Brainscape's Knowledge GenomeTM


Top Flashcards (Certified)
All Flashcards

Laboratorijske histopatološke metode > IMUNOFLUORESCENČNA MIKROSKOPIJA > Flashcards

IMUNOFLUORESCENČNA MIKROSKOPIJA Flashcards

1
Q

Kaj izvajamo v laboratoriju za imunopatologijo?

A
  • imunopatološke preiskave oziroma serološke preiskave (določanje avtoprotiteles v serumu)
  • direktne imunofluorescenčne preiskave (DIF) za opredelitev odlaganja imunskih rektantov v tkivih
  • skupaj s histopatološkimi preiskavami omogočajo celovito diagnostiko imunsko pogojenih bolezni
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
2
Q

Kaj opazujemo s fluorescenčnim mikroskopom?

A

Opazujemo preparate, ki absorbirajo svetlobo krajših valovnih dolžin (modra) in oddajajo svetlobo daljših valovnih dolžin (zelena, rdela) - fluorescenčna svetloba

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
3
Q

Kaj je vir svetlobe pri fluorescenčnem mikroskopu?

A

Žarnica

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
4
Q

Iz katere smeri osvetljujemo preparat pri fluorescencni mikroskopiji?

A

Od zgoraj

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
5
Q

Objektiv opravlja dve nalogi pri fluorescencnem mikroskopu. Kateri?

A

Nalogo kondenzorja in objektiva

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
6
Q

Kje se nahaja vzbujevalni filter in kaj je njegova naloga

A

Med žarnico in preparatin

Da v preparatu vzbudi fluorescenco

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
7
Q

Kaj je vloga dikromatskega zrcala?

A

Da vzbujevalno svetlobo odbija na preparat vendar prepušča fluorescenčno svetlobo

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
8
Q

Kaj je vloga zapornega filtra?

A

Prepušča le fluorescentno svetlobo - vidno polje je temno, vidimo samo strukture, ki fluorescirajo

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
9
Q

Zakaj določamo avtoprotitelesa v serumu?

A
  • diagnostično pomembna
  • kasneje pomembna za spremljanje bolezni (kvantitativno in kvalitativno)
  • povezana z nastankom bolezni (ledvične, kožne, sistemske volezni)
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
10
Q

Naštej tehnike v imunoseroloških preiskavah

A

IIF, ELISA, radioimunska metoda, protitočna imunoelektroforeza, Western blot….

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
11
Q

Kaj določamo z imunoserološkimi preiskavami

A

Anti-GBM, ANCA, ASCA IgA in ASCA IgG, PLA2R, THSD7A, C1q, protitelesa proti antigenom kože

Testi akctivacije komplementa, določanje komponent komplementa, krioglobulinov ….

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
12
Q

Kateri dve metodi uporabljamo za dokazovanje protiteles?

A
  • indirektna imunofluorescenca
  • ELISA metoda
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
13
Q

Kaj določamo z indirektno imunofluorescenco?

A

Določamo avtoprotitelesa NA SUBSTRATU (celice, tkivo - ledvice, koža, požiralnik)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
14
Q

Kako izvajamo indirektno imunofluorescenco?

A
  1. Objektno stekelce s substratom + bolnikov serum (kjer so morda protitelesa) —> inkubiramo —> speremo
  2. Dodamo sekundarno protitelo z vezanim fluorokromom (inkibiramo) —> speremo

Pokrijemo

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
15
Q

Kaj je ELISA

A

Encimska imunoadsorpcijska preiskava (enzyme-linked immunoSorbent Assay)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
16
Q

Kaj določamo z ELISO

A

Kvantitativno/semikvantitativno določanje protiteles v bolnikovem serumu (indirektna)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
17
Q

Opiši kako izvajamo ELISA tehniko

A
  • v vdolbinicah je nanešen antigen
  • dodamo bolnikov serum (inkubiramo in speremo)
  • dodamo konjugat (protitelesa proti človeškem IgG - označena z encimom - inkubiramo - speremo)
  • dodamo substrat - inkubiramo
  • dodamo raztopino za ustavitev reakcije - odčitamo
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
18
Q

