Labo 1 : Précipitation ADN + Gel Agarose

Question 1

Que contient l’ADN?

Answer 1

L’information nécessaire au développement et au fonctionnement de l’organisme.

Question 2

Qu’a fait M. Fruedrich Miescher en 1869?

Answer 2

il a isolé du noyau des cellules une substance riche en phosphore et l’a nommé nucléine

Question 3

Qu’a réussit M. Richard Altmann en 1889?

Answer 3

Il a séparé, à partir de la nucléine, des protéines et une substance acide qu’il a nommé acide nucléique

Question 4

Qu’a découvert M. Albrecht Kossel en 1896?

Answer 4

Il a découvert les 4 bases azotées (A-C-T-G) dans l’acide nucléique

Question 5

Qui ont élucidé la structure de l’ADN (double hélice) le 31 octobre 1962?

Answer 5

Watson et Crick

Question 6

Quelles sont les 4 bases azotées? Quels familles composent ces bases?

Answer 6

Pyrimidine: Cytosine (C) - Thymine (T)
Purine: Adénine (A) et Guanine (G)

Question 7

De quoi est composé l’ADN?

Answer 7

1 groupement phosphate liée au désoxyribose (sucre) qui est lui aussi lié à une base azotée (nucléotide). Les nucléotides sont reliés entre-eux par des liaisons 3’-5’ phosphodiester

Question 8

En quoi l’ARN est différente de l’ADN?

Answer 8

1. Base azotée U au lieu de T

2. le groupement phosphate est lié à un ribose au lieu d’un désoxyribose

Question 9

Quel est le produit a prioriser pour faire précipiter l’ADN? Sinon, que peut-on utiliser d’autre?

Answer 9

l'acétate de sodium 0,3 M à pH 5.2
On peut aussi utiliser:
acétate d'amonium 2,0M
chlorure de lithium 0,8M
chlorure de sodium 0,2M

Question 10

Que contient le tampon TE et à quoi servent chacun de ses composants?

Answer 10

T = Tris (conserve l’intégrité et la stabilité de l’ADN)

E =EDTA (inhibe les nucléases)

Question 11

Combien de temps faut-il pour précipiter l’ADN sur glace généralement?

Answer 11

10 minutes si l’ADN est suffisamment concentrée ( >10 ng/ul). Pour l’ADN peu concentré, ça peut prendre toute la nuit.

Question 12

Combien de temps faut-il centrifuger pour recueillir de faibles concentration d’ADN?

Answer 12

Normalement 15 minutes dans une microcentrifugeuse sont suffisantes

Question 13

Pourquoi lave-t-on le culot à l’alcool éthylique 95% après avoir microcentrifugé?

Answer 13

pour éliminer les sels restant et assécher le culot

Question 14

Les gels agissent comme un tamis moléculaire, plus les molécules d’ADN sont longues, plus________

Answer 14

leur migration à travers les pores se fait avec difficulté et inversement.

Question 15

Pourquoi n’utilise-t-on pas le gel de polyacrylamide au lieu de l’agarose?

Answer 15

les pores d’un gel d’agarose sont plus grands. On utilise la polyacrylamide pour séparer des fragments de 0,2 à 30 kb et l’agarose pour séparer des fragments de 1 à 500 nt.

Question 16

Polysaccharide extrait d’algue rouge?

Answer 16

Agarose

Question 17

Pourquoi le gel d’agarose est submergé dans la même solution qui à été utilisée pour dissoudre l’agarose?

Answer 17

Car il contient des ions permettant de faire passer le courant électrique plus facilement. Son pH basique charge l’ADN négativement lui permettant ainsi de migrer vers le pôle positif.

Question 18

Quelles sont les 2 principales fonctions du tampon de chargement 6x?

Answer 18

1- voir le front de migration grâce au bleu de bromophénol
2- augmenter la poussée d’archimède (alourdir les échantillons) pour lui permettre de descendre et rester dans le fond du puits à cause du glycérol.

Question 19

De quoi dépend la vitesse de migration de l’ADN dans le gel?

Answer 19

1. voltage appliqué
2. masse moléculaire
3. conformation de l’ADN

Question 20

Comment se fait la migration de l’ADN pour les molécules linéaires?

Answer 20

la migration est inversement proportionnelle à la taille (en nombre de nucléotides)

Question 21

À des voltages faibles, la vitesse de migration de l’ADN est_____

Answer 21

proportionnelle au voltage appliqué

Question 22

Comment fait-on pour mesurer la longueur des fragments d’ADN?

Answer 22

La taille du fragment d’ADN (nombre de pb) est mesurée en comparant sa distance de migration à la distance de migration des fragments qui constitue la solution de marqueurs de taille utilisée

Question 23

Qu’est-ce que le bromure d’éthidium et comment agit-il avec l’ADN? Pourquoi l’utilise-t-on dans la migration du gel?

Answer 23

cation polycyclique qui s’intercale entre les bases d’ADN grâce à sa forme plane.
Les fragments d’ADN qui ont incorporés le Bromure d’éthidium émettent de la fluorescence quand ils sont exposés à la lumière ultraviolette. L’intensité de la bande est proportionnelle à la qté d’ADN dans l’échantillon

Question 24

Pourquoi le colorant est ajouté uniquement dans le gel et non avant?

Answer 24

Pour limiter la quantité de bromure dans le labo et effectuer une coloration rapide

Question 25

À quoi servent les marqueurs de taille?

Answer 25

Estimer le nombre de paire de base. Les molécules migrent a une vitesse inversement proportionnelle à leur taille

Question 26

À quoi sert le co-précipitant rose?

Answer 26

Il précipite de la même façon que l’ADN nous permettant de voir où est le culot quand la quantité d’ADN est trop faible.

Question 27

Que permet la précipitation de l’ADN?

Answer 27

concentrer l’échantillon

changer de tampon

Question 28

Quelle est la façon la plus précise d’évaluer la quantité d’ADN?

Answer 28

En faisant une courbe standard de l’aire en fonction de la quantité d’ADN