méthode d'analyse Flashcards
que permet le séquençage de ADN
○ Étudier les mutations
○ Etude de l’évolution du génome
○ Etude des maladies génétiques
nom de l’étude ARN
transcriptomique
nom études des protéine
protéomique
fonctionnement PCR
isoler , séquencer et amplifier ADN pour l’analyser
types de mutation
→ Silencieuse : pas de changement d’acide aminé
→ Faux sens : changement d’acide aminé
→ Non-sens : apparition d’un codon stop, apparition d’une protéine tronquée
Q-PCR
a chaque cycle de PCR = ADN doublé
on y ajoute un agent qui vas rendre l’ADN fluo (ss forme 2 brin)
amplifié par enzyme TAQ
+ ADN + fluo on peut docn tracer la courbe d’amplification
(PCR QUANTITATIVE)
rôle transcriptase inverse
transforme ARN en ADN
microscopie optique
rayon de nature ondulatoire
inf 400nm : UV A B C
400-760bm : visible
+ 760 : infrarouge (donne chaleur)
virus NON visible
max 0.2um
+++,utilisé , voir élément en couleur et vivant , traverse une cellule dans son intégralité
microscopie classique / histologique
sur cell morte
nécessite coupe semi fine 2 à 6um (aide d’un microtome )
rapide
colorant
Microscopie à contraste de phase
Elle utilise les propriétés ondulatoires de la lumière
Cette microscopie permet de prendre des cellules vivantes car pas de mise en contact avec des agents colorants toxiques.
Microscopie à fluorescence et confocale
détecter spécifiquement une protéine
+ fine et + spécifique
utilisation anticorps (primaire puis un secondaire qui reconnait le primaire )
Image 3D
molécule marqueur microscopie a fluorescence
→** Une enzyme **: exemple de la peroxydase qui transforme un substrat incolore en substrat coloré
→ Molécule fluorescente : excitation de la molécule par un faisceau lumineux qui devient visible
→ Immunogold : bille d’or opaque aux électrons en ME
❖ Co-marquage en immunofluorescence
→** DAPI **excité en UV et réémission en bleu
→ fluorescéine excitée en bleu pour émettre en vert
→ rhodamine excitée en vert pour émettre en rouge
DAPI
excité en UV réémission en bleu
→ fluorescéine
excitée en bleu pour émettre en vert
Microscopie électronique
Le ME fait appel à un faisceau d’électron, qui rentre en contact avec l’échantillon et qui aboutit à 2 faisceaux :
→ Électrons transmis : MET
→ Électrons secondaire retransmis par l’échantillon : MEB
dans une enceinte sous vide
haure résolution
Microscope à transmission
permet de voir l’intérieur des cellules
coupe ultrafine (100 à 200 nm)
On n’observera donc jamais une cellule entière mais une toute petite partie en MET.
agent de contraste ( métaux lourds)
/!\ OBSERVATION DE VIRUS
rhodamine
excitée en vert pour émettre en rouge
Microscopie à balayage
électrons 2d
donne des images en reliefs
peu information sur la structure
on ne voit que la surface et pas l’intérieur
On peut observer des insectes entiers ou le bourgeonnement du VIH par exemple.
