Immunotox Flashcards
définition immunotoxicité
modif indésirable de la fct + structure du syst. immuniaitre après expo à une subst. étrangère
immunotoxicologie :
4 domaines
- immunosupression/immunodépression
- Immunostimulation (anticorps bispécifique)
- Hypersensibilité (allergie)
- Auto-immunité (anti-ctla4)
Syst. immunitaire pour le toxicologue
- réseau de molécules et ¢ capables de détecter les pathogènes +tumeurs
- réponse innée
- réponse acquise ou adaptative
Réponse innée :
- fait appel à des rc capables de reconnaître des motifs propres aux pathogènes ou aux dommages , les PAMPs et DAMPs
- rc sont des PRR (host pattern recognition receptors)
- prend quelques heures
- peut reconnaitre les pathogènes ak un nbr limité de PRRs
structure des PAMPs :
-conservées et invariantes chez chaque classe de microorg
Réponse adaptative
basée sur 3 types de prots : CAPABLES DE RECONNAÎTRE DES MOLÉCULES SPÉCIFIQUES AUX PATHOGÈNES
- anticorps exprimés à la surface BCR ou sécrétés par les ¢B
- récepteurs des ¢T (TCR) exprimés par les ¢T
- molécules du CMH qui vont présenter les Ag aux ¢T
réponse adaptative utilise des rc générés par recombinaison somatique/ hypermutation
réponse adaptative repose sur l’expansion et la différentiation des ¢capables de reconnaître les Ag
Réponse adaptative
étapes
Ag => Th et Tc naïf => prolifération + expansion => T effectrices => contraction => T mémoires
Teffectrices
T mémoires
- éliminent agent infectieux par cytotox en produisant cytokines + interférons
- Protègent contre new infection => fast + efficace
Composants du syst. immunitaire
2
¢immunocompétentes : [c] ds organes lymphoides
- organes lymphoides :
a) primaires ou centraux : maturation des ¢immunocompétentes
b) secondaires ou périphériques : lymphocytes sont en contact ak AG
3 types de lymphocytes T
- ¢ T cytotox/effectrices (CD8) => fct de lyser les ¢ cibles (CMH1)
- ¢T aux (CD4) => fct aider les autres ¢ à monter une réponse immunitaire. SUBDIVISION (en TH1,2etc.) selon le profil de sécrétion des cytokines
- ¢ T régulatrices (Treg) => spécifiques pr Ag du soi => contrôle la rép. immunitaire
Lymphocytes B
Maturation : se différencier en plasmocytes => sécrètenet grandes qt d’immunoglobulines
¢ NK :(15% des leucocytes)
tuent par sécrétion de granzymes et de perforines les ¢ tumorales
OU
tuent les ¢ infectées qui expriment pas CMH1
ET
¢ nfectées recouvertes d’IgG (ADCC : antibody dependent cellulair cytotoxicity)
Phagocyte s:
comprennent les leucocytes polynucléaires (neutrophiles, basophiles,éosinophiles) et les monocytes/macrophages
ingérer les particules
Phagocytes :
Basophiles
Expriment le récepteur à haute affinité pour IgE => activés par les allergènes
mastocytes
-comme basophiles => expriment le rc à high affinity pour IgE
=>réticulés par des complexes allergènes- antigènes
=> libèrent médiateurs : histamine, protéases.etc
=> synthétisent : médiateurs pro-flame
=>activation => rx hypersensibilité immédiates et retardées => choc anaphylactique
Immunosuppression:
causé par ?
utilisation de corticostéroides , immunosuppresseurs, anticancéreux cytotoxiques
immunosuppression diminue ?
résistance aux pathogènes:
- infection du tractus respiratoire
- tractus digestif
- risques d’infection du CNS et peau
Immunosuppression augmente ?
