Observations microscopiques des microorganismes Flashcards
Quels sont les 2 grand types de microscopes
photonique et électronique
Quel autre nom peut on donner au microscope photonique
optique
Quel est la grande différence entre photonique et électronique
photonique: longueur d’onde des photons
électronique: longueur d’onde des électrons
3 Composé des microscopes
condensateur
objectif
oculaire
Quel est la formule pour trouver l’agrandissement
objectif x oculaire
quel est la force de l’oculaire utilisé en laboratoire sur le microscope photonique
10x
quel sont les objectif possible en laboratoire sur le microscope photonique
10x
40x
100x
Définir la limite de résolution
distance minimale entre deux points qui peuvent être percus comme étant distincts pour tout système optique
Nommer le facteur limitant du microscope photonique
Limite de résolution
Nommer les facteurs ou on peut intervenir
longueur d’onde
indice de réfraction du milieu
1/2 angle du cône de lumière entrant dans l’objectif
Longueur d’onde de la lumière visible
400 à 700 nm
longueur d’onde Ultraviolet
180 à 400 nm
indice de réfraction de l’Air
1.0
indice de réfraction du verre
1.5
indice de l’huile à réfraction
1.56
Qu’est ce que l’huile a réfraction
utilisé pour les objectifs à forts grossissement…
limite de construction de l’objectif
coût
Quel autre limite
le contraste
définition du contraste
capacité de distinguer une structure de son environnement
vrai ou faux: le contraste est proportionnel à la différence de quantité de lumière absorbée
vrai
Vrai ou faux: dans une préparation à l’état frais le contraste augmente
faux il diminue
Comment peut on augmenter le contraste dans un microscope a fond clair
Coloration
Pourquoi doit-on colorer lors de l’utilisation d’un microscope à fond clair
peu de colorant vitaux ce qui exigent une fixation et une coloration
vrai ou faux: les colorants sont toujours de charges positives
faux les colorants sont positif et négatifs
vrai ou faux: les colorants sont hydrophobes
vrai
que veut dire coloration simple
un seul colorant
Vrai ou faux: la charge du bleu de méthylène est +
vrai
de quel couleur est le violet cristal dans une charge +
violet
de quel couleur est le violet cristal dans une charge -
rouge
c’est quoi la coloration de Ziel-Neelsen?
La coloration de Ziehl-Neelsen est une méthode de coloration permettant l’identification des mycobactéries au microscope.Elle fait partie des colorations qui mettent en évidence l’acido-alcoolo-résistance, caractère fondamental des mycobactéries, en prenant en compte la difficulté de pénétration des colorants.
nommer des types de microscopes photoniques
- a fond clair
- contraste de phase
- fond noir
- contraste d’interférence
- fluorescence
Comment peut on décrire l’image d’un microscope a fond noir
structure clair sur fond noir
quels sont les différences du condensateurs d’un microscopes à fond noir
cône de Abbe + miroirs, éclairage obliques et visualisation des rayons déviés
vrai ou faux au microscope a fond noir, on observe des cellules mortes
faux on observe des cellules vivantes
vrai ou faux au microscope a fond noir on observe des structures sans fixation et coloration
vrai
différences internes du microscopes à contraste de phase
condensateurs et objectifs, anneaux de phase
principe du microscope à contraste de phase
mise en phase de la lumière incidente. La réfraction de la lumière par les structures cellulaires sont des changements de phase de la lumière et change aussi l’intensité de la lumière. Les structures de densité différentes réfractent différemment la lumière et l’intensité lumineuse est différentes
comment peut on décrire l’image observé au microscope à contraste de phase
images sombres sur fond clair, parfois filtres colorés
vrai ou faux le microscope à contraste de phase est moins récent que le microscope à fond noir
faux contraste de phase est plus récent
quel est la limite du microscope à contraste différentielle
préparation transparente
comment fonctionne le microscope à contraste d’interférence différentielle
lumière polarisée à angle variable
réfractions différentes modifie la polarisation
intensité lumineuse différente
coloration vive et impression de pseudo-relief 3d
différences du microscope à contraste d’interférence différentielle
condensateur: système de lentilles polarisantes contrôlées par informatique
vrai ou faux Avec le microscopes d’interférence différentielle on utilise la coloration et la fixation
faux on utilise aucun des deux on visualise de structures fines sans coloration ni fixation
vrai ou faux Avec le microscopes d’interférence différentielle on observe des cellules vivantes
vrai
2 applications des microscopes à flurescence
fluorochrome vitaux
immunofluorescence
comment est ce qu’on utilise le microscope à (épi)fluorescence
On utilise des colorants fluorescents (fluorochrome ), ils absorbent les rayons UV (émission visible).Lampe UV excitatrice, filtre sélectif (bloquant) observation visible.
