Mise en lame

Question 1

Définition histologie?

Answer 1

science des tissus qui permet de detecter et de localiser

Question 2

Définition histochimie?

Answer 2

Technique basé sur des réactions biochimiques qui permettent de mettre en évidence in situ les différents constituants ( P, ADN, ARNm)

Question 3

Quelles sont les techniques moderne de detection ?

Answer 3

• histoenzymologie
• Immunohistochimie

Question 4

Définition histoenzymologie?

Answer 4

Detection et localisation in situ dans un tissu d’un activité enzymatique
donne un précipité coloré au MO

Question 5

Défintiion immunohistochimie?

Answer 5

fait appel à pls Ac pour detecter et localiser spécifiquement une P in situ

Question 6

Qu’est ce que le Western Blotting?

Answer 6

détection d’une P dans un tissu broyé, permet la detection seulement

Question 7

Qu’est que l’hybridation in situ?

Answer 7

étude ARN sur tissu in situ

Question 8

Qu’est ce que la RT-PCR?

Answer 8

étude ARN sur tissu broyé

Question 9

Quelles est l’ensemble des opérations histolgogique?

Answer 9

• prélèvement
• fixation dans formol
• inclusion paraffine: - déshydration= bain d’alcool croissant
  - bain dans liquide intermédiaire (xylène)= éclaircissement
  - imprégnation= infiltration
  - mise en bloc= enrobage
• coupe microtome
• collage sur lame
• coloration: -bain liquide intermédiaire
  - réhydratation (alcool décroissant)
  - coloration
• montage pour conservation

Question 10

Pourquoi faut-il procéder à une déshydration et un éclaircissement?

Answer 10

• paraffine non miscible à l’eau= hydrophobe
• paraffine non miscible à l’alcool
• miscible au hydrocarbure

Question 11

qu’est ce que la paraffine ?

Answer 11

• mélange d’hydrocarbures
• formule générale: Cn H2n+2

Question 12

Quel est le point de fusion de la paraffine?

Answer 12

56°C

Question 13

Quels sont les roles de la fixation ?

Answer 13

• immobiliser en respectant la morphologie
• conserver et permettre confection de préparation permanente
• prévenir autolyse cellulaire
• prévenir putréfaction bactérienne post mortem= tissu imputrescible

Question 14

Quel solution est un agent fixateur ?

Answer 14

• formol

Question 15

Quelles sont les propriétés du formol?

Answer 15

• pénétration rapide mais fixation lente
• excellent morphologie
• pas de durcissement tissulaire qui rendrait le tissu friable
• bonne préservation des P, ADN, ARN

Question 16

Quels est le rôle du fixateur?

Answer 16

• précipite, polymérise, coagule P
• liaison covalente inter et intra moléculaire entre P, glycoP, polysaccharide et AN
• tue les cellules
• bloque les réaction enzymatique

Question 17

Quelles sont les étapes de mise en lame avec OCT?

Answer 17

-prélèvement
- fixation
- bain de sucrose
- congélation
- uniquement mise en bloc
- congélation
- coupe cryostat –24 à -30°C)
- collage ( coupe laisser 30min à 1h a RT pour être sur que ca tient)
- coloration
- montage
( possibilité du juste faire Pré- Congé-MeB-congé-coupe…)

Question 18

Combien de famille de colorant existe-t-il?

Answer 18

2 familles: - classique (tue)
- vitaux (vivant)

Question 19

Différence entre colorant et fluorochrome?

Answer 19

l’un pigmente le tissu l’autre émet de la lumière

Question 20

Quelle précaution à prendre avec cellules congeler pour la coloration ?

Answer 20

• sortir lame 10 à RT
• hydrater avec un tampon

Question 21

Avec quoi fait on le montage ?

Answer 21

résine synthétique type Eukitt

Question 22

Quelles etapes comprennent le montage ?

Answer 22

• déshydratation
• éclaircissement
• dépôt goutte de montage
• montage lamelle

Question 23

Quel colorants de routine existe-t-il?

Answer 23

– hématoxyline éosine avec noyau violet et cytoplasme rose
- hématoxyline eosine safran avec fibre collagène jaune

Question 24

Comment se comporte la protéine en immunohistochimie?

Answer 24

comme un Ag

Question 25

Que nécessite l’immunohistochimie selon la taille de l’Ac?

Answer 25

perméabiliser car Ac trop gros pour passer la membrane

Question 26

Quelle est la différence entre un marquage directe et in directe?

Answer 26

• utilisation d’un anticorps simple
• utilisation d’anticorps primaire et secondaire

Question 27

Quel précipité donne la peroxydase avec la P intéret ? la phosphatase alcaline?

Answer 27

• précipité noir
• précipité rose

Question 28

Quelles sont les deux traceurs enzymatique ?

Answer 28

• peroxydase
• phosphatase alcaline

Question 29

Quelle est le substrat du peroxydase? phosphatase alcaline ?

Answer 29

• h2O2
• BCIP

Question 30

Que signifie FITC? TRITC?

Answer 30

• fluorescéine
• rhodamine

Question 31

Quelles sont les étapes de mises en lame avec un traceur enzymatique? fluorochrome?

Answer 31

• lame a RT
• déparaffinage (xylène)
• réhydratation
• perméabilisation tissus (détergent)
• saturation sites non spécifique
• incubation avec Ac primaire puis Ac secondaire couplé à une enzyme/ [fluorochrome puis lavage]
• incubation avec substrat
• arrêt réaction enzymatique
• déshydratation
• éclaircissement
• dépôt goutte montage
• montage lamelle pour préservation

Question 32

Quelles sont les fluorochromes qui sont dirigés directement vers l’ADN?

Answer 32

fluorochrome spéciale ADN
- Hoechst
- DAPI