Isolasi DNA Flashcards
DNA yang merupakan material genetik terdiri dari molekul … berupa gula
…, basa nitrogen berupa … yang
dihubungkan oleh gugus … menjadi rantai …
nukleotida, pentosa (deoxyribose), adenin, timin, guanin dan sitosin, fosfat, polinukleotida
Struktur DNA yang merupakan rangkaian
nukleotida memberikan implikasi pada sifat kimia DNA yang akan bermuatan … pada pH
netral seperti yang umumnya ada di dalam sel, sehingga dengan mudah dapat
… dari komponen sel yang lain
negatif, dipisahkan/diisolasi DNA
Prinsip dalam isolasi DNA adalah … DNA dari
bagian-bagian sel yang lain
memisahkan
Pada isolasi DNA Melisis sel dengan … bertujuan mengeluarkan material DNA dari sel
larutan buffer
Pada isolasi DNA memisahkan molekul DNA dari … dengan …
debris sel, sentrifugasi
Teknik elektroforesis gel digunakan untuk …. Media yang digunakan untuk memisahkan umumnya adalah … Konsentrasi gel yang dipakai
biasanya kisaran …
memisahkan fragmen DNA berdasarkan
ukuran fragmen, gel agarosa, 0.8-1%.
Teknik elektroforesis didasarkan pada kemampuan molekul DNA untuk bergerak pada media agarose
bermedan listrik dari kutub … ke kutub ….
negatif, positif
Fragmen yang berukuran kecil akan bergerak lebih … dan lebih … dari kutub …
awal, jauh, negatif
Teknik PCR adalah suatu teknik yang digunakan untuk … secara …
memperbanyak fragmen DNA, in vitro
Teknik ini ditemukan oleh … pada tahun 1983. Dalam teknik ini
digunakan beberapa tahapan yaitu …
Kary Mullis, Denaturasi, annealing, ekstension
Pada praktikum isolasi DNA akan diisolasi DNA yang berasal dari …
dengan metode cepat, yaitu dengan memisahkan isi sel
berupa protein, DNA, RNA, lemak, ribosom dan molekul-molekul kecil lainnya.
bawang bombay
Selanjutnya
DNA akan diendapkan dari larutan suspensi sel menggunakan …
alkohol
Fenomena sel mana yang ditiru oleh Teknik PCR
replikasi pada DNA
Utas DNA mana dari template DNA yang diamplifikasi
sequence DNA target
Fungsi Primer pada PCR
awalan sintesis DNA
Apa fungsi enzim DNA polimerase
enzim yang melakukan katalisis reaksi
sintesis rantai DNA
Pada suhu berapa utas DNA bisa terpisah, dan pada suhu berapa utas DNA bisa
disintesis
Denaturasi 95 C, Sintesis Ekstension 75 C
Rumus molekul DNA yang terbentuk dari satu molekul DNA yang diamplifikasi
dengan PCR setelah n siklus
Y = (2^n – 2n)X
Kondisi PCR seperti apa dari simulasi yang anda kerjakan yang menghasilkan produk
paling optimum
jumlah siklus 35, dengan suhu denaturasi 94oC, suhu annealing 56oC, suhu
ekstensi 72oC, jumlah plasmid 100 ng, dNTP 0,5 μL, jenis DNA polymerase taq,
polymerase 1 μL, serta dalam waktu (30, 30, 60).
Proses PCR dilakukan dalam
suatu mesin … yang bisa diatur perubahan … secara bersiklus.
thermocycle, suhunya
pemisahan utas DNA satu sama lain. Suhu yang tinggi menyebabkan ikatan
hidrogen terputus sehingga terjadi pemisahan utas ganda DNA menjadi dua utas tunggal.
Denaturasi
penempelan primer oligonukleotida pada bagian DNA yang sekuennya
homolog.
Annealing
pembentukan utas DNA baru berdasarkan template DNA dari tiap utas.
Ekstension
Visualisasi DNA di gel
Fungsi penambahan pewarna (loading dye): sebagai … DNA dan … DNA
pada gel.
DNA akan mengikat pewarna, misalnya … yang menangkap …
pemberat, tanda migrasi, Etidium bromida (EtBr), UV
Faktor-faktor yang mempengaruhi laju migrasi DNA (3)
Ukuran DNA, Kerapatan gel, Kekuatan arus listrik
Ukuran DNA -> semakin … DNA akan semakin … bermigrasi
kecil, cepat
Kerapatan gel -> semakin … gel (semakin … pori-porinya) DNA akan
semakin … bermigrasi (membutuhkan waktu elektroforesis yang lebih …)
rapat, kecil, lambat, lama
Kekuatan arus listrik yang dialirkan -> semakin … arus, DNA dapat
semakin … bermigrasi (waktu elektroforesis bisa lebih …)
tinggi, cepat, singkat
Bila DNA akan disimpan, maka setelah DNA diambil lalu dikeringanginkan selanjutnya
dimasukkan ke dalam … dan ditambahkan …
microtube, ddH2O