c’est quoi des fluorochrome vitaux
distinctions des cellules vivantes ou mortes
quelles sont les distinctions entre les cellules mortes et vivantes au microscopes à fluorescence
vivante: exclusion par la membrane cytoplasmique
morte: membrane cytoplasmique perméable
Comment fonctionne l’immunofluorescence
couplage d’anticorps spécifique/protéines/ organisme aux fluorochromes
détection des anticorps par fluorescence
vrai ou faux: l’immunofluorescence peut aider dans le diagnostique d’une maladie
vrai
Expliquez comment l’immunofluorescence peut jouer un rôle dans le diagnostique
On peut détecter des pathogènes selon la sensibilité de la fluorescence à l’anticorps. On peut le faire dans l’environnement et dans l’échantillon clinique
En quel année a été créer le microscope électronique
1931
Quel grossissement est utilisé au microscope électronique et quel est la limite de résolution ?
grossissement = 400,000x
Limite de résolution = 0.05nm
Comment fonctionne l’image d’un microscope électronique
pour former l’image en contrôlant le faisceau d’électrons et pour le faire converger sur un plan particulier par rapport à l’échantillon. Le principe est similaire à celui du microscope optique qui utilise des lentilles en verre pour focaliser la lumière sur ou au travers de l’échantillon pour former une image.
Quel sont les parties présentent que sur le microscope électronique
électro-aimant lentille magnétique écran fluorescent plaque photographique détecteur numérique
Limite du microscope électronique
Les électrons voyagent dans le vide et sont non-pénétrant
Lorsque le matériel est vivant, le contraste diminue, on doit donc faire un coloration pour augmenter le contraste
Expliquez la technique d’ombrage
On vaporise de métaux ce qu’on veut observer avec un angle précis jusqu’à ce que l’échantillon soit recouvert afin qu’il projette une ombre.
On fait la même chose avec des billes témoins qui ont une taille prédéfini afin de comparer les ombres.
Expliquez la technique de contraste négatif
Le contraste négatif permet d’assombrir le fond sans colorer l’objet lui-même et donc de le rendre visible sans le modifier, par simple contraste. Il y a une accumulation d’Acide phosphotungstique dans le creux , les creux sont donc plus ombres pour qu’on voit les reliefs de la structure d’un virus
Expliquez le cryodécapage
on sublime la glace superficielle, sous vide et à basse température ; cela augmente les reliefs de l’échantillon, ce qui donne une meilleure visibilité au microscope. On congèle l’échantillon une très basse température -180 , pour faire une coupe transversale on fracture aux zones de faiblesse, ensuite on fait une technique d’ombrage
expliquez l’immuno-localisation cellulaire
Avec la fluorescence, on peut localiser un anticorps, structure et protéine spécifique dans une cellule
2 types de microscopie électronique
à transmission et à balayage
expliquez la cryomicroscopie et/ou la cryotomographie électronique
Contrairement à d’autres techniques de préparation (dont la coloration négative), aucun colorant ou fixateur chimique n’est utilisé. De plus, le complexe macromoléculaire peut rester dans un environnement (tampon) proche de ses conditions physiologiques (en termes de pH et de concentration en sel). La congélation rapide des échantillons dans de l’éthane liquide (−160 °C) fige ces derniers dans leur état natif dans une glace amorphe4. Les images obtenues étant des projections 2D de l’ensemble des objets congelés, ceci permet d’accéder à la structure interne de macromolécules complexes. L’utilisation de la cryo-microscopie (manipulation et maintien des échantillons à basse température) multiplie la durée de vie de l’échantillon sous le faisceau d’électrons par un facteur deux ou trois. On peut faire une reconstruction 3d.
tomographie: image de strate de l’échantillon
Comment fonctionne le microscope à balayage
On fait le balayage de la surface de l’échantillon ce qui donne à la surface un effet 3d. Les électrons sont réfléchi et capter par un détecteur latéral. La limite de résolution est augmenté.
Comment fonctionne le microscope à transmission
Les électrons traversent l’échantillon sont détecter sous l’échantillon, on a donc une image par transparence. La limite de résolution diminue.
différence entre l’image par transmission et l’image par balayage
Transmission: intérieur de la structure
Balayage: structure 3d extérieur
Comment fonctionne le microscope confocal à balayage laser
sa source lumineuse est un laser (UV), qui balaye point par point l’objet à analyser horizontalement, verticalement et temporellement. On utilise des fluorochromes afin d’augmenter le contraste. Dans sa configuration « réflexion », il utilise un miroir semi-réfléchissant, qui réfléchit le rayon provenant de l’objet vers un détecteur. Ce dernier peut ainsi mesurer l’intensité lumineuse de chaque point et la stocker dans un ordinateur. On fait une numérisation de l’image, on peut avoir une reconstitution et quantification informatique en 3d ou 4d (temps )
applications du microscope à balayage laser
détection ou localisation d’une structure dans une cellule, un tissus
développement d’un biofilm dans le temps
quantification + position de cellule vivantes/mortes
nommer 2 types de microscopes à balayage de sonde
effet tunnel, force atomique (nanotechnologie, biomatériaux)
expliquez le microscope a effet tunnel (balayage de sonde)
une sonde balaie la surface de l’échantillon . mesure le déplacement vertical/ horizontal et le courant entre les nuages électroniques, liens intermoléculaire en milieu aqueux
