Microscopia Flashcards
O que é a microscopia ótica e que instrumentos utiliza ?
A microscopia ótica usa a luz projetada pelo microscópio ótico para ampliar e observar estruturas pequenas dimensões e difíceis de ver a olho nu
Quantos tipos de microscopia ótica existem e o que são (def) ?
Existem 4 tipo de microscopia ótica
-Fundo Claro: imagem pouco escura num fundo claro em que a luz atravessa o objeto de forma 2D; preparações vivas e coradas melhoram o contraste
-Contraste de Fase: aumento de contraste nas fases intramoleculares; preparações vivas e n coradas com um halo de luz à sua volta; semelhante à de Fundo Escuro, mas tem mais poder de resolução/discos opacos
-Interferência-contraste-diferencial
-Fundo Escuro: imagem clara e brilhante num fundo escuro; preparações vivas tipo bactérias; tem discos opacos no condensador que atrasam ou aceleram o comprimento de onda da luz e a conduzem a pontos específicos
Como funciona a luz no microscópio ótico?
Luz atravessa o corpo = estrutura fina
Luz reflete no corpo = estrutura + densa
Luz refratada no corpo = estrutura opaca
O que é o poder ótico?
Temos vários tipos de poder ótico
- Olho nu: 1cm/0,5nm
-Microscópio ótico (luzes e fotões): 0,5nm/200nm
-Microscópio eletrônico (eletrões): 0,5nm/0,1nm (até estruturas mais +pequenas)
O que é a resolução/abertura numérica?
A resolução ótica é a distância mínima entre 2 obj que nós podemos ver e depende da luz e qualidade da lente
Quanto maior foram a objetiva, maior o ângulo q a luz faz com a lente objetiva, maior o pormenor da imagem
O que é a microscopia de florescência e que instrumentos usa?
A Microscopia de florescência utiliza no microscópio ótico de florescência, flurósforos (moléculas que absorvem luzes, emitidas por laser de excitação, com determinados compri. de onda e emitem luzes de compri. de onda maiores quando ligadas a uma proteína)
o que é a Imunodeteção de proteínas?
Flurósforo liga-se a um anticorpo secundário (proteína)
Esse anticorpo secundário liga-se a um anticorpo primário
O Anticorpo primário liga-se ao antigénio em causa e o Anticorpo 2 emite luz quando excitado com outra luz marcando o sitio onde está
Coisas a n se fazer na microscopia flurescente ?
Usar flurosforos com Ccompri. de onda semelhantes poiis a sua cor será + dificill de distingir
Usar flurosforos naturias ao invés de sintéticos pk as células permanecem com eles por mais tempo
O que possui o microscópio ótica de fluorescência?
-1º filtro de barreira: deixa passar da luz branca apenas a necessária para excitar a bactéria
-Vidro refletor: reflete a luz emitida pela bactéria
-2ºfiltro de barreira: impede a passagem de luzes residuais e permite apenas a passagem da luz pretendida
Como funciona o GFP pra a fluorescência?
Forma proteínas modificadas (que nem sempre funciona) por causa do gene de GFP
Como varia a resolução da imagem em função do compri. de onda?
Quanto + compri. de onda -> - resolução
Quanto - compri. de onda -> + resolução
O que é a microscopia eletrônica e quais tipos existem?
A microscopia eletrônica utiliza um feixe de electrões
é transmitido por uma amostra ultrafina
Existem vários tipos de microscopia eletrônica:
-TEM (ME de transmissão) onde a imagem parece um corte de interior da célula e os eletrões são transmitidos num ângulo de 90º
-SEM (ME de varrimento) onde a imagem mostra uma versão 3D do exterior da célula que foi coberto com uma camada de metais pesados (esta camada reflete os eletrões e dá uma cor escura na imagem quando isso ocorre)
O que é a centrifugação diferencial?
Consiste na separação dos constituintes celulares, de diferente densidade, através da força de centrifugação.
Sendo o núcleo o constituinte + denso
Sendo o ribossomas o constituinte - denso