Kaj so ANCA

A

So protitelesa proti citoplazemskim antigenom, večinoma encimom nevtrofilnih granulocitov in monocitov

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
19
Q

Kako z IIF določamo ANCA

A

IIF na razmazu levkocitov (fiksiranih v 100% alkoholu)
- C-ANCA (+) citoplazemski vzorec (usmerjena proti proteinazi 3 - PR3)

  • P-ANCA (+) perinuklearni vzorec (usmerjena proti mieloperoksidazi - MPO)
  • atipična ANCA (pozitivna citoplazma in jedro)
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
20
Q

ELISA za ANCA

A

Na mikrotiterske ploščice damo antigen za ANCA - PR3 ali MPO

V jamice dodamo blonikov serum ali plazmo -> inkubiramo (če ima bolnik ANCA se ta protitelesa vežejo na antigen

Potem dodamo sekundarno poritelo, ki je povezano z encimom (hrenova proksidaza), ki lahko povzroči spremembo barve v prisotnosti substrata. To sekundarno protitelo je specifično za humani IgG, ki je razred protiteles, v katerega spada ANCA

Paanel ELISA (antieni azurocidin, BPI, katepsin-G, elastaza, laktoferin, lizocim

ANCA pozitivni avtoimunski sistemski vaskulitis
- granulomatoza s poliangitisom
- mikroskopski poliangitis
- eozinofilna granulomatoza s poliangitisom

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
21
Q

Različne generacije ALISA tehnik za določanje ANCA protiteles (PR3):

A
  1. Generacija: direktna ELISA
  2. Generacija: capture ELISA
  3. Generacija: anchor ELISA
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
22
Q

Protitelesa proti celičnim jedrnim in citoplazemskim antigenom

A
  • organsko nespecifična protitelesa ob različnih sistemskih boleznih
  • IIF - Hep2 celice
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
23
Q

Tri glavne skupine protiteles proti celičnim jedrnim in citoplazemskim antigenom

A
  • JEDRNI ( 14 podkuspin, sistemske avtoimunske revmatične bolezni, SLE, mešane vezivno tkivne bolezni, Sjorgenov sindrom, sistemska skleroza)
  • CITOPLAZEMSKI (9 podkuspin, SLE, polimiozitis, dermatozitis, primarna biliarna ciroza …)
  • MITOTSKI (5 podksupin, Sjorgenov sindrom, sistemska skleroza, Raynouldov fenomen)
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
24
Q

S katerimi metodami določamo protitelesa proti celilčnim jedrnim in citoplazemskim antigenom

