méthode d'étude de la cellule? Flashcards
Comment les cytologistes et histologistes réussissent-ils à étudier les cellules et les tissus, généralement invisibles à l’oeil nu ?
par le microscope
pourqoi on utiluse le microscope pour voir la cellule ?
Petite taille des cellules
Résolution limitée des yeux
donc Étude des cellules nécessitent des instruments grossissants
la définition du microscope?
✔ Mikros : petit
✔ Skopein : examiner
✿ La microscopie : ensemble de techniques d’imagerie des objets de petites dimensions
✿ La microscopie désigne étymologiquement l’observation d’objets invisibles à l’oeil nu
✿ L’appareil utilisé pour rendre possible cette observation est appelé un microscope
L’objet à observer est appelé : préparation
L’objet à observer est appelé?
préparation
siterTrois paramètres importants en microscopie?
Grossissement:donne un image grossie d’un petit objet
Résolution:séparer les image de celui -ci sur l’image
Contraste:rend les détail visible a loeil avec une caméra
Notion de pouvoir séparateur = limite de résolution?
C’est une mesure de la netteté de l’image
C’est la capacité de l’oeil à distinguer nettement 2 points très rapprochés, il est égal à 0,2 mm à distance de 25cm
donne pour chaque type de microscopes le Pouvoir de résolution ?
OEil: 0,1 à 0,2mm (100-200μm) Microscope optique: 0,2μm (200nm) Microscope électronique: 2 nm (2.10-3 μm)
définir le microscope optique a fond clair?
☞ permet d’étudier des cellules fixées et colorées (tuées et traitées en vue d’un examen)
et de les observer sur une image foncée avec un fond brillant.
☞ C’est la plus simple et la plus ancienne des techniques de microscopie
Pouvoir séparateur( Résolution):
☞ Résolution = la capacité du microscope à donner une image claire et précise
☞ la capacité de séparer des détails
☞ la Limite de séparation en microscopie optique = 0,2μm
Principe de fonctionnement:
Lumière (photons)
Échantillon
les lentille
Image à l’oeil
Le microscope optique à fond clair fonctionne par transmission de la lumière blanche (photons) sur un échantillon d’épaisseur très fin (transparent) en utilisant des lentilles en verre
Éléments constitutifs du microscope photonique?
✔ objectif ✔ oculaires ✔ corps ✔ potence ✔ base =pied ✔ source de lumière (lampe) ✔ condensateur ✔ diaphragme ✔ platine ✔ le valet ✔ le chariot ✔ revolver porte objectif ✔ la vis platine ✔ la vis de chariot ✔ la vis macrométrique ✔ la vis micrométrique ✔ interrupteur ✔ câble électrique ✔ molette * ✔ préparation
Comment connaitre le grossissement utilisé?
Grossissement d’un microscope
Grossissement des objectifs X Grossissement des oculaires
Objectifs: x4/x10/x40/x100 X Oculaires: x10
=
X40/X100/X400/X1000
Domaines de son application
Description structurale des tissus et des cellules
Taille des cellules
Forme des cellules
Forme et position des noyaux
✔ Cette description structurale nous aide dans le diagnostic histo et cytopathologique, et aussi dans la recherche
(Epithélium intestinal-Tissu musculaire cardiaque-Epithélium de l’épididyme)
✔ La microscopie photonique est utilisée aussi pour l’observation de différentes formes bactériennes après coloration de Gram (diagnostic bactériologique)
cité les conditions qui doivent être réaliser pour faire une observation au microscope à fond clair la technique histologie?
le microscope permet d’observer les cellules d’un tissu mais dans des conditions très strictes:
✔ il faut que l’objet à examiner soient transparents à la lumière :
(les objets biologiques ne le sent que rarement à l’exception des objets naturellement très bon suspension sans au culture cellulaire)
✔ L’observation par transmission exige que les rayons lumineux traversent l’objet
⬇
✔ Ainsi l’objet doit être de très faible épaisseur (2 à 10μm)
⬇
✔ Il faut donc réaliser des coupes fines appelées coupes histologiques
cité les étapes de la technique histologique?
✔ le prélèvement ✔ la fixation ✔ l'inclusion ✔ la coupe ✔ le collage ✔ la coloration ✔ le montage
explique Le prélèvement?
✍ Humain ou Animal vivants •Biopsie •Pièces opératoire ✍ Cadavre •Autopsie . (le plus rapidement possible après le décès) ✍ Épaisseur des coupes : 2-3 mm ✍L’incidence de la coupe (longitudinale, transversale..)
c’est qoui le but de la fixation ?
Tuer la cellule en modifiant le moins possible sa structure interne
Protéger les tissus prélevés de toute autolyse due à la libération des enzymes contenus dans les lysosomes cellulaires
Prévient la putréfaction bactérienne
types de fixation ?
✿ Physique: Congélation, cryodessiccation ✿Chimique: ♣ Fixateurs simples: → Ethanol: -Durcissement des tissus (inconvénient) - Solvant des graisses → Formol: -Utilisation facile (avantage) -Pas cher (avantage) -Irritant (inconvénient) ♣ Mélanges fixateurs: → Liquide de carnoy → Liquide de bouin: -Cher (inconvénient)
durée de fixation ?
