la cellule Flashcards
Nommez quelques caractéristiques de la cellule.
• Les cellules sont de petites entités physico-chimiques avec une membrane plasmique qui les entourent et qui contient une solution aqueuse concentré de produits chimiques. Elles ont la capacité de créer des copies d’elles-mêmes en grossissant et en se divisant par la suite, grâce à une ou plusieurs molécules d’ADN.
Quels sont les 2 théories cellulaires?
- La cellule est l’unité de base du règne végétal et animal
* Toutes cellules proviennent d’une autre cellule
À quoi sert la membrane plasmique?
• La membrane plasmique permet de conserver ses nutriments a l’intérieur, d’excréter les déchets et de conserver les produit de synthèse.
Qu’est-ce qu’il y a sur la membrane plasmique?
Des protéines de transport
quel sont les trois types d’organismes?
- Animaux, champignons et les bactéries: se nourrissent de d’autres vivants ou les produits chimiques qu’ils produisent (organotrophes)
- Phototrophes : se nourrissent l’énergie lumineuse
- Lithotrophes : les produits chimiques retrouver dans l’environnement (ex : sur une roche)
Quels sont les 3 divisions majeures du monde du vivant??
- Bactéries : organisme unicellulaire la plupart ne possédant pas de noyau et d’organites (procaryotes), possède un seule chromosome circulaire
- Eucaryotes : organismes multicellulaires ou unicellulaire contenant un noyau et des organites
- Archéobactéries : vivent dans des environnements extrêmes, ressemblent aux eucaryotes par leurs informations génétiques et ressemblent aux bactéries par leur apparence, leur métabolisme et leur conservation de l’énergie (procaryote n’ont pas de noyau ni d’organites et unicellulaire)
quels est la différence entre le cytosol et le cytoplasme?
le cytoplasme contient les organites
Quels sont les différents organites de la cellule eucaryote?
- On un noyau envelopper de la membrane nucléaire (double membrane constitué de pores)
- Cytosquelette : système de protéines qui donne la forme et permet à la cellule de bouger
- Vésicules
- lysosomes
- réticulum endoplasmique
- mitochondrie
- matrice extracellulaire
- appareil de golgi
- ribosome
- peroxysomes
- microtubules
- centrosome avec une paire de centriole
- membrane plasmique : entoure la cellule
Quel est la théorie symbiotique de l’apparition des cellules eucaryotes?
•Théorie endosymbiotique : À l’origine, certains organites des eucaryotes seraient des bactéries vivant à l’état libre qui se sont faites ingérées par des cellules plus grandes avec lesquelles elles ont établi une relation bénéfique mutuelle (symbiose).
quels sont les étapes pour isoler une cellule?
Défaire la matrice extracelullaire et les jonctions
Intercellulaires : Enzymes protéolytiques: V. g. trypsine, collagénase ET
EDTA: Calcium requis pour l’adhésion cellulaire
•Par contre, pour manipulation génétique ou une protéine rare →enrichissement supplémentaire d’un type cellulaire
quels sont les étapes pour faire une mise en culture?
• Étapes pour faire une mise en culture :
S’obtient par la dissociation de cellule de leur tissu
Nous obtenons une population plus homogène et cela est plus pratique
Cela requière une surface solide (gélose)
Qu’est-ce que le FACs?
• Le principe est basé sur un anticorps reconnaissant un antigène qui est couplé à un colorant fluorescent.
• Isolement :
1- De fines gouttes contenant une cellule passent à travers le faisceau d’un rayon laser
2- Les gouttes contenant des cellules fluorescentes sont chargées négativement et détecté
3- Celles-ci sont alors déviées par un champ électrique dans un contenant
Quel est la différence entre une culture primaire et une lignée cellulaire?
- Une culture primaire est une culture prélevé directement des tissues et crée un passage pour devenir une culture secondaire
- Lignée cellulaire : cellules qui sont immortelles
Quelle est la différence entre une cellule transformées et immortalisée?
- Cellules transformées : Ce sont des cellules dérivé de tumeurs, qui sont déjà immortelles au départ. Celles-ci prolifère à haute densité et ne s’attachent pas = elles forment des tumeurs lorsqu’elles sont injectées.
- Cellules immortalisées : cellules qui proviennent de tissus (ex) et qui ne sont pas immortelles au départ
Pourquoi la sénescence réplicative contribue à la mort des cellules dans une culture primaire?
• Sénescence réplicative : les télomères se raccourcirent, donc les chromosomes vont être touché, donc l’ADN = mort de la cellule.
Pourquoi le choc de culture contribue à la mort des cellules dans une culture primaire?
• Choc de culture : l’environnement qui change (pH) amène la mort des cellules qui ne peuvent vivre dans de telles conditions. Cela amène l’inhibition du cycle cellulaire.
Qu’est ce que la transfection?
• C’est la procédure par laquelle l’ADN est introduite dans les cellules. (différent de la transformation)
Qu’est-ce qu’on anticorps?
