Culture cellulaire Flashcards
Quel est le but de la culture cellulaire?
Recréer in vitro les conditions essentielles à la survie et à la reproduction de cellules se trouvant normalement dans un organisme complet et complexe pour étudier le fonctionnement des cellules.
Quels sont les avantages de la culture cellulaire?
1) permet d’étudier directement le fonctionnement des cellules (effets des med, substances toxiques, dev des cellules cancéreuses)
2) au ❤️ du clonage thérapeutique et de la médecine regenerative
3) alternative aux expérimentations animales
Quels sont les inconvénients de la culture cellulaire?
- Grande majorité des cellules animales ne peuvent pas être cultivées in vitro car elles ne peuvent pas se reproduire (elles sont trop différenciées). Il faut alors utiliser des cellules souches (mais leur comportement est trop variable) donc on utilise surtout des cellules transformées génétiquement (se multiplient à l’infini)
- Très cher (équipement de haute qualité ex. ESB)
- Beaucoup de chance de contamination (l’erreur est humaine lol), résultats dépendent de la qualité du travail du chercheur
Par quoi sont remplacés les systèmes in vivo (vivants) lors de la culture cellulaire in vitro (laboratoire)? Quels sont les paramètres nécessaires afin de recréer l’organisme vivant le plus possible?
- Système digestif: MILIEU DE CULTURE (nutriments essentiels et utiles à la croissance et au maintien en vie des cellules)
- Système respiratoire : INCUBATEUR À C02 ET BOCHON VENTILÉ (pH, concentration/échange gazeux)
- Système immunitaire : ANTIBIOTIQUES (stérilité milieu)
- Système urinaire : LAVAGE DES CELLULES AVEC LA SOLUTION PBS (élimination déchets et contaminants du milieu, pH, pression osmotique)
- Système nerveux : INCUBATEUR À CO2 (température, pression osmotique)
- Système hormonal : facteurs de croissances, hormones diverses
*il y a aussi une surface d’attachement et une concentration initiale minimale
Nommer les avantages à utiliser des cellules transformées en culture cellulaire?
- Cellules immortelles
- N’est pas limitée dans son nombre de réplications (comparativement aux cellules animales ou aux cellules souches)
C’est quoi un degré de confluence et pourquoi il est utilisé?
- % de l’espace occupé par les cellules adhérentes sur le fond d’un flacon qui se reproduisent en croissant les unes sur les autres en formant un tapis.
- déterminer à partir d’un microscope inversé
- ≥ 80% = passage sinon changement de milieu (permet d’observer la vitesse de croissance)
C’est quoi un passage cellulaire?
Les cellules vivent et se reproduisent jusqu’à former un tapis. Le passage est le transfert d’une partie des cellules dans un autre flacon pour maintenir une culture en vie
Rôle des manip de culture cellulaire : passage cellulaire
- Les cellules se multiplient dans un flacon —> elles utilisent l’espace fourni et le milieu de culture pour croître
-Qd croissance est vive : l’espace et les nutriments viennent à manquer et les déchets métaboliques polluent environnement de vie des cellules - Passage permet aux cellules de survivre, croître davantage.
- Passage doit être effectué dans un new flacon avec un new milieu de culture
Rôle des manip de culture cellulaire : changement de milieu
Croissance cellulaire faible -> changement milieu culture pour enlever déchets + redonner nutriments. Couleur jaune (pH)
Rôle des manip culture cellulaire : décollement des cellules
La vaste majorité des cellules animales croisent en s’attachant les unes aux autres pour former des tissus et des organes. In vitro, les cellules nécessitent
—> surface d’attachement (paroi flacon)
—> concentration initiale (nombre minimal sinon cellules meurent)
Quand on souhaite faire passage, besoin de décoller les cellules pour mettre dans nouveau flacon. Faut alors briser liens protéiques : cellules adhèrent entre elles et à la surface par l’intermédiaire de leurs protéines membranaires. Utilise trypsine (enzyme spécialisée digestion protéines extraite suc pancréatique sécrétée dans intestin).
Matériel nécessaire pour passage cellulaire (10)?
- Flacon T25 (10mL) utilisé pour la culture de cellules adhérentes (grande surface) (5,0mL nécessaire)
- Flacon T75 (20-30mL)
- Milieu de culture pour faire croître les cellules (contient milieu nutritif, sérum de veau, antibiotiques)
- Solution de lavage (PBS) —> rincer les cellules et les débarrasser de leur déchet
- Trypsine (décollement des cellules)
- Incubateur à CO2
- Microscope inversé
- Enceinte de sécurité biologique de classe II (protège le manipulateur, le produit et l’environnement)
- Colorant vital
- Cellules
Identifier et expliquer les différentes erreurs à éviter en culture cellulaire?
- Ne pas travailler près de la grille (rester AU MILIEU)
- Juste dévisser les bouchons qu’on utilise
- Tourner la tête qd on parle
- Pas toucher le becher à déchet avec goulot du flacon et verser du côté du fond du flacon
PIPETTE: choisir bonne taille de pipette et vérifier graduation (vide complet ou non), toucher une à la fois, NE PAS toucher le bout de la pipette avec doigt ou encore bout pipette sur plancher de l’ESB car contamination - Transporter VERTICALEMENT flacon mais mettre à L’HORIZONTAL dans l’incubateur pour que les cellules croissent sur le fond du flacon
-Couvrir le bouchon du flacon avec la main pour ne pas mouiller le filtre
-ne toucher qu’une seule pipette à la fois
-la main qui ne pipette pas doit enlever le bouchon et le garder vers le bas
-Il faut mettre le flacon à l’horizontale dans l’incubateur afin que les cellules croissent sur le fond du flacon + bien secoué le fond pour en mettre partout
-se laver les mains et les avants-bras et les désinfecter à l’alccol
-porter une tenue adéquate et avoir les cheveux attachés
Rôle des produits utilisés en culture cellulaire : milieu de culture
- Fait croître les cellules
- Composé de 3 types de solutions :
1) Milieu nutritif (éléments nutritifs, facteur de croissance, indicateur de pH rouge phénol)
2) Sérum de veau (sert à modifier la vitesse de reproduction des cellules en altérant la [ ] de sérum dans un milieu de culture
3) Antibiotiques : contribuent à prévenir la contamination bactérienne (pas essentiels) - Milieu de culture arrête la trypsination!!
Rôle des produits utilisés en culture cellulaire : PBS et trypsine
PBS : lavage (débarrasser les cellules de leurs déchets) Trypsine : décollement des cellules
Rôle des appareils : incubateur à CO2
Incubateur à 37 degrés, 5% CO2 pour recréer les conditions environnementales de l’intérieur de l’organisme