Durée de la fixation est fonction de:
La vitesse d’imprégnation du liquide fixateur
La consistance du prélèvement
L’épaisseur du fragment
Cellules isolées ou frottis sanguin :5 mn
Petits fragments (qq mm) :1-2 heures
Bloc épais (1 cm) :1-2 jours
Fragments d’organe :1-2 semaine
Généralement la durée de fixation est de 24 à 48 heures
expliquer L’inclusion ?
L’inclusion en paraffine consiste à infiltrer et à enrober les tissus à examiner avec de la paraffine car ces derniers sont mous, il faut donc leur donner une consistance solide
Cette importante étape est composée de 4 sous-étapes:
3-1 La déshydratation 3-2 L’éclaircissement 3-3 L’imprégnation par la paraffine 3-4 L’enrobage (=moulage)
les étape de l’inclusion ?
Cette importante étape est composée de 4 sous-étapes:
✿ 1: La déshydratation:remplacer l’eau par l’alcool
✿ 2 L’éclaircissement : remplacer l’alcool par le toluène (ou le xylène)
✿ 3 L’imprégnation par la paraffine: L’inclusion a pour objectif d’imprégner totalement les cellules d’une substance durcissante, qui est la paraffine (remplacer le toluène par la paraffine), qui permettra une coupe fine et régulière.
Imprégnation du prélèvement dans la paraffine fondue dans une étuve réglée à une T° 60°C et cela :
1er bain: 1h30 min
2ème bain: 1h30 min
✿ 4 L’enrobage (=moulage):
Couler la paraffine fondue contenant le prélèvement dans un moule qui se solidifie à la température ambiante
Obtention des blocs de paraffine qui pourront être facilement coupés et qui servent aussi de moyen de stockage des échantillons
La coupe (=la microtomie)?
La coupe a pour but de réaliser des sections fines (de 2 à 10 μm d’épaisseur) et transparentes de l’objet inclus à l’aide d’un microtome
Obtention d’un ruban composé de plusieurs coupes identiques prêtes pour l’étape du collage
5- Le collage?
Les coupes identiques obtenues sont placées sur des lames puis colées par de l’albumine ou par de l’eau
Chauffer les coupes colées sur une platine chauffante à une T° qui doit être inférieure à 56°C (1-2° de moins)
Obtention de « lames blanches » prêtes à être colorées
6- la coloration?
La coloration permet de renforcer le contraste des cellules et de leurs constituants. La
coloration des coupes se fait par différents types de colorants ou méthodes de mise en
évidence, les colorants utilisés peuvent être naturels ou synthétiques.
1 Réhydratation
2
Hématoxyline : colore les noyaux en violet
Éosine : colore le cytoplasme en rose
Safran : colore les fibres conjonctives en jaune
La coupe (=la microtomie)?
→ La coupe a pour but de réaliser des sections fines (de 2 à 10 μm d’épaisseur) et transparentes de l’objet
inclus à l’aide d’un microtome
→ Obtention d’un ruban composé de plusieurs coupes identiques prêtes pour l’étape du collage
5- Le collage?
→ Les coupes identiques obtenues sont placées sur des lames puis colées par de l’albumine ou par de l’eau
→ Chauffer les coupes colées sur une platine chauffante à une T° qui doit être inférieure à 56°C (1-2° de moins)
→ Obtention de « lames blanches » prêtes à être colorées
6- la coloration?
La coloration permet de renforcer le contraste des cellules et de leurs constituants. La
coloration des coupes se fait par différents types de colorants ou méthodes de mise en
évidence, les colorants utilisés peuvent être naturels ou synthétiques.
1 Réhydratation
2 Mettre dans différent colorants
Hématoxyline : colore les noyaux en violet
Éosine : colore le cytoplasme en rose
Safran : colore les fibres conjonctives en jaune
notion de contrast?
✔ accentue ابراز les différences entre les parties de l’échantillon
✔ ressortir des détails déjà distinguable par la coloration des composants cellulaires
citer les différentes microscope selon leur contraste?
✔ microscope a fond clair (échantillon non coloré):
la lumière passe directement à travers l’échantillon si la cellule n’est ni naturellement pigmenté ni artificiellement coloré le contraste est faible
✔ microscope à fond clair( échantillon coloré):
divers colorant accentuent le contraste
la plupart des techniques de coloration exige que la cellule soit fixé( rendu inert par un fixateur)
✔ microscope en contraste de Phase :les techniques amplifie les variations de masse volumique et le contraste dans des cellules non colorées ce qui est particulièrement utile pour l’examen des cellules vivantes dépourvu de pigment
✔ microscopie à fluorescence:
c’est technique fait ressortir certains molécule de la cellule ont les colorants avec des substances fluorescentes ou avec des anticorps fluorescent (on parle alors d’immunofluorescent ) ces substance absorbe les rayons ultraviolets et de la lumière visible
cités les type de microscopes?
optique ou photonique: à fond Claire à fluorescence à contraste de phase électronique: à transmission الماسح à balayage النافذ
