méthode d'étude de la cellule?

Question 1

Comment les cytologistes et histologistes réussissent-ils à étudier les cellules et les tissus, généralement invisibles à l’oeil nu ?

Answer 1

par le microscope

Question 2

pourqoi on utiluse le microscope pour voir la cellule ?

Answer 2

Petite taille des cellules
Résolution limitée des yeux
donc Étude des cellules nécessitent des instruments grossissants

Question 3

la définition du microscope?

Answer 3

✔ Mikros : petit
✔ Skopein : examiner
✿ La microscopie : ensemble de techniques d’imagerie des objets de petites dimensions

✿ La microscopie désigne étymologiquement l’observation d’objets invisibles à l’oeil nu
✿ L’appareil utilisé pour rendre possible cette observation est appelé un microscope

L’objet à observer est appelé : préparation

Question 4

L’objet à observer est appelé?

Answer 4

préparation

Question 5

siterTrois paramètres importants en microscopie?

Answer 5

Grossissement:donne un image grossie d’un petit objet
Résolution:séparer les image de celui -ci sur l’image
Contraste:rend les détail visible a loeil avec une caméra

Question 6

Notion de pouvoir séparateur = limite de résolution?

Answer 6

C’est une mesure de la netteté de l’image

C’est la capacité de l’oeil à distinguer nettement 2 points très rapprochés, il est égal à 0,2 mm à distance de 25cm

Question 7

donne pour chaque type de microscopes le Pouvoir de résolution ?

Answer 7

OEil:
0,1 à 0,2mm (100-200μm)
Microscope optique:
0,2μm (200nm)
Microscope électronique:
2 nm (2.10-3 μm)

Question 8

définir le microscope optique a fond clair?

Answer 8

☞ permet d’étudier des cellules fixées et colorées (tuées et traitées en vue d’un examen)
et de les observer sur une image foncée avec un fond brillant.
☞ C’est la plus simple et la plus ancienne des techniques de microscopie

Question 9

Pouvoir séparateur( Résolution):

Answer 9

☞ Résolution = la capacité du microscope à donner une image claire et précise
☞ la capacité de séparer des détails
☞ la Limite de séparation en microscopie optique = 0,2μm

Question 10

Principe de fonctionnement:

Answer 10

Lumière (photons)
Échantillon
les lentille
Image à l’oeil

Le microscope optique à fond clair fonctionne par transmission de la lumière blanche (photons) sur un échantillon d’épaisseur très fin (transparent) en utilisant des lentilles en verre

Question 11

Éléments constitutifs du microscope photonique?

Answer 11

✔ objectif
✔ oculaires
✔ corps 
✔ potence 
✔ base =pied
✔ source de lumière (lampe)
✔  condensateur
✔  diaphragme
✔  platine
 ✔ le valet 
✔  le  chariot
✔  revolver  porte objectif 
✔ la vis platine
✔  la vis de chariot
✔  la vis macrométrique 
✔ la vis micrométrique 
✔ interrupteur 
✔ câble électrique
✔   molette *
✔ préparation

Question 12

Comment connaitre le grossissement utilisé?

Answer 12

Grossissement d’un microscope

Grossissement des objectifs X Grossissement des oculaires
Objectifs: x4/x10/x40/x100 X Oculaires: x10
=
X40/X100/X400/X1000

Question 13

Domaines de son application

Answer 13

Description structurale des tissus et des cellules
Taille des cellules
Forme des cellules
Forme et position des noyaux

✔ Cette description structurale nous aide dans le diagnostic histo et cytopathologique, et aussi dans la recherche
(Epithélium intestinal-Tissu musculaire cardiaque-Epithélium de l’épididyme)
✔ La microscopie photonique est utilisée aussi pour l’observation de différentes formes bactériennes après coloration de Gram (diagnostic bactériologique)

Question 14

cité les conditions qui doivent être réaliser pour faire une observation au microscope à fond clair la technique histologie?

Answer 14

le microscope permet d’observer les cellules d’un tissu mais dans des conditions très strictes:
✔ il faut que l’objet à examiner soient transparents à la lumière :
(les objets biologiques ne le sent que rarement à l’exception des objets naturellement très bon suspension sans au culture cellulaire)

✔ L’observation par transmission exige que les rayons lumineux traversent l’objet
⬇
✔ Ainsi l’objet doit être de très faible épaisseur (2 à 10μm)
⬇
✔ Il faut donc réaliser des coupes fines appelées coupes histologiques

Question 15

cité les étapes de la technique histologique?

Answer 15

✔ le prélèvement
✔  la fixation
✔  l'inclusion 
✔ la coupe 
✔ le collage
✔  la coloration 
✔ le montage

Question 16

explique Le prélèvement?

Answer 16

✍ Humain ou Animal vivants
•Biopsie
•Pièces opératoire
✍ Cadavre
•Autopsie
. (le plus rapidement possible après le décès)
✍ Épaisseur des coupes : 2-3 mm
 ✍L’incidence de la coupe (longitudinale, transversale..)

Question 17

c’est qoui le but de la fixation ?

Answer 17

Tuer la cellule en modifiant le moins possible sa structure interne
Protéger les tissus prélevés de toute autolyse due à la libération des enzymes contenus dans les lysosomes cellulaires
Prévient la putréfaction bactérienne

Question 18

types de fixation ?

Answer 18

✿ Physique: Congélation, cryodessiccation
✿Chimique:
♣     Fixateurs simples:
→ Ethanol:
-Durcissement des tissus
(inconvénient)
- Solvant des graisses
→ Formol:
-Utilisation facile (avantage) -Pas cher (avantage) -Irritant (inconvénient)
♣ Mélanges fixateurs:
→ Liquide de carnoy
→ Liquide de bouin: -Cher (inconvénient)

Question 19

durée de fixation ?

