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Champ Immersion Santé Mentale > Outils Génétiques Et Vecteurs Viraux > Flashcards

Outils Génétiques Et Vecteurs Viraux Flashcards

1
Q

Types d’outils moléculaires sensibles à la lumière

A
  • protéines fluorescentes d’origine naturelle
  • protéines de fusion
  • protéines photosensibles d’origine naturelle
  • senseurs encodés génétiquement
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Q

Quelles sont les protéines fluorescentes d’origine naturelles

A

GFP
RFP

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3
Q

Qu’est ce qu’une protéine de fusion

A

Protéine liée à une GFP

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4
Q

Quel problème peut rencontré une protéine de fusion

A

La fonction des protéines peut être affectée en ajoutant une autre protéine

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5
Q

Quelles sont les protéines photosensibles d’origine naturelle

A

Channelrhodopsin-1,2…
Halorhodopsin
Luciférase de la mouche à feu

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6
Q

Channelrhodopsin-1,2…

A

Protéine qui forme des canaux ioniques activables par la lumière
Utiliser pour activer les neurones avec de la lumière

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7
Q

Vrai ou faux: la channelrhodopsin est utilisée pour inhiber les neurones avec la lumière

A

Faux (activer)

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8
Q

Halorhodopsin

A

Pompe ionique activable par la lumière
Utilisée pour inhiber des neurones avec de la lumière

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9
Q

Luciférase de la mouche à feu

A

Enzyme oxidative qui catalyse la production de la lumière suite à l’oxydation de luciférine

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10
Q

La Luciférase de la mouche à feu est utilisée souvent pour quoi?

A

Rapporteur d’activité d’un gène

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11
Q

Senseurs encodés génétiquement

A

Monitore les processus/activités biologiques
En présence de calcium, la cam et m13 bouchent ce qui cause un changement de conformation de la cpFP qui l’active

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12
Q

Vrai ou faux: plus il y a de calcium dans une cellule, plus il y a de fluorescence

A

Vrai

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13
Q

À quoi servent les outils encodés génétiquement

A
  • visualiser des cellules
  • visualiser des compartiments cellulaires
  • visualiser des protéines
  • monitorer des phénomènes
  • activer/inhiber des cellules
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14
Q

Caractéristiques des outils encodés génétiquement

A
  • protéines produites par la cellule qui est à l’étude
  • expression des protéines peut être ciblée spatialement et temporellement
  • expression des protéines peut être temporaire ou permanente
  • prend du temps
  • nécessite bcp d’expertise
  • intensité des signaux parfois faible
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15
Q

Insertion des outils dans les cellules

A

Cellules somatiques (ADN introduit dans type cellulaire, mais pas transférée à la descendance)
Cellules germinales (produit un animal génétiquement modifié)

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16
Q

Selon la méthode d’insertion des outils dans les cellules somatiques, l’expression peut être:

A

Temporaire: ADN ne s’intègre pas dans le génome et n’est pas transmis pendant la division cellulaire
Permanente: ADN s’intègre dans le génome

17
Q

Méthodes non-virales d’insertion des outils génétiques dans les cellules somatiques

A
  • calcium phosphate
  • lipofection
  • électroporation
18
Q

Vecteurs viraux utilisés pour insérer outils génétiques dans cellules somatiques

A

Lentivirus - vecteur lentiviral
Adénovirus - vecteur adenoviral (AD5)
virus rabique - vecteur rabique recombinant
Adenoassociated virus (AAV)

19
Q

Comment bâtir un vecteur viral

A
  • enlever le plus de gènes viraux possible: reste l’origine de réplication et les séquences d’empaquetage
  • insérer le gène d’intérêt
20
Q

Lentivirus

A

ARN
Intégration aléatoire du génome
Enveloppé-pseudotypage

21
Q

Adénovirus

A

ADN double brin
Non enveloppé
Gutless vecteur: séquences essentielles (empaquetage), mais doit garder sa taille de base so il y a des séquences pas rapport

22
Q

Virus rabique

A

Virus enveloppé en forme de balle de fusil
ARN simple brin négatif
Infecté neurone et traverse la synapse
RABV: glycoprotéine
Restriction mono synaptique: délétion de la glycoprotéine (expression de la protéine x )

23
Q

Pseudotypage

A

Produire un virus qui contient autre chose sur sa surface que la protéine G
- virus produit dans une cellule qui exprime la protéine g
Virus qui infecte des cellules et qui utilise les cellules qui expriment Env (ligand TVA)
Changement surface virus G—> Env

24
Q

Adeno associated virus (AAV)

A

ADN simple brin
Petit
Réplication dépend des autres virus
30% pop a ac contre

25
Q

Contrôle de qualité

A
  • évaluation de la pureté
  • intégrité des capsides
  • validation in vitro
  • validation in vivo
26
Q

Les AAV infectent quelles cellules

A
  • qui se divisent
  • quiescentes
27
Q

Génie et design des vecteurs viraux

A
  • améliorer des caractéristiques existantes
  • ajouter des new caractéristiques désirables
  • faciliter la production
  • diminuer l’immunogénécité
28
Q

Introduction d’ADN dans cellules germinales

A

ADN plasmidique est introduit directement dans un embryon ou dans des cellules embryonnaires
Ces cellules sont injectées dans un embryon
Si les cellules ES se dev en cellules germinales, le gène d’intérêt est transmis aux générations suivantes

29
Q

L’introduction du gène dans les cellules germinales peut être

A
  • aléatoire (animaux transgéniques)
  • ciblée par recombinaison homologue (ko, ki)
30
Q

Introduction aléatoire : animaux transgéniques

A

ADN plasmidique contenant un promoteur et un gène d’intérêt est injecté dans un embryon
Pls copies de cet adn vont s’intégrer de façon aléatoire dans le génome
Pls lignées d’animaux seront générées déepndsnemment du nb de copies intégrées et du site d’intégration du transgène

31
Q

Germline gene transfer: ko, ki animals

A

Targeting vector contenant le gène d’imtérêt est flanqué par des régions d’homologie et des marqueurs de sélection et est électroporé dans des cellules ES
Cette version modifiée du gène sera insérée de façon spécifique au locus endogène du gène d’intérêt par un mec de recombinaison homologue (s’intègre exactement où on veut)
Cellules es sont sélectionnées pour l’intégration du gène
Les cellules positives sont injectées dans un embryon pour obtenir une chimère
Les chimères sont croisées pour obtenir une transmission à la descendance

32
Q

Que peut-on faire avec les ko,ki

A

-remplacer un gène (par un mutant ou avec une construction codant pour une protéine de fusion)
-remplacer un promoteur (w/ celui d’un autre gène, promoteur inductible ou répressible par une drogue )

Champ Immersion Santé Mentale (2 decks)

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