– Lesanticorps,ouimmunoglobulines(Ig),sontdes
protéinesproduitesparleslymphocytesBen
réponseàunemoléculeétrangèreouun
microorganisme(antigène)
– Ilslientfortementl’antigène
• Pourl’inactiver
• Lemarqueretenfaireunecibleàsadestruction
Chaquepopulationd’anticorpsestgénéréepar
unepopulationdistinctehomogènede
lymphocytesB
Qu’est-ce qu’un antigène?
unemoléculecontrelaquelleon
veutproduiredesanticorps
qu’est-ce qu’un épitope?
unerégionsurl’antigènecontrelaquelleunanticorpss’est
développé
Quelle est la différence entre les anticorps polyclonaux et monoclonaux?
- Anticorps polyclonaux : c’est un mélange d’anticorps reconnaissant plusieurs épitopes d’un même antigène.
- Anticorps monoclonaux : reconnaisse un seul épitope : sont hautement spécifique
Décrire la fabrication d’hybridomes.
- Dans une éprouvette, mettre un mélange de cellule normal de souris et une tumeur
- Par la suite, les cellules vont se fusionner
- Les cellules qui vont alors proliférer (les survivantes, après l’injection d’un poison) vont devenir des hybridomes
À quoi peut servir les hybridomes?
À fabriquer des anticorps polyclonaux
comment se réalise une immunobavardage?
1- Les protéines sont séparées par un gel 2D de polyacrylamide (horizontalement selon leur point isoélectrique et ensuite selon leur dimension)
2- Les protéines sont transférées sur une plaque de nitrocellulose et incubé en présence d’un anticorps qui reconnait les protéines phosphoryle sur thréonine pendant la mitose
3- La détection se fais avec un anticorps secondaire auquel il est fixé un produit coloré ou fluorescent
Comment fait-on un immunoprécipitation?
1- Des anticorps sont couplés à des billes d’agarose
2- Ces billes sont couplées avec un extrait protéique qui est ensuite centrifugé
3- Les anticorps lient les protéines d’intérêt
4- Une deuxième centrifugation est exécuté pour récupérer seulement les protéines d’intérêt (les autres sont dans le surnageant)
Comment fonctionnne une co-immunoprécipitation?
1- On mélange des anticorps couplé à des billes d’agarose avec des antigènes et des protéines qui interagissent avec l’antigène
2- Après centrifugation, l’antigène et la protéine sont ensemble et l’antigène réagit avec l’anticorps
3- Après une deuxième centrifugation on purifie et on garde les protéines et les antigènes, ce qui nous permet d’analyser la protéine d’intérêt.
À quoi servent les systemes ZFN, TALEN et CRISPR?
LesZFN,lesTALENetlesystèmeCRISPRontété
utiliséspourgénérerdescellulesESetdes
cellulesiPS génétiquementmodifiées,etpour
générerdesKOdansdifférentsorganismes(C.
elegans,rat,souris,poissonzèbre)
Comment fonctionne le CRISPR
1- Suite à une infection phagique, la bactérie excise un morceau de l’ADNdb du phage à proximité d’une séquence PAM
2- Cette excision lui permet de créé de petits ARN
3- L’endonucléase Cas9 est créé avec de petits ARN non codants qui agissent comme guide, ce qui permet de cliver le génome à l’ endroit désiré.
4- La petite séquence d’ADN est ensuite intégrée dans le locus CRISPR
5- Les cellules survivantes a l’infection et leurs descendants transcrive le locus CRISPR et produise les CRISPR ARN.
6- Lors d’une deuxième infection, ces petits ARN vont détruire l’ADN du virus grâce à la complémentarité avec l’ARN
**la cassette exprimant l’ARN guide (incl. la séquence cible) et la cassette exprimant la protéine Cas9 sont combinées dans un seul plasmide. Il n’y a donc qu’un seul plasmide à transfecter dans les cellules.
A quoi sert CRISPR
-Utilisé pour faire du remplacement de gène avec un gène muté, en
fournissant l’ADN gabarit en trans
- Utilisation d’une protéine CAS9 mutante dépourvue d’activité
nucléase et fusionnée à des domaines protéique d’activation ou
d’inhibition de la transcription pour activer ou réprimer des gènes.
Comment fonctionne un microscope optique?
Un microscope optique utilise des lentilles en verre pour converger la lumière sur ou au travers de l’échantillon pour former une image.
Comment fonctionne un microscope électronique?
Le microscope électronique utilise des lentilles électrostatiques et électromagnétiques pour former l’image en contrôlant le faisceau d’électrons et le faire converger sur un plan particulier par rapport à l’échantillon
Comment fonctionne la microscopie a fluorescence?
• Les molécules fluorescentes absorbent la lumière à une longueur d’onde (λ) spécifique et en émettre à
une λ différente
• Si on illumine une telle molécule à sa λ d’absorption
• puis la visualise à travers un filtre qui ne fait passer que la lumière de λ d’émission, elle rayonnera sur un fond noir!