A

IIF, ELISA, imunoblot metoda

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
25
ASCA IgA in ASCA IgG (ELISA)
Protitelesa proti celični steni Saccharommyces cervise - ASCA - Chronova bolezen (67%) - P-ANCA - Ulcerozni kolitis (67%)
26
Anti-GBM (goodpasture’s syndrome / anti-GBM diease)
- protitelesa proti epitopu na nekolagenskem delu alfa 3 verige kolagena IV (bazalna membrana pljuč in ledvic) - specifičnost in občutljivost blizu 100% (ledvica in pljuča), občutljivost 40% (samo pljuča) (Diagnostično pomembna, spremljanje bolezni)
27
Kako določamo anti-GBM?
IIF (+), nanešen antigen (aalfa 3 veriga kolagena IV, normalna ledvica) ELISA (alfa 3 veriga kolagena IV)
28
Anti-TBM
- protitelesa proti tubulni bazalni membrani - zelo redka - povzročajo tubulointersticijski nefritis - kaže s kronično ledvično boleznijo in znižano ledvično funkcijo - pogosto povezana z jemanjem zdravil
29
Katera protitelesa in s katero metodo jih določamo ob sumu na membranski glomeruonefritis?
Anti-PLA2R (ELISA) Anti-THSD7A (IIF) - protitelesa proti podocitom - 100% specifičnost - razlikovanje med primarnim (80%) in sekundarnim MGN - spremljanje bolezni (Direktna imunofluorescenca: IgG, C3)
30
Protitelesa proti antigenom kože (pemfigusnam pemfigoidna …)
IIF NA NORMALNI KOŽI - pozitivna reakcija vzdolž BM =>IIF na razcepljeni koži (ELISA - BP180, BP230, envoplakin, kolagen VII) ali IFF na sečevodu - pozitivna reakcija v medceličnem področju keratinocitov => ELISA (Dsg1, Dsg3)
31
BULOZNI PEMFIGOID
IIF (normalna koža - linerana ppozitivna reakcija vzdolž bazalne membrane) - proti antigenom epidermalne bazalne membrane (BM, hemidezmosomi) —> IIF (razcepljena koža - pozitivna reakcija na EPIDERMALNI strani) —> ELISA (anti-BP180, anti-BP230)
32
PRIDOBLJENA BULOZNA EPIDERMOLIZA
IIF (normalna koža - pozitivna reakcija vzdolž EPIDERMALNE BAZALNE MEMBRANE) —> IIF (razcepljena koža - pozitivna reakcija na DERMALNI strani) —> ELISA (anti-kolagen VII …)
33
PEMFIGUS
IIF (normalna koža - pozzitivna reakcija v MEDCELIČNEM PODROČJU KERATINOCITOV) - proti antigenom medceličnih mostičkov v keratinocitih - dezmosomi —> ELISA (anti-Dsg1, anti-Dsg3)
34
PARANEOPLASTIČNI PEMFIGUS
IIF (normalna koža - linerani depoziti vzdolž EPIDERMALNE BAZALNE MEMBRANE in pozitivna reakcija v MEDCELIČNEM PODROČJU KERATINOCITOV) - različni antigeni (plakini, katherini …) —> IIF (sečevod - pozitivna reakcija na celični membrani, delno v citoplazmi epitelija in linearni depoziti vzdolž epitelijske bazalne membrane —> ELISA (anti-Dsg1, anti-Dsg3, anti-BP180, anti-BP230, anti-envoplakin)
35
Epidermalna transglutaminaza (ELISA)
Dermatitis herpetiformis Dhuring - encim, ki se sprošča iz epidermalnih celic v dermis - glavni antigen pri DHD - vezava eTG na IgA imunoglobulin - odlaganje IgA, eTG kompleksov v papilarnem derminsu (Direktna IF - IgA)
36
Opiši komplement
- del primarne imunosti (obramba pred mikroorganizmi, osrednja vloga pri naravni obrambi, pomembna vloga pri specifični imunosti) - sestavljajo ga serumske beljakovine v krvi - aktivacija po treh poteh (klasična, alternativna, lektinska pot) - C3 konvertaza - končni produkt C5b-9 - povečanje ali zmanjšanjekomplementnega sisema - motnje v delovanju imunskega sistema (SLE, C3, glomerulopatija, aHUS)
37
Kaj merimo pri komplementu
