Labo 1 : Précipitation ADN + Gel Agarose Flashcards

1
Q

Que contient l’ADN?

A

L’information nécessaire au développement et au fonctionnement de l’organisme.

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
2
Q

Qu’a fait M. Fruedrich Miescher en 1869?

A

il a isolé du noyau des cellules une substance riche en phosphore et l’a nommé nucléine

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
3
Q

Qu’a réussit M. Richard Altmann en 1889?

A

Il a séparé, à partir de la nucléine, des protéines et une substance acide qu’il a nommé acide nucléique

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
4
Q

Qu’a découvert M. Albrecht Kossel en 1896?

A

Il a découvert les 4 bases azotées (A-C-T-G) dans l’acide nucléique

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
5
Q

Qui ont élucidé la structure de l’ADN (double hélice) le 31 octobre 1962?

A

Watson et Crick

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
6
Q

Quelles sont les 4 bases azotées? Quels familles composent ces bases?

A

Pyrimidine: Cytosine (C) - Thymine (T)
Purine: Adénine (A) et Guanine (G)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
7
Q

De quoi est composé l’ADN?

A

1 groupement phosphate liée au désoxyribose (sucre) qui est lui aussi lié à une base azotée (nucléotide). Les nucléotides sont reliés entre-eux par des liaisons 3’-5’ phosphodiester

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
8
Q

En quoi l’ARN est différente de l’ADN?

A
  1. Base azotée U au lieu de T

2. le groupement phosphate est lié à un ribose au lieu d’un désoxyribose

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
9
Q

Quel est le produit a prioriser pour faire précipiter l’ADN? Sinon, que peut-on utiliser d’autre?

A
l'acétate de sodium 0,3 M à pH 5.2
On peut aussi utiliser:
acétate d'amonium 2,0M
chlorure de lithium 0,8M
chlorure de sodium 0,2M
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
10
Q

Que contient le tampon TE et à quoi servent chacun de ses composants?

A

T = Tris (conserve l’intégrité et la stabilité de l’ADN)

E =EDTA (inhibe les nucléases)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
11
Q

Combien de temps faut-il pour précipiter l’ADN sur glace généralement?

A

10 minutes si l’ADN est suffisamment concentrée ( >10 ng/ul). Pour l’ADN peu concentré, ça peut prendre toute la nuit.

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
12
Q

Combien de temps faut-il centrifuger pour recueillir de faibles concentration d’ADN?

A

Normalement 15 minutes dans une microcentrifugeuse sont suffisantes

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
13
Q

Pourquoi lave-t-on le culot à l’alcool éthylique 95% après avoir microcentrifugé?

A

pour éliminer les sels restant et assécher le culot

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
14
Q

Les gels agissent comme un tamis moléculaire, plus les molécules d’ADN sont longues, plus________

A

leur migration à travers les pores se fait avec difficulté et inversement.

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
15
Q

Pourquoi n’utilise-t-on pas le gel de polyacrylamide au lieu de l’agarose?

A

les pores d’un gel d’agarose sont plus grands. On utilise la polyacrylamide pour séparer des fragments de 0,2 à 30 kb et l’agarose pour séparer des fragments de 1 à 500 nt.

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
16
Q

Polysaccharide extrait d’algue rouge?

17
Q

Pourquoi le gel d’agarose est submergé dans la même solution qui à été utilisée pour dissoudre l’agarose?

A

Car il contient des ions permettant de faire passer le courant électrique plus facilement. Son pH basique charge l’ADN négativement lui permettant ainsi de migrer vers le pôle positif.

18
Q

Quelles sont les 2 principales fonctions du tampon de chargement 6x?

A

1- voir le front de migration grâce au bleu de bromophénol
2- augmenter la poussée d’archimède (alourdir les échantillons) pour lui permettre de descendre et rester dans le fond du puits à cause du glycérol.

19
Q

De quoi dépend la vitesse de migration de l’ADN dans le gel?

A
  1. voltage appliqué
  2. masse moléculaire
  3. conformation de l’ADN
20
Q

Comment se fait la migration de l’ADN pour les molécules linéaires?

A

la migration est inversement proportionnelle à la taille (en nombre de nucléotides)

21
Q

À des voltages faibles, la vitesse de migration de l’ADN est_____

A

proportionnelle au voltage appliqué

22
Q

Comment fait-on pour mesurer la longueur des fragments d’ADN?

A

La taille du fragment d’ADN (nombre de pb) est mesurée en comparant sa distance de migration à la distance de migration des fragments qui constitue la solution de marqueurs de taille utilisée

23
Q

Qu’est-ce que le bromure d’éthidium et comment agit-il avec l’ADN? Pourquoi l’utilise-t-on dans la migration du gel?

A

cation polycyclique qui s’intercale entre les bases d’ADN grâce à sa forme plane.
Les fragments d’ADN qui ont incorporés le Bromure d’éthidium émettent de la fluorescence quand ils sont exposés à la lumière ultraviolette. L’intensité de la bande est proportionnelle à la qté d’ADN dans l’échantillon

24
Q

Pourquoi le colorant est ajouté uniquement dans le gel et non avant?

A

Pour limiter la quantité de bromure dans le labo et effectuer une coloration rapide

25
À quoi servent les marqueurs de taille?
Estimer le nombre de paire de base. Les molécules migrent a une vitesse inversement proportionnelle à leur taille
26
À quoi sert le co-précipitant rose?
Il précipite de la même façon que l'ADN nous permettant de voir où est le culot quand la quantité d'ADN est trop faible.
27
Que permet la précipitation de l'ADN?
concentrer l'échantillon | changer de tampon
28
Quelle est la façon la plus précise d'évaluer la quantité d'ADN?
En faisant une courbe standard de l'aire en fonction de la quantité d'ADN