Miniprep

Question 1

Qu’est-ce qu’une miniprep?

Answer 1

Une technique permettant d’extraire une petite quantité (100ng à 4μg) d’ADN plasmidique provenant de bactéries ayant subi une transformation.

Question 2

Quelle est la bactérie ayant subi une transformation la plus souvent utilisée pour les miniprep ?

Answer 2

E. coli

Question 3

En quoi consiste la technique de la miniprep ?

Answer 3

Elle consiste à lyser les cellules (gras) par un détergent (SDS) en milieu alcalin (lyse alcaline(NaOH/basique)), ce qui dénature les protéines et déstabilise la membrane afin de libérer l’ADN génomique ET plasmidique.
En changeant le pH près de la neutralité (acide), l’ADN génomique et les protéines sont préipitées
(ADN plasmidique capable de reprendre sa forme (renaturé), mais changement trop rapide pour que ADN génomique renature -> reste dénaturé)
Centrifugeuse précipite déchet
-Adsorption de l’ADNp: concentration élevée en sels
-Élution de l’ADNp: concentration faible en sels

Question 4

Qu’est-ce que l’absorption?

Answer 4

C’est lorsque les particules entre dans le milieu (ils y sont absorbés).

Question 5

Qu’est-ce que l’adsorption?

Answer 5

C’est lorsque que les particules se colle au milieu solide (ils adhèrent à la surface)