Answer 19

Durée de la fixation est fonction de:
La vitesse d’imprégnation du liquide fixateur
La consistance du prélèvement
L’épaisseur du fragment

Cellules isolées ou frottis sanguin :5 mn
Petits fragments (qq mm) :1-2 heures
Bloc épais (1 cm) :1-2 jours
Fragments d’organe :1-2 semaine

Généralement la durée de fixation est de 24 à 48 heures

Question 20

expliquer L’inclusion ?

Answer 20

L’inclusion en paraffine consiste à infiltrer et à enrober les tissus à examiner avec de la paraffine car ces derniers sont mous, il faut donc leur donner une consistance solide

Cette importante étape est composée de 4 sous-étapes:
3-1 La déshydratation 3-2 L’éclaircissement 3-3 L’imprégnation par la paraffine 3-4 L’enrobage (=moulage)

Question 21

les étape de l’inclusion ?

Answer 21

Cette importante étape est composée de 4 sous-étapes:
✿ 1: La déshydratation:remplacer l’eau par l’alcool
✿ 2 L’éclaircissement : remplacer l’alcool par le toluène (ou le xylène)
✿ 3 L’imprégnation par la paraffine: L’inclusion a pour objectif d’imprégner totalement les cellules d’une substance durcissante, qui est la paraffine (remplacer le toluène par la paraffine), qui permettra une coupe fine et régulière.
Imprégnation du prélèvement dans la paraffine fondue dans une étuve réglée à une T° 60°C et cela :
1er bain: 1h30 min
2ème bain: 1h30 min

✿ 4 L’enrobage (=moulage):

Couler la paraffine fondue contenant le prélèvement dans un moule qui se solidifie à la température ambiante
Obtention des blocs de paraffine qui pourront être facilement coupés et qui servent aussi de moyen de stockage des échantillons

Question 22

La coupe (=la microtomie)?

Answer 22

La coupe a pour but de réaliser des sections fines (de 2 à 10 μm d’épaisseur) et transparentes de l’objet inclus à l’aide d’un microtome
Obtention d’un ruban composé de plusieurs coupes identiques prêtes pour l’étape du collage

Question 23

5- Le collage?

Answer 23

Les coupes identiques obtenues sont placées sur des lames puis colées par de l’albumine ou par de l’eau
Chauffer les coupes colées sur une platine chauffante à une T° qui doit être inférieure à 56°C (1-2° de moins)
Obtention de « lames blanches » prêtes à être colorées

Question 24

6- la coloration?

Answer 24

La coloration permet de renforcer le contraste des cellules et de leurs constituants. La
coloration des coupes se fait par différents types de colorants ou méthodes de mise en
évidence, les colorants utilisés peuvent être naturels ou synthétiques.
1 Réhydratation
2
Hématoxyline : colore les noyaux en violet
Éosine : colore le cytoplasme en rose
Safran : colore les fibres conjonctives en jaune

Question 25

La coupe (=la microtomie)?

Answer 25

→ La coupe a pour but de réaliser des sections fines (de 2 à 10 μm d’épaisseur) et transparentes de l’objet
inclus à l’aide d’un microtome
→ Obtention d’un ruban composé de plusieurs coupes identiques prêtes pour l’étape du collage

Question 26

5- Le collage?

Answer 26

→ Les coupes identiques obtenues sont placées sur des lames puis colées par de l’albumine ou par de l’eau
→ Chauffer les coupes colées sur une platine chauffante à une T° qui doit être inférieure à 56°C (1-2° de moins)
→ Obtention de « lames blanches » prêtes à être colorées

Question 27

6- la coloration?

Answer 27

La coloration permet de renforcer le contraste des cellules et de leurs constituants. La
coloration des coupes se fait par différents types de colorants ou méthodes de mise en
évidence, les colorants utilisés peuvent être naturels ou synthétiques.
1 Réhydratation
2 Mettre dans différent colorants
Hématoxyline : colore les noyaux en violet
Éosine : colore le cytoplasme en rose
Safran : colore les fibres conjonctives en jaune

Question 28

notion de contrast?

Answer 28

✔ accentue ابراز les différences entre les parties de l’échantillon
✔ ressortir des détails déjà distinguable par la coloration des composants cellulaires

Question 29

citer les différentes microscope selon leur contraste?

Answer 29

✔ microscope a fond clair (échantillon non coloré):
la lumière passe directement à travers l’échantillon si la cellule n’est ni naturellement pigmenté ni artificiellement coloré le contraste est faible
✔ microscope à fond clair( échantillon coloré):
divers colorant accentuent le contraste
la plupart des techniques de coloration exige que la cellule soit fixé( rendu inert par un fixateur)
✔ microscope en contraste de Phase :les techniques amplifie les variations de masse volumique et le contraste dans des cellules non colorées ce qui est particulièrement utile pour l’examen des cellules vivantes dépourvu de pigment
✔ microscopie à fluorescence:
c’est technique fait ressortir certains molécule de la cellule ont les colorants avec des substances fluorescentes ou avec des anticorps fluorescent (on parle alors d’immunofluorescent ) ces substance absorbe les rayons ultraviolets et de la lumière visible

Question 30

cités les type de microscopes?

Answer 30

optique ou photonique:
  à fond  Claire
 à fluorescence
 à contraste de phase 
électronique:
 à transmission  الماسح 
 à balayage  النافذ