-risque de cancer (quelque soit le médicament immunosuppressif)
Immunostimulation :
on peut distinguer
liée à l’utilisation de mx tels que cytokines
-rx de type grippal (syndrome cytokinique aigu)
- induction D’une hypersensibilité à des allergènes
- inhibition des enzymes impliqués ds mtb des mx
Rx d’hypersensibilité :
représentent?
signes cliniques et manif?
effet immunotoxique le plus fréquent des médicaments
-manifestations cutanées (érythème) + photoallergie (exposition au soleil) +
syndromes de Stevens-Johnson et nécrolyse toxique sévère => P-E INDUIT PAR IPILIMUMAB
Rx d’hypersensibilité :
manif. hématologiques
anémie hémolytique : métabolites vont se lier à la surface des erythrocytes et vont être reconnus => destruction du G.R
Rx d’hypersensibilité :
manif. vasculaires
Choc anaphylactiques :
conjugués mx-prots => accroissement rapide de la perméabilité vasculaire + PERTE du fluide intra-vasculaire ds l’espace extravasculaire
-forte contraction des muscles lisses ds les bronches et autour des artères coronaires
auto-immunité :
2 types d’effets
systémiques
spécifiques pr organes
eg: syndrome de lupus : perte de tolérance pr Ag et production d’autoAC ou spécifiques
Évaluation préclinique de l’immunosuppression ou immunostimulation
on check quoi ?
changement de poids
modifications de l’histologie ou architecture
(thymus, ganglions lymphatiques, rate, moelle osseuse, plaques de peyer)
Évaluation préclinique de l’immunosuppression ou immunostimulation
moelle osseuse :
effet du mx sur les lignées cellulaires
Évaluation préclinique de l’immunosuppression ou immunostimulation
thymus :
certains immunotoxiques entraînent une involution aigue du thymus
drogues immunosuppressives => atrophie du thymus
Évaluation préclinique de l’immunosuppression ou immunostimulation
rate
insensible à l’immunosuppression
Évaluation préclinique de l’immunosuppression ou immunostimulation
ganglions lymphatiques
affectés par les immunosuppresseurs (augmenter en taille => 1er truc qu’on check)
Évaluation préclinique de l’immunosuppression ou immunostimulation
hématologie et chimie clinique
=énumération des ¢ sanguines
=>étude des sous populations de lymphocytes périphériques
1.injection => prélever rate => prélever les splénocytes => inbucation avec anticorps monoclonal spécifiques => analyse par cytométrie en flux p
Évaluation préclinique de l’immunosuppression ou immunostimulation
évaluation des effets sur l’immunité humorale (réponse anticorps dépendante des ¢T)
essai PFC : + sensible et prédict d’une immunsuppression
mais difficile à automatiser
- injections hématies de moutons (épitotes différents des hématies de rongeurs) => laisse réagir => isoler rate + isoler splénocytes
=> on mélange splénocytes ak hématies de moutons et complément de cobaye => check ds microscope les plaques de lyse
=> 1 plaque de lyse = ¢B qui a produit des AC contre hématies de moutons et le complément va être activé au niveau local et va entrainer la lyse des hématies
Évaluation préclinique de l’immunosuppression ou immunostimulation
Évaluation des effets sur immunité humorale (réponse AC)
ELISA
alternative : mesurer par elisa le niveau des AC apres une immunisation (KLH)
=> mesurer les AC spécifique anti-klh produit par la souris
Évaluation préclinique de l’immunosuppression ou immunostimulation
Évaluation des effets sur l’immunité cellulaire
prolifération induite par un mitogène
splénocytes en présence de mitogène qui va stimuler la prolifération celluaire => mesurer par incorporation de thymidine et la prolifération
Évaluation préclinique de l’immunosuppression ou immunostimulation
évaluation des effets sur l’immunité cellulaire
essai de cytotoxicité
capacité de lyser les ¢ infectées
spléno + lignée qui diffère avec les Ag de surface des ¢ normales de notre rongeur => on laisse 5 jrs pr que splénocytes activées par histoincompatibilité (reconnait que c’est pas nous) prolifèrent
=> incubation =>marque la lignée ¢laire ak Cr51=> isotope qui va entrer ds la ¢ et qui va être relâché si slm la ¢ est lysée
Évaluation préclinique de l’immunosuppression ou immunostimulation
évaluation des effets sur l’immunité cellulaire
