DNA.
Explique o motivo da utilzação da transcriptase reversa para a recombinação genética:
A primeira tentativa da multiplicação de insulina não obteve êxito pois pegaram um gene, este deveria passar por splicing, mas não passou pois a célula procariota não faz splicing, logo a proteína formada não era a insulina. Para corrigir o problema, isolaram o RNA mensageiro ao invés do gene, pois já passou por splicing. Assim, o RNA é transformado em DNA pela transcriptase reversa que gera um filamento de DNA e em sequência é formado um filamento complementar por uma DNA polimerase formando o cDNA (DNA complementar) que ao passar por transcrição e tradução formou com êxito a proteína desejada.
O que é o cDNA?
Duplo filamento de DNA formado por mRNA transcrito por transcriptase reversa.
Como é adicionado o cDNA no plasmídeo?
É utilizado a enzima de restrição para quebrar a ligação fosfodiester do cDNA e do DNA do plasmídeo, ligando ambos um ao outro.
O que é PCR?
Equipamento responsável por duplicar/produzir em grande quantidade de material genético (DNA). É feito a extração do DNA puro das células e duplicação para aumentar a quantidade.
O que é a sigla PCR?
Polymerase Chain Reaction
