le microscope electronic ?

Question 1

pourqoi on utilise le microscope electronic?

Answer 1

car il a :
Résolution et grossissement plus importants
Observation des organites cellulaires et leurs détails

au contraire le microscope optique:
Résolution et grossissement limités
Observation de la structure générale des cellules

Question 2

citer les différent types de microscopes electronique?

Answer 2

Microscope électronique à transmission (MET):
Observer l’intérieur de la cellule
Microscope électronique à balayage (MEB):
Observer l’extérieur de la cellule (3D)

Question 3

Donner le principe de fonctionnement du microscope électronique à transmission (MET)?

Answer 3

Limite de résolution = 0,2 nm à 2 nm
Le MET fonctionne également selon le principe de transmission
Le MET fait passer sous vide le faisceau d’électrons à travers une coupe ultrafine d’un échantillon biologique. Ce faisceau est ensuite agrandi par des lentilles électromagnétiques et vient former une image sur un écran ou sur un film photographique
Image en noir et blanc
Objectif 1: Principe de fonctionnement du MET

Question 4

lister les constituants principaux du MET

Answer 4

du MET est composé de :
ensemble de pompage: assurer un vide convenable canon à électrons: produit un vaisseau d’électrons lentilles magnetic: les lentilles condonseur objectif et intermédiaire
étage -porte échantillon: permet l’introduction des échantillons

Question 5

Résolution

Answer 5

0,2 à 2 nm

Question 6

Grossissement

Answer 6

100 000 X

Question 7

Citer les étapes préparatoires d’un échantillon en vue de sa caractérisation ultrastructurale (technique des coupes minces et contraste positif) ?

Answer 7

La Microscopie Électronique en Transmission (MET) permet une analyse morphologique, structurale et chimique d’échantillons solides à l’échelle atomique. Cette technique repose sur l’interaction des électrons avec la matière et la détection des électrons ayant traversé l’échantillon. Les échantillons étudiés doivent donc être préalablement amincis afin d’être transparents aux électrons

Principe : réaliser des coupes ultrafines permissives aux faisceaux d’électrons et aux sels de métaux lourds

Question 8

Etapes de préparation?

Answer 8

1-Prélèvement
2-Fixation
3-Déshydratation

Question 9

But de fixation ?

Answer 9

maintenir l’état la plus proche du vivant

Question 10

Méthodes de fixation ?

Answer 10

Chimique:
•Glutaraldéhyde
•tétraoxyde d’osmium
Physique Cryofixation: التثبيت بالتبريد
•Azote liquide
•Utilisation d’un cryo-microscopie électronique

Question 11

fixation ?

Answer 11

♦ 1er bain (2h30) dans le Glutaraldehyde: fixe les protéines , les sucres , acides nucléiques
♦ Lavage dans une solution tamponnée
♦ 2ème bain (1h) dans le Tétroxyde d’osmium: fixe les lipides
♦ À la sortie de l’acide osmique, le prélèvement est entièrement noir

Question 12

but de désidratation ?

Answer 12

But: enlever l’eau des tissus prélevés et le remplacer par un milieu miscible قابل للامتزاج avec le milieu d’inclusion

Question 13

domain de l’utilisation ?

Answer 13

☞ Ultrastructure cellulaire (organites) après coloration positive
☞ Aspect morphologique des bactéries et des virus après coloration négative
☞ Structures cellulaires isolées ou macromolécules par ombrage métallique

Question 14

La Microscopie Électronique en Transmission (MET) permet qoi ?

Answer 14

La Microscopie Électronique en Transmission (MET) permet une analyse morphologique, structurale et chimique d’échantillons solides à l’échelle atomique

Question 15

a qoi repose la tecnique de fonctionnement de met?

Answer 15

→ Cette technique repose sur l’interaction تفاعلات des électrons avec la matière
→ et la détection des électrons ayant traversé l’échantillon.
→ Les échantillons étudiés doivent donc être préalablement amincis (trés mince) afin d’être transparents aux électrons

Question 16

citer le principe de la met?

