Méthodes spectroscopiques optiques - Fluorescence Flashcards
Qu’est-ce que la fluorescence?
La fluorescence moléculaire est un processus de réémission dans lequel des molécules sont excités à l’état S1’ par absorption d’un rayonnement électromagnétique (hνex). Les espèces reviennent à leur état fondamental S0 en libérant l’excès d’énergie sous forme de photons (hνém).
Quelle est la formule pour calculer la fluorescence (émission)?
IF = 2,303⋅ΦF⋅I0⋅ε⋅c⋅b où ΦF = IF / (I0 – I)
où (I0 – I) est le nombre de photons absorbés.
Vrai ou faux. Le spectre d’absorption d’une molécule est semblable au spectre d’excitation de la fluorescence.
Vrai.
Lequel des énoncés suivants est vrai?
A) E Exc < E Ém et hν Exc < hν Ém
B) E Exc < E Ém et hν Exc > hν Ém
C) E Exc > E Ém et hν Exc > hν Ém
D) E Exc > E Ém et hν Exc < hν Ém
C)
Que représente ΦF?
ΦF est le rendement quantique de la fluorescence.
ΦF = Nb de photons émis / Nb de photons absorbés
Quels sont les trois seuls acides aminés qui sont capable de fluorescence naturellement?
1- Phénylalanine
2- Tyrosine
3- Tryptophane
De quoi dépendent l’intensité, le rendement quantique et la longueur d’onde de fluorescence maximale du Tryptophane?
Ça dépend du solvant où l’acide aminé est mis.
Quelle est la meilleure indication de l’environnement des résidus de tryptophane dans une protéine?
La meilleure indication est la longueur d’onde d’émission. Plus elle est élevée, plus ça l’indique que le Tryptophane est dans un environnement plus polaire, donc plus vers le BLEU. Au contraire, plus l’émission est faible, plus ça l’indique que le tryptophane est dans une environnement peu polaire, donc enfoui dans le cœur de la protéine et se retrouve plus vers la couleur ROUGE.
Donner le chemin que parcours une source lumineuse jusqu’à le traitement des données pour mesurer la fluorescence.
1- Source lumineuse externe (lampe de Xénon)
2- Monochromateur d’excitation
3- Échantillon (Analyte + Matrice)
4- Monochromateur d’émission
5- Photo-détecteur
6- Traitement des données (amplification et affichage)
Quelles sont les caractéristiques de la spectrofluométrie? (4)
1- Technique très sensible; 10 à 1000 fois plus que l’absorption.
2- Technique très sélective; faible signal de fond
3- Très sensible à l’oxygène et aux autres contaminants
4- Très peu de composés fluorescent naturellement, donc il faut faire une dérivatisation chimique avec un fluorophore.
En quoi consiste la dérivatisation chimique pour une molécule qui ne fait pas de fluorescence?
Formation d’un lien covalent entre la biomolécule et un composé chromophore (ou fluorophore) synthétique ayant une forte absorption (ou émission) dans la région UV-Vis pour provoquer la fluorescence.
Comment fonctionne les sondes d’acides nucléiques?
Voir diapo chapitre 2 sur la fluorescence diapo 18 de 44, soit page 57.
En quoi consiste la méthode de Sanger automatisée?
La méthode de Sanger est basée sur la synthèse d’un brin complémentaire d’ADN en utilisant les oligonucléotides à séquencer comme matrices. La synthèse du brin complémentaire est effectuée en présence des nucléotides de terminaison de chaîne, ddNTP (2’,3’-didéoxynucléotide triphosphate), marqués avec 4 fluorophores. Permet le séquençage d’ADN.
