Intro + Conditions De Culture Flashcards
Avantage d’utiliser des cellules animales
- la potéine produite mature de la même façon que la protéine native (profil de glycosylation complet)
- sécrétion du produit (facilite la purification)
Désavantage d’utiliser des cellules animales
- croissance très lente
- milieux de cultures sont complexes et coûteux
- ils sont très vulnérables à la contamination
- très sensibles au cisaillement
- concentrations cellulaires max assez faible en culture
- rendement faibles en produit (-10 à 100mg/L)
Quel organite est responsable de la forme des cellules
Le cytosquelette
Une fois adhérées, la morphologie des cellules varie selon les types. Quels sont les formes
- Ellipsoïdales (rare)
- Fusiformes (fibroblaste)
- carrées ou polygonales (épithéliale)
- ramifiées ( bipolaire, multipolaire) : fibroblaste
Que sont les BHK
Fibroblastes
Que ssont les L6
Cellules musculaire
Que sont les SH-SY5Y
Neurone
Que sont les cellules HEK
Cellules Épithéliales
Que sont les Jurkat
Lymphocytes
Quels sont les types cellulaires les plus fréquemment utilisés et les plus faciles à cultiver?
Les fibroblastes et les cellules épithéliales
Quels sont les cellules animales les plus difficiles à propager
Les lymphocytes
Quelles cellules animales ont une durée de vie infinie
Cellules cancereuse et les cellules souche
Quels sont les caractéristique du cancer
- croissance anarchique
- pas de mort cellulaire
- divise a l’infini
On préfère travailler avec quel type de lignée? Et quels sont les risques?
Les lignée continues ou établies car elles ont une durée de vie illimité donc on aura jamais besoin de racheter des cellules mais c’est moin représentatif de ce que notre coprs fait
Risque: si on travaille avec des cell cancereuse et qu’on se fait mal on peut infecter nos cellules
Quel est la lignée qui ont une durée de vie limitée?
Lignées diploïdes (euploïde). Il faut jeter la souche après 20 a 80 passage. Ex la MRC-5
Quels sont les lignées qui ont une durée de vie illimité?
Les lignées continues ou établies comme les anaeuploïdes non tumorales (BHK) et les hétéroploïdes tumorales/néoplasiques (NS-0)
À quoi est lié le processus de différentiation cellulaire?
À la présence de messagers chimiques produits par des cellules éloignées
Quelles cellules est plus facile à différencier?
Celle qui est la plus haute “supérieure” dans une lignée
Quels sont les 3 différents feuillets
- endoderme
- mésoderme
- ectoderme
Expliquer les types de communication cellulaire
- communication autocrine: cellule s’envoye un message a elle même
- Communication paracrine: à des cellules proches (il y a 2 type)
- communication hétérocrine: envoye un message à une cellule cible de type différent
- communication homocrine : envoye un message à une cellule cible de même type - jonction ouverte ou désmosome : c’est un contact direct entre les 2 cellules
Endocrine : envoye un message à une cellule cible par les vaisseaux sanguin
Quels sont les conditions de culture?
T° = 37°C ou 34°C si on veut ralentir la croissance
Humidité : on va mettre un bassin d’eau stérile dans le fond de l’incubateur pour que les milieux de cultures ne s’évapore pas si non les cell vont se déshydrater
CO2 : 5 à 10 %
PH : 7.4 (6.2 pour insect)
Les pourcentages de gaz dans l’incubateur et de où proviennent-ils ?
CO2 : 5 à 10%
Vient d’un cylindre de gaz carbonique comprimé et du métabolisme des cellules en culture
(H2O + CO2 –> H2CO3 –> H+ + HCO3- )
Air : 90 à 95 %
Vien de l’atmosphère ( il faut un volume minimal de milieu de culture pour assurer une bonne diffusion de O2)
Quels sont les 2 tampons utilisé pour un maintien du pH?
- Tampon carbonate : pH 5 à 7
- tampon hepes : pH 6.6 à 8 (plus constant)
Quel est l’indicateur de pH utilisé?
Le phénol rouge
Le pH influence le métabolisme de quoi?
- biodisponibilité des nutriments
- liaisons covalentes protéines
- sensibilité des enzymes
Voir diap 28 pour couleur milieu selon le pH
Si la couleur du milieu est jaune ca veut dire quoi? Et quel est le pH
Le pH est de 6.5 et il faut regarder s’il y a de la contamination et changer le milieu aujourd’hui
Si le milieu est orange ca veut dire quoi? Et le pH est de combien
PH est de 7 et il faut changer le milieu dans les 24-48h qui suivent
Si le milieu est rouge ca veut dire quoi? Et le pH est de combien
On le laisse comme ca et le pH est de 7.4
Si le milieu est rouge foncé/mauve ca veut dire quoi? Et le pH est de combien
Changer le milieu ou remettre du CO2, regarder l’incubateur et la source de CO2 et le pH est de 7.8