Answer 16

réaliser des coupes ultrafines permissives aux faisceaux d’électrons et aux sels de métaux lourds

Question 17

les étape de la déshydratation ?

Answer 17

♦ Déshydratation dans des bains successifs d’alcool de plus en plus concentrés jusqu’à l’alcool absolu
♦ Imprégnation dans un solvant de la résine, comme l’oxyde de propylène (la résine sera utilisée dans l’étape de l’inclusion)

Question 18

but d’inclusion ?

Answer 18

imprégnation du tissu par un milieu capable de durcir fortement pour permettre la coupe par la suite
تشريب النسيج بوسط قادر على التصلب بقوة للسماح بالقطع اللاحق

Question 19

les étape de l’inclusion ?

Answer 19

♦ Milieu utilisé: Résine (Epon) الوسيط المستخدم
♦ Propriété de polymériser donc durcir à la chaleur ♦ خاصية البلمرة وبالتالي تصلب في الحرارة
♦ Mélangeur pendant 3h
♦ Enrobage dans des moules spéciaux
♦ Polymérisation à l’étuve (37C /45C/ 60C) البلمرة في الفرن

Question 20

le but de la coupe ?

Answer 20

Coupes ultrafines de 300 – 600 Å (30-60 nm)
Utilisation d’un ultra-microtome
pour récupéré les coupe il utilise de Petit bac rempli d’eau pour récupérer les coupes ultrafines très fragile
Coupes étalées sur une grille métallique(en cuivre)

Question 21

But de coloration ?

Answer 21

augmenter le contraste des structures cellulaires en augmentant leurs densité aux électrons

Question 22

Comment c’est fait la coloration ?

Answer 22

Coloration aux sels de métaux lourds
Acétate d’uranyl : ADN, protéines, sucres
Citrate de plomb: ARN et lipides (membranes

Question 23

attention sur le terme coloration ?

Answer 23

Le terme « coloration » a été mis entre guillemets car ce n’est pas une coloration à proprement parler, mais un procédé qui vise à augmenter le contraste en utilisant les métaux lourds et non les colorants classiques

Question 24

observation ?

Answer 24

Image en noir et blanc
Régions opaques et sombres : régions plus denses aux électrons (arrêt des électrons)
Régions claires : transmission des électrons

Question 25

Différents procédés de contraste électronique?

Answer 25

.Coloration positive
•Coloration négative
•Ombrage métallique

Question 26

Contraste positif (=coloration positive)?

Answer 26

Les atomes majeurs de la matière biologique sont transparents aux électrons d’où la nécessité d’utiliser des sels de métaux lourds: Acétate d’Urany, Citrate de Plomb
♦ But: Décrire finement l’ultrastructure intracellulaire

Question 27

Contraste négatif (=coloration négative): le principe?

Answer 27

♦ Le principe consiste à déposer tout autour de l’échantillon une couche de métaux lourds
♦ Il permet d’assombrir le fond sans colorer l’objet lui-même. Les structures apparaissent en « négatif » : en clair sur fond sombre

Question 28

Contraste négatif (=coloration négative): le but?

Answer 28

Observer les structures de très petites dimensions après isolement
Description morphologique (morphologie externe) de macromolécules, d’organites, de ribosomes, de virus , bactérie,,,
 Architecture moléculaire des éléments du cytosquelette (microtubules, microfilament d’actine..), de la chromatine, des pores nucléaires,

Question 29

Ombrage métallique?

Answer 29

♦ Consiste à vaporiser sous vide et sous un angle donné une très fine couche métallique (platine) se déposant sur la surface de petites particules isolées, créant un effet d’ombre

Question 30

but d’ombrage métallique ?

Answer 30

♦ obtenir un effet d’ombre (morphologie ) de la surface des petites particules isolées ; bactéries, virus, ADN, protéines. Elle a l’avantage d’obtenir une image 3D en MET (car la 3D on l’obtient surtout par le MEB).

Question 31

but de Contraste positif (=coloration positive)?

Answer 31

But: Décrire finement l’ultrastructure intracellulaire