Merimo aktivnost klasične poti (CH50) in alternativne poti (APH50) v serumu s hemolizo eritrocitov in z testom ELISA. V serumu in urinu lahko določamo C5b-9 (povečan pri vnetnih boleznih, glomerulonefritisih, sistemskih boleznih veziva)
38
Protitelesa proti komponentam komplementa
C3 nefritični faktor Faktor H i I
39
Anti-C1q (ELISA)
Avtoimunske motnje - avtoimunske bolezni veziva: SLE, LN - hipokomplementni utrikarijski vaskulitis - nepojasnjen mehanizem (neposredno, posredno - dolgotrajna aktivacija komplementa) … vnetje
40
KRIOGLOBULINI
- proteini - imunoglobulini v serumu - pri nizkih temperaturah se obarjajo (pri 37 plus pa raztopijo) - določamo vizualno oceno precipitata - določanje tipov z imunodifuzijo ali imunofiksacijo
41
Naštej in opiši 3 tipe krioglobulinov
Tip I (monoklonska - običajno monoklonski IgM) Tip II (mešana - monoklonski IgM in poliklonski IgG - vaskulitis) Tip III (mešana - poliklonski-poliklonski - vaskulitis, avtoimunske bolezni= Vaskulitis - prizadete male do srednje velike žile (imunsko kompleksni vaskulitis)
42
Direktna imunofluorescenca - DIF (imunofluorescencna mikroskopska preiksva)
Dopolnilna preiskava pri ledvični, kožni biopsiji (občasno tudi pri mišici, srcu) IMUNOHISTOKEMIJA imunoglobulino v in komponent komplementa (na zamzrznjenih rezinah - izjemoma na parafinskih rezinah)
43
Kaj prikazujemo z DIF
Imunske deppozite v tkivu (zunajcelični depoziti
44
Princip DIF
Vezava protiteles na antigene
45
Kaj je antigen
Antigen (substanca v organizmu - reagira s produkti, nastalimi v specifičnem imunskem odzivu (s protitelesi) Kemijsko so beljakovine (lahko pa tudi OH, lipidi, nukleinske kisline …)
46
Kaj je PARATOP
= mesto na protitelesu, ki prepozna antigen in se nanj specifično veže
47
Kaj je EPITOP
= del antigena, na katerega se veže paratop
48
Kdaj govorimo o avtoimunih reakcijah in avtoimunih boleznih?
Ko imunski sistem prepozna lastne molekule kot antigene
49
Kaj je protitelo?
= topna glikoproteinska molekula iz skupine imunoglobulinov - veže na tujke (ki so lahko potencialno nevarni)
50
Naštej razrede protiteles
IgG, IgA, IgM, IgE, IgD
51
Opiši sestavo protitelesa
Sestavljeni so iz 4 polipeptidnih verig: dveh težkih in dveh lahkih. Obe težki verigi sta med seboj identični - enako velja za obe lahki verigi. Verige so razporejene v obliki črke Y (povezane so z disulfidnimi mostički). Tujke vežejo protitelesa z obeha vrhovoma krakov.
52
Po čem se protitelesa med seboj razlikujejo?
Poaminokislinskih ostankih, ki so na vrhu obeh krakov. Zaradi te raznolikosti so različna protitelesa sposobna vezati različne tujke.
53
Imunofluorescencna mikroskopska preiskava
- IMUNSKI KOMPLEKSI se odlagajo v glomerulih ali koži kot krožeči imunski kompleksi iz krvotoka ali pa nastanejo v tkivu (in situ) - neustrezen imunski odziv - IZKLJUČITEV AVTOIMUNSKIH BOLEZNI (npr imunsko kompleksnih gromerulonefritisov, avtoimunski buloznih dermatoz…) - občasno diagnostična - IF - neznačilen, neimunsko dogajanje (pomembne druge metode - SM, EM, IS)
54
Kako izvedemo imunofluorescenčno mikroskopsko analizo (DIF)
- biopsija (košček kože, igelna biopsija ledvice - v ohranitvenem mediju ali fiziološki raztopini) - vzorec zamrznemo (v kriostatu režemo na 4-6 um) - stekelca s preparati posušimo - fiksiramo v acetonu - inkubiramo s protitelesi (IgA, IgG… - označeni s FITC) - pokrijemo
55
Imunofluorescenca (DIF)
