Labo 2: Extraction d'ADN génomique de levure + Absorbance

Question 1

Que fait l’enzyme lyticase?

Answer 1

Digère la paroi cellulaire des levures

Question 2

Quels sont les 3 méthodes d’extraction d’acide nucléiques?

Answer 2

Méthode utilisant des solvants organiques
Méthode utilisant des solvants non organiques
Méthode utilisant des microcolonnes de résines d’échangeur d’ions

Question 3

Quelle propriété spéciale ont les molécules de silice?

Answer 3

adsorber sélectivement les acides nucléiques

Question 4

Pour la levure, l’ADN total de la cellule est préparée comment?

Answer 4

1. Digestion des cellules avec Protéinase K en présence d’EDTA et d’un détergent (SDS)
2. Déprotéination avec sln saline
3. Digestion avec l’enzyme RNAse pour enlever l’ARN contaminant
4. Précipitation de l’ADN avec alcool éthylique ou isopropanol (Éliminer RNAse et autre réactif)

Question 5

Que révèle l’absorbance à 260 nm de l’échantillon?

Answer 5

Indique la présence d’acide nucléique (dont l’ADN)

Question 6

Qu’indique l’absorbance à 280 nm?

Answer 6

Révèle la présence de protéine

Question 7

Que révélera la migration de l’échantillon sur un gel d’agarose?

Answer 7

Concentration de l’ADN
Taille de l’ADN
Présence ou non d’ARN

Question 8

Avec quoi fait-on la déprotéination dans le laboratoire?

Answer 8

Avec une solution saline

Question 9

Pourquoi on ne décontamine pas l’ADN de la RNAse dans ce laboratoire?

Answer 9

Elle n’interfère pas avec la PCR, ni aucune des étapes restantes du laboratoire

Question 10

Quelles sont les 4 classes principales des méthodes d’extractions des acides nucléiques?

Answer 10

Adsorption
Solvant organiques
Ultracentrifugation
Solvants non-organiques

Question 11

Quelles sont les étapes d’extraction de l’ADN cellulaire?

Answer 11

1. Briser les cellules
2. Extraire l’ADN
3. Précipiter et purifier l’ADN
4. Éliminer l’ARN

Question 12

Quelles sont les 3 méthodes pour briser la paroi d’une cellule?

Answer 12

1. Méthode mécanique (Bille de verre, mortier et pilon..)
2. Choc thermique (congélation/décongel, ébullition)
3. Enzyme (lysozyme, cellulase, lyticase, etc.)

Question 13

Comment agit leSDS sur une cellule?

Answer 13

Détergent qui détruit la membrane.
Émulsifie lipide et protéine.
Supprime les interractions polaires maintenant la cellule
Forme un complexe avec lipides et protéine les faisant précipiter

Question 14

Comment agit la protéinase K?

Answer 14

Elle n’a aucun effet d’hydrolyse sur les acides nucléiques. Elle hydrolyse les protéines de toutes origines, préférence pour les liaisons peptidiques.
Elle est très active même en présence de SDS.
Elle sépare l’ADN des histones

Question 15

Lors de la digestion avec la protéinase K dans SDS, ou se trouve l’ADN suite à la centrifugation?

Answer 15

Dans le surnageant