• Permet de visualiser des molécules fluorescentes endogènes et exogènes
Comment fonctionne la microscopie confocale?
• Un laser balaye le spécimen dans toute son épaisseur et sa largeur,
et concentre le faisceau lumineux sur un point à une profondeur
précise du spécimen
• Les données pour chaque point sont rassemblées séquentiellement et les images produites sont enregistrées par un ordinateur
• Forme une image composite de l’ensemble de la cellule ou un plan
très mince de la cellule
Définir le mot résolution
en optique, le pouvoir de résolution d’un système optique désigne sa capacité à distinguer des détails fins
Définir le mot détection
Le fait de déceler un corps à l’aide d’un appareil spécialisé
Expliquer les différentes étapes de la préparation d’un échantillon pour la microscopie optique et électronique
- Fixation: Tue et préserve la structure de la cellule
Fixateurs: glutaraldéhyde, formaldéhyde, méthanol, congélation - Déshydratation: remplace l’eau avec du toluène
- Inclusion: milieu d’enrobage (cire ou epoxy), ou d’inclusion,
solidifié par polymérisation. - Coupe: microtome
- Coloration: augmente le contraste et rendent les
membranes cellulaires et autres éléments de la cellule visibles.
Qu’est-ce que l’hybridation in situ?
• Détection de séquences d’ADN ou d’ARN spécifiques
• Les sondes sont des ARN ou ADN complémentaires aux
séquences d’intérêt
• Repose sur les principes d’hybridation des acides nucléiques
• Appliquées sur les coupes de tissus, puis visualisées par :
1. radioautographie grâce aux nucléotides radioactifs présents dans la sonde
2. immunocytochimie grâce à la présence de nucléotides couplés à la digoxigénine,
alors détectée par un anticorps spécifique couplé à une
enzyme
Qu’est-ce que l’immunocytochimie?
L’immunocytochimie permet de révéler et cibler une molécule biologique à l’échelle cellulaire depuis des anticorps spécifiques. Pour mettre en évidence ce complexe antigène-anticorps, on peut schématiser très simplement cette réaction, par :
• d’un côté, l’antigène que l’on veut localiser
• et l’anticorps primaire spécifique, qui va se fixer sur l’antigène (s’il le trouve).
Définir la méthode FISH.
• Le FISH est une technique d’hybridation in situ utilisant des
sondes fluorescentes pour localiser une séquence spécifique d’ADN sur des chromosomes.
• Le FISH aussi utilisé pour localiser une séquence d’ADN sur
des chromosomes en métaphase
Qu’elle est l’utilité des protéines fluorescentesdont celle avec la GFP?
- Très utilisée comme molécule rapporteur poursuivre l’expression des gènes
- Elles peuvent se lier avec un peptide de signal, une région codante pour une protéine
Qu’est-ce que des gènes rapporteurs?
• Permet d’identifier les tissus et l’endroit dans la cellule où un gène est exprimé … ou comment sa localisation change en réponse à des
stimuli
A quoi sert la technique FRET
• L’utilisation des protéines fluorescentes permet d’étudier les
propriétés cinétiques d’une protéine et de déterminer si elle interagit avec d’autres protéines
Qu’elle est l’utilité FRAP et FLIP
Les données obtenues par FRAP ou FLIP permettent de
calculer de coefficient de diffusion des protéines
membranaires
Donne des informations sur la cinétique de la protéine
à quoi servent les indicateurs émetteurs de lumière qui permettent de mesurer la concentration intracellulaire de plusieurs ions inorganique.
- Utilisé pour mesurer la concentration intracellulaire du H+, Na+, K+, Cl- et Ca2+
- Micro-électrode que l’on insère dans la cellule
- Les changements de concentrations peuvent être analysés des ion-sensitive indicator ou une lumière d’émission révèle la concentration de l’ion.
Qu’est-ce que la microscopie électronique a transmission?
• Les électrons non diffractés sont dirigés sur un écran par des lentilles objectifs et une lentille projecteur zone claire. Les électrons diffractés n’atteignent pas l’écran zone sombre
Qu’est ce que la microscopie électronique à balayage?
1- Le spécimen est vaporisé avec un métal lourd
2- Le spécimen est balayé par un faisceau d’électrons
3- Émission d’électrons secondaires par le spécimen
4- Produit une vue 3D de la surface du spécimen
5- Résolution plus faible que TEM, soit ≅10 nm
Qu’est-ce que immunomarquage?
- Utilisation des anticorps en TEM
- Incuber une coupe fine avec un Ac 1 aire, puis avec un Ac 2 aire fixé sur une particule d’or colloïdale opaque aux électrons → point noir
- Des anticorps sont utilisés pour identifier chaque partie d’une particule. Chaque anticorps reconnait une protéine différente, ce qui permet de voir chaque protéine est placer ou sur la particule.
