Labo 1 - Analyse quantitative du bouillon de bactéries Flashcards
Quelles sont des situations réelles dans lesquelles la quantification de la concentration de bactéries est nécessaire?
1- Contrôle de qualité des produits alimentaires et cosmétiques : prévient l’apparition d’infections bactériennes car les contrôles sont faits régulièrement et les produits ne sont pas distribués s’ils dépassent certaines normes.
2- Diagnostic d’une infection bactérienne par un médecin : exemple. à partir de 30 UFC/mL dans l’urine (concentration fictive) on diagnostique une infection urinaire
3- Expériences de laboratoire contrôlées : permet de suivre l’évolution de la croissance d’une bactérie en partant de sa concentration initiale en bouillon puis en comparant dans le temps.
Quelle est la technique qu’on a utilité au laboratoire pour quantifier la concentration de bactéries dans une culture? Décrit son fonctionnement général/ses étapes
- Décompte sur gélose
1- Diluer les bactéries d’un milieu plusieurs fois successives
2- Cultiver/ensemencer les bactéries diluées sur une gélose nutritive
3- Incuber pendant 24 h : la bactérie forme des clones par mitose et après 24 h les colonies deviennent visibles à l’oeil nu
4- Décompte des colonies visibles sur géloses et calculs de concentration
Qu’est-ce qu’un UFC (ce que ça représente pas l’acronyme lol)
Unité formatrice de colonie : présente dans bouillon au départ, est le centre de la formation d’une colonie sur la gélose; le décompte des colonies permet donc de déterminer la concentration de bactéries dans le milieu initial.
Ultimate fighting championship lol
Pourquoi la dilution en série est-elle importante pour la quantification de la concentration de bactéries dans un bouillon?
Le but du laboratoire étant d’obtenir un décompte des bactéries qui soit significatif et précis, il est nécessaire de diluer le bouillon de départ car il est souvent trop concentré au départ pour que les bactéries soient visibles sur la gélose (donc sans dilution, on peut pas compter et calculer)
Quel est la valeur d’UFC à obtenir pour avoir un décompte précis et significatif?
entre 30 et 300
Quelle est la conséquence d’une trop petite dilution (ex. se rendre seulement à 10^-4)?
Colonies sont trop petites et trop collées, formation d’un tapis bactérien; les décompte visuel est très difficile/imprécis voire impossible.
Quelle est la conséquence d’une trop grande dilution (ex. 4 UFC sur la gélose)?
Diminution de la précision, n’indique pas vraiment la concentration initiale.
Quels sont les avantages de la croissance sur gélose? (3)
1- Visualisation des UFC, de leur forme, couleur et aspects caractéristiques
2- Capacité à dénombrer les bactéries
3- Isolation d’une espèce bactérienne, on obtient une culture pure de bactéries
Quel est le matériel nécessaire pour effectuer une quantification de solution bactérienne?
Quel est la fonction de chacun dans le labo?
- Solution bactérienne de la culture de bactérie
- Bouillon nutritif : destiné à obtenir une croissance rapide des bactéries (riche en protéine)
- Brûleur, briquet, support à éprouvettes : matériel de base pour le travail en asepsie; limiter la contamination, stériliser des instruments
- Solution saline stérile : ce qui est utilisé pour faire les dilutions des bactéries
- Pipettes (10 ml et 1 ml) : mettre le bouillon et la saline stérile dans le tube stérile pendant la dilution
- micropipette : effectuer les dilutions en série, prendre un échantillon d’un tube pour le mettre dans l’autre
- tubes stériles avec bouchon : faire les dilutions
- agitateur vortex : bien mélanger la saline et les bactéries, faire une dilution adéquate
- géloses nutritives : milieu nutritif favorisant la prolifération et le développement des bactéries (comme le bouillon mais juste solide)
- alcool : stériliser la tige d’étalement avant de la flamber, la rendre stérile
- tige d’étalement en plastique : étaler correctement la solution de bactéries diluée, l’ensemencer complètement sur la gélose
- Compteur enregistreur : comptage précis des UFC sur la gélose
- Incubateur 37C : donner la température nécessaire pour la croissance des bactéries, reproduit la température du corps
Explique globalement comment faire une dilution en série. Quel est le rôle de cette manipulation dans le labo?
1- Mettre un certain volume de saline stérile dans chaque tube de verre stérile
2- Pipeter un volume de la solution de bactéries et le mettre dans le premier tube de verre. Vortexer (bien homogéniser, vraiment effectuer la dilution)
3- Prélever dans le premier tube le même volume que celui de la solution bactérienne et l’introduire dans le deuxième tube. Vortex.
4- Refaire l’étape 3 pour le nombre de dilutions souhaitées
Rôle : permet de diminuer la concentration initiale de bactéries qui est trop élevée pour être comptée (dans le bouillon) à une concentration qui permet un décompte précis. Aussi, pcq on connait les volumes exacts pris et qu’on le fait en série, on s’assure d’être capable de calculer la concentration initiale et de juger de sa fiabilité (comparer les résultats de la concentration finale obtenus selon différentes dilutions, qui devraient être égales + les résultats devraient être du bon ordre de grandeur)
Explique globalement comment ensemencer une dilution de bactéries sur une gélose avec une tige d’étalement. Quel est le rôle de cette manipulation dans le labo?
1- Identifier les boîtes de pétri : équipe, date, dilution, initiales (sur le fond, à l’extérieur)
2- En asepsie, transférer un volume de dilution sur la gélose correspondante.
3- Tremper la tige dans l’alcool et la passer dans la flamme
4- Faire des mouvements de va et vient avec la tige en tournant le pétri jusqu’à ce que le liquide soit absorbé.
5- Fermer le couvercle et mettre la paraffine pour sceller. Répéter pour toutes les dilutions.
Rôle : bien introduire les bactéries diluées dans leur nouveau milieu nutritif, permet leur croissance sur la gélose et donc leur éventuel décompte
Quel est le rôle de l’incubation 24h à 37 dans le lab?
Permet la croissance/reproduction des bactéries : temps nécessaire à la prolifération et température de celle du corps.
Comment est-ce qu’on effectue le décompte des bactéries sur la gélose (genre compter lala, la dernière étape)?
1- Utiliser uniquement les pétris contenant entre 30 à 300 colonies (trop, ex tapis = ne pas le faire, résultat impossible/pas précis)
2- Entre 100 et 300 UFC, on peut séparer le pétri en 4 ou 2 et compter seulement une partie plus la multiplier pour avoir un approximatif
3- Dénombrer en les marquant avec un sharpie et en comptant chaque avec le compteur enregistreur
4- Faire les calculs
Rôle : déterminer la concentration initiale du bouillon, vérifier que les dilutions en série ont bien été faites (après les calculs, le résultat obtenu est du bon ordre de grandeur)
