Outils Génétiques Et Vecteurs Viraux

Question 1

Types d’outils moléculaires sensibles à la lumière

Answer 1

• protéines fluorescentes d’origine naturelle
• protéines de fusion
• protéines photosensibles d’origine naturelle
• senseurs encodés génétiquement

Question 2

Quelles sont les protéines fluorescentes d’origine naturelles

Answer 2

GFP
RFP

Question 3

Qu’est ce qu’une protéine de fusion

Answer 3

Protéine liée à une GFP

Question 4

Quel problème peut rencontré une protéine de fusion

Answer 4

La fonction des protéines peut être affectée en ajoutant une autre protéine

Question 5

Quelles sont les protéines photosensibles d’origine naturelle

Answer 5

Channelrhodopsin-1,2…
Halorhodopsin
Luciférase de la mouche à feu

Question 6

Channelrhodopsin-1,2…

Answer 6

Protéine qui forme des canaux ioniques activables par la lumière
Utiliser pour activer les neurones avec de la lumière

Question 7

Vrai ou faux: la channelrhodopsin est utilisée pour inhiber les neurones avec la lumière

Answer 7

Faux (activer)

Question 8

Halorhodopsin

Answer 8

Pompe ionique activable par la lumière
Utilisée pour inhiber des neurones avec de la lumière

Question 9

Luciférase de la mouche à feu

Answer 9

Enzyme oxidative qui catalyse la production de la lumière suite à l’oxydation de luciférine

Question 10

La Luciférase de la mouche à feu est utilisée souvent pour quoi?

Answer 10

Rapporteur d’activité d’un gène

Question 11

Senseurs encodés génétiquement

Answer 11

Monitore les processus/activités biologiques
En présence de calcium, la cam et m13 bouchent ce qui cause un changement de conformation de la cpFP qui l’active

Question 12

Vrai ou faux: plus il y a de calcium dans une cellule, plus il y a de fluorescence

Answer 12

Vrai

Question 13

À quoi servent les outils encodés génétiquement

Answer 13

• visualiser des cellules
• visualiser des compartiments cellulaires
• visualiser des protéines
• monitorer des phénomènes
• activer/inhiber des cellules

Question 14

Caractéristiques des outils encodés génétiquement

Answer 14

• protéines produites par la cellule qui est à l’étude
• expression des protéines peut être ciblée spatialement et temporellement
• expression des protéines peut être temporaire ou permanente
• prend du temps
• nécessite bcp d’expertise
• intensité des signaux parfois faible

Question 15

Insertion des outils dans les cellules

Answer 15

Cellules somatiques (ADN introduit dans type cellulaire, mais pas transférée à la descendance)
Cellules germinales (produit un animal génétiquement modifié)

Question 16

Selon la méthode d’insertion des outils dans les cellules somatiques, l’expression peut être:

Answer 16

Temporaire: ADN ne s’intègre pas dans le génome et n’est pas transmis pendant la division cellulaire
Permanente: ADN s’intègre dans le génome

Question 17

Méthodes non-virales d’insertion des outils génétiques dans les cellules somatiques

Answer 17

• calcium phosphate
• lipofection
• électroporation

Question 18

Vecteurs viraux utilisés pour insérer outils génétiques dans cellules somatiques

Answer 18

Lentivirus - vecteur lentiviral
Adénovirus - vecteur adenoviral (AD5)
virus rabique - vecteur rabique recombinant
Adenoassociated virus (AAV)

Question 19

Comment bâtir un vecteur viral

Answer 19

• enlever le plus de gènes viraux possible: reste l’origine de réplication et les séquences d’empaquetage
• insérer le gène d’intérêt

Question 20

Lentivirus

Answer 20

ARN
Intégration aléatoire du génome
Enveloppé-pseudotypage

Question 21

Adénovirus

Answer 21

ADN double brin
Non enveloppé
Gutless vecteur: séquences essentielles (empaquetage), mais doit garder sa taille de base so il y a des séquences pas rapport

Question 22

Virus rabique

Answer 22

Virus enveloppé en forme de balle de fusil
ARN simple brin négatif
Infecté neurone et traverse la synapse
RABV: glycoprotéine
Restriction mono synaptique: délétion de la glycoprotéine (expression de la protéine x )

Question 23

Pseudotypage

Answer 23

Produire un virus qui contient autre chose sur sa surface que la protéine G
- virus produit dans une cellule qui exprime la protéine g
Virus qui infecte des cellules et qui utilise les cellules qui expriment Env (ligand TVA)
Changement surface virus G—> Env

Question 24

Adeno associated virus (AAV)

Answer 24

ADN simple brin
Petit
Réplication dépend des autres virus
30% pop a ac contre

Question 25

Contrôle de qualité

Answer 25

- évaluation de la pureté - intégrité des capsides - validation in vitro - validation in vivo

Question 26

Les AAV infectent quelles cellules

Answer 26

- qui se divisent - quiescentes

Question 27

Génie et design des vecteurs viraux

Answer 27

- améliorer des caractéristiques existantes - ajouter des new caractéristiques désirables - faciliter la production - diminuer l’immunogénécité

Question 28

Introduction d’ADN dans cellules germinales

Answer 28

ADN plasmidique est introduit directement dans un embryon ou dans des cellules embryonnaires Ces cellules sont injectées dans un embryon Si les cellules ES se dev en cellules germinales, le gène d’intérêt est transmis aux générations suivantes

Question 29

L’introduction du gène dans les cellules germinales peut être

Answer 29

- aléatoire (animaux transgéniques) - ciblée par recombinaison homologue (ko, ki)

Question 30

Introduction aléatoire : animaux transgéniques

Answer 30

ADN plasmidique contenant un promoteur et un gène d’intérêt est injecté dans un embryon Pls copies de cet adn vont s’intégrer de façon aléatoire dans le génome Pls lignées d’animaux seront générées déepndsnemment du nb de copies intégrées et du site d’intégration du transgène

Question 31

Germline gene transfer: ko, ki animals

Answer 31

Targeting vector contenant le gène d’imtérêt est flanqué par des régions d’homologie et des marqueurs de sélection et est électroporé dans des cellules ES Cette version modifiée du gène sera insérée de façon spécifique au locus endogène du gène d’intérêt par un mec de recombinaison homologue (s’intègre exactement où on veut) Cellules es sont sélectionnées pour l’intégration du gène Les cellules positives sont injectées dans un embryon pour obtenir une chimère Les chimères sont croisées pour obtenir une transmission à la descendance

Question 32

Que peut-on faire avec les ko,ki

Answer 32

-remplacer un gène (par un mutant ou avec une construction codant pour une protéine de fusion) -remplacer un promoteur (w/ celui d’un autre gène, promoteur inductible ou répressible par une drogue )