- direktna imunofluorescenca na zmrznjenih rezinah (dokaz antigenov v tkivu s primarnim protitelesom označenim s fluorescentnim barvilom) - indirektna imunofluorescenca na zmrznjenih rezinah (primarno protitelo, sekundarno protitelo s fluorescentnim barvilom) - povečanje občitljivosti
56
Mikroskopiranje DIF
- ustrezno tkivo (ledvica - skorja z glomeruli, koža - epidermis in dermis) - v primeru, da nimamo zmrznjenih rezin ali v tkicu ni glomerula določamo imunoglobuline in komponente komplementa na parafinskih rezinah - s proteinazo)
57
Protitelesa (mikroskopiranje - DIF)
IgA, IgG, IgM, kapa in lambda, C3, C1qm fibrin/fibrinogen, albumin - thioflavin T Dodatno: podtipi IgG: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 Transplantacijske ledvične biopsije (Tx) - uromodlin (T-H glikoprotein) - C4d - HLA-DR
58
Kaj gledamo pri pregledovanju rezin
- vzorec (oblika) imunskih depozitov - sestav - intenziteta - razporeditev/lokalizacija (mesto odlaganja)
59
Katere vzorce depozitov ločimo
- linearni (anti-GBM, bulozni pemfigoid) - granularni (odlaganje imunskih kompleksov)
60
Katere vrste depozitov ločimo
- diskretni depoziti - neznačilen vzorec (neimunsko dogajanje) ali imunsko boren v sklopu ANCA vaskulitisa - nespecifični grudasti depoziti - sekundarni zaradi hialinoze, skleroze (grudasti depoziti - IgM, C3, C1q) Arteriohialinoza , FSGS
61
Intezivnost imunskih depozitov
Intenzivnost: +-, 1+, 2+, 3+ -> semikvantitativna ocena
62
Razporeditev, lokalizacija depozitov - LEDVICE
- mezangij, stena, mezangij in stena
63
Razporeditev, lokalizacija depozitov - KOŽA
- granularni depoziti v steni žil - depoziti v medceličnem področju keratincitov - linearni vzdolž epidermalne bazalne membrane
64
Razporeditev, lokalizacija depozitov - ostalo
Zunaj glomerulni depoziti Tubulni (granularni, linearni-anti-TBM, žilni -> lahko ob sistemskih boleznih-lupus)
65
DEPOZITI - KOŽA - VASKULITIS
- IgA vaskulitis, krioglouliemični vaskulitis, urtikarijski vaskulitis…
66
DEPOZITI - KOŽA - AVTOIMUNSKE BULOZNE DERMATOZE
- bulozni pemfigoid (gG, C3) Pridobljena bulozna epidermoliza (IgG, C3) Linerana IgA dermatoza (IgA, C3)
67
IMUNOPATOLOGIJA
= označuje bolezenska dogajanja in bolezni, ki nastanejo zaradi nezaželenega imunskega odgovora - reakcije preobčutljivost - avtoimunost in avtoimunske bolezni - zavrnitev presadka - bolezni imunske pomanjkljivosti - odlaganje monoklonskih imunoglobulinov Imunsko odziv - zaščitna vloga, neustrezen/nepravilen povzroči poškodbo in vnetje - IMUNSKO POVZROČENE BOLEZNI Kadar imunski odziv izzovejo lastni antigeni govorimo o AVTOIMUNSKIH BOLEZNIH (prirojeno nagnjenje + sprožilni dejavniki)
68
Kako delimo reakcije preobčutljivosti
Glede na osnovni imunski mehanizem (I, II, III - humoralni imunski odziv/protitelesa)
69
Reakcije preobčutljivosti tip I
= takojšnja preobčutljivost/anafilaksija, sprožijo alergeni
70
Reakcije preobčutljivosti tip II
= zaradi citotoksičnosti protiteles, proti antigenom na površini celic ali zunajceličnem matriksu —> aktivacija komplementa Anti-GBM, humoralna zavrnitev presajenih organov
71
Reakcije preobčutljivosti tip III
= zaradi imunskih kompleksov (antigen-protitelo) - aktivacija komplementa Večina oblik glomerulonefritisov, vaskulitis malih žil (IgA in krioglobulinemični vaskulitis)

Laboratorijske histopatološke metode (3 decks)

Brainscape helps you reach your goals faster, through stronger study habits.
© 2025 Bold Learning Solutions. Terms and Conditions