Isolierung gewünschter Gene Flashcards
1
Q
Möglichkeiten
A
- ausgehend von DNA
- ausgehend von mRNA
2
Q
ausgehend von DNA
A
- Isolierung des gesamten Genoms
- Spaltung in Fragmente (-> Schrotschussklonierung)
- Einbau in Vektoren
- Vermehrung in Bakterien
man erhält DNA-Fragment-Sammlung (Gen-Bib.)
nicht nur gewünschtes Gen, sondern komplettes Genom (inkl. Introns & unnötiges Materiak)
3
Q
Wie findet man Gen bei Isolierung ausgehend von DNA?
A
durch Gensonden (synthetisch hergestellte, kurze DNA/RNA-Abschnitte, komplementär mit Teilen des gesuchten Gens)
- radioaktiv markiert
- Basenpaarung -> Hybridsierung
Sichtbarmachen durch Autoradiographie
4
Q
ausgehend von mRNA
A
Isolierung mRNA aus entsprechenden Zellen
- mit Reverse Transkriptase mRNA -> cDNA (Introns rausgeschnitten, nur Exons)
- cDNA durch Ligase in Vektor eigebaut
- durch Klonierung cDNA-Bibliotheken
Vervielfältigung durch PCR
cDNA: copy-complementary DNA