essai de cytotoxicité (alternative de Cr51)
mesurer l’induction de l’apoptose ds les ¢cibles
Évaluation préclinique de l’immunosuppression ou immunostimulation
évaluation des effets sur l’immunité cellulaire
DTH
Sensibilisation avec un antigène (hématie de moutons, KLH) => 7-14 jrs (pour former les ¢ T mémoires) => injection de AG ds pate => mesure de l’enflure (activation de l’immunité cellulaire qui a été conservée)
Évaluation préclinique de l’immunosuppression ou immunostimulation
évaluation des effets sur l’immunité innée
phagocytose
injection de listeria mono => rate => titration des L.mono (pr savoir cb de lysteria a été phagocyté = éliminés)
Évaluation préclinique de l’immunosuppression ou immunostimulation
évaluation des effets sur l’immunité innée
phagocytose
cytométrie en flux
Splénocytes avec bactéries,levures marqué FITC( fluo) => détection des ¢ contenant des particules phagocytées par cytométrie en flux
Évaluation préclinique de l’immunosuppression ou immunostimulation
évaluation des effets sur l’immunité innée
activité NK
Prélève splénocytes ( % de splénocytes) => mélange ak lignée qui est marquée au Cr51 qui n’exprime par CMH1 => reconnu par ¢NKet tuées => Cr51 relarquées => qtification
Évaluation préclinique de l’immunosuppression ou immunostimulation
évaluation des effets sur l’immunité innée
activité NK : validitié
validité de cet essai est débattue entre els agences réglementaires
Évaluation préclinique de l’immunosuppression ou immunostimulation
évaluation des effets sur la résistance de l’hôte
Modèles d’infection expérimentale
Mesure de résistance de l’hote ak infection
traiter avec le composé + injection de lysteria
=> mesure la survie des rongeurs et titration de lysteria (capacité de l’animal à éliminer le pathogène)
Évaluation préclinique du potentel d’induction de rx d’hypersensibilité :
hard à évaluer en toxicologie préclinique :
(3)
-nbreux cas : mécanisme est inconnu
-rx se produit souvent en réponse à un métabolite du composé ou à un complexe métabolite-prot
-concerne une faible fraction des personnes traitées ak le mx (variation inter-individus)
=> difficulté à obtenir des modèles animaux prédictifs
Évaluation préclinique du potentel d’induction de rx d’hypersensibilité :
prédiction de l’hypersensibilité médiée par l’IgE
modèles anaphylaxie systémique
-sensibilisation par injection du composé couplé à un porteur «carrier» (+ adjuvant) => 7 jours
=> test de provocation IV => désordes respiratoires, convulsion ,mort
Évaluation préclinique du potentel d’induction de rx d’hypersensibilité :
prédiction de l’hypersensibilité médiée par l’IgE
anaphylaxie passive cutanée
-sensibilisation par injection du composé couplé à un porteur «carrier» (+ adjuvant) => 7 jours
=> transfert de sérum à animal naif
=> injection colorant bleu => provocation à l’aide du composé
(taches dues à choc anaphylactique => ^ perméabilité = bleu Evan sort => mesurer)
Évaluation préclinique du potentel d’induction de rx d’hypersensibilité :
prédiction de l’hypersensibilité médiée par l’IgE
Induction d’une réponse IgE spécifique
-sensibilisation par injection du composé couplé à un porteur «carrier» (+ adjuvant) => 7 jours
=> mesure du niveau d’IgE spécifique par Elisa
Évaluation préclinique du potentel d’induction de rx d’hypersensibilité :
prédiction de rx d’hypersensibilité médiées par les ¢T
test de magnusson et kligman
-sensibilisation par injection de 0.1 ml de véhicule, composé ou composé + adjuvant
=> 7 jrs
=> rappel à l’aide d’unpatch pour 48h (patch avec mx)
=> provocation à l’aide d’un patch appliqué pour 24h => mesure de la surface érythème et oedème
Évaluation préclinique du potentel d’induction de rx d’hypersensibilité :
prédiction de rx d’hypersensibilité médiées par les ¢T
TEST LLNA
3hdt = marqueur de la division cellulaie
Jr1,2,3 => application composé/véhicule sur le dos de chaque oreille
Jr6 : injection iv de 3HdT => 5h later => prélèvement des ganglions lymphatiques auriculaires et mesure de l’incorporation de 3hdt dans les cellules nodales
Évaluation préclinique du potentel d’induction de rx d’hypersensibilité :
prