La conjugaison Flashcards
Que sont les éléments ICE?
Éléments qui s’excisent du chromosome pour s’intégrer ailleurs : conjugaison permet le transfert de ces molécules qui ne sont pas physiquement séparées des chromosomes
Découverte de la conjugaison?
2 volet par Lederberg et Tatum
- Croisement d’auxotrophes(souche His- x souche Leu-) → étalement sur milieu minimum His-/Leu- = colonies
- Échange ou révertants?
- Croisement de polyauxotrophes → étalement sur milieu = colonies (possibilité de révertants impossible)
Qu’est-ce qu’un révertant?
Mutation secondaire qui ramène au phénotype original
Caractéristiques de la conjugaison découvertes par Lederberg et Tatum?
- Exige contact ¢-¢
- Mécanisme résistant à la DNase
- Transfert de plasmides
- Transfert d’un seul des 2 brins d’ADN (mécanisme comme cercle roulant)
Plasmides autotransmissibles vs mobilisables?
- Autotransmissibles : portent tous les gènes impliqués dans la conjugaison
- Mobilisables : portent gènes/séquences permettant d’être transférés, mais nécessitent la présence d’un plasmide autotransmissible dans la même cellule pour la mobilisation
Plasmides autotransmissibles détectés chez les bactéries et les archées. Les mieux caractérisés?
- Gram - : E. coli, Pseudomonas
- Gram + : Streptococcus, Bacillus, Staphylococcus
Classification des plasmides autotransmissibles?
Selon leurs gènes tra…
Exclusion d’entrée : inhibe l’entrée de plasmides partageant les mêmes tra (comme groupe inc)
Les plasmides autotransmissibles sont plus grands que les plasmides mobilisables. Pourquoi?
Les gènes tra!!! environ 1/3 du plasmide, regroupés près de l’oriT
Conjugaison, gènes tra : 2 modules fonctionnels complémentaires coordonnés?
- Mpf : interaction ¢-¢
- Dtr : préparation au transfert et réplication de l’ADN
Rôle de la composante Mpf dans la conjugaison?
- Formation du canal (et pilus) = Structure permettant la reconnaissance, l’attachement et la fixation des 2 ¢ afin de permettre le transfert d’ADN et des protéines
- Envoie signaux d’interaction ¢-¢ pour se coordoner avec Dtr
Structure du pilus de conjugaison?
- Fait de SU de pilA (piline)
- Peut s’allonger et se contracter grâce à l’hydrolyse de l’ATP afin de permettre contact avec l’autre cellule
Structure du pilus : différences inter-plasmides?
Oui, adaptation à différents environnements.
Ex : pColIb a 2 pili → 1 long et flexible pour les milieux liquide, et un court rigide pour milieux solides
Fonctions du pilus de conjugaison?
- Reconnaissance de la ¢ réceptrice (arrimage des partenaires)
- Rapprochement par rétraction
- Facilite formation du canal
Vrai ou faux : le canal se forme dans le pilus de conjugaison
Faux, le canal ne se forme pas dans le pilus, mais pilus facilite la formation du canal
Canal de conjugaison?
- Codé par Mpf
- Pont inter-cytoplasmes
- Permet le passage d’ADN et de protéines
- Formé des gènes Tra
Rôle des protéines de couplage (dans composante Mpf)?
- Arrimage des cellules
- Confèrent la spécifité de l’ADN transféré
- Reconnaissance de la relaxase et des protéines transférées (doorman)
Responsables des signaux (de contact)
- Activation spécifique de la relaxase
- Préparation au transfert d’ADN
En gros, active Dtr
Où sont situées les protéines de couplage de conjugaison?
Associées au canal dans la cellule donneuse (plasmide F = TraD)
Rôle de TraD sur plasmide F?
Protéine de couplage, apparenté à FtsK (ADN translocase) = translocation de l’ADN et des protéines
Les protéines du module Mpf ont une homologie avec…?
TTSS (machinerie de translocation de macromolécules)
Rôle de la composante Dtr dans la conjugaison?
- Gènes près de l’oriT
- Implique une relaxase (TraI) qui agit comme une endonucléase spécifique + hélicase → effectue une coupure monocaténaire
Décrit la conjugaison chez les Gram-.
- Mpf synthétise pilus et envoie le signal à Dtr qu’il y a un contact ¢-¢.
- Relaxase se lie au site nic de l’oriT et coupe 1 des 2 brins d’ADN → s’attache en 5’ via résidu tyrosine
- ADN + relaxase = transférés via canal (relaxase traîne ADN:1 jusque dans l’autre ¢)
- Dans ¢ receveuse, relaxase recircularise ADN:1 via réaction de phosphotransféraxe
- Relaxase est libérée et dégradée
Qu’est-ce que le relaxosome?
Relaxase + protéines associées à oriT (primase, hélicase)
- Permet séparation des brins dans ¢ donneuse (relaxase)
Relaxosome : est-ce que la primase plasmidique est transférée avec l’ADN:1 lors de la conjugaison?
Oui, car avantage pour les plasmides d’utiliser leur propre primase au lieu d’utiliser celle de l’hôte → assure formation d’ADN:2 indépendante de l’hôte. (montré avec primase xsomique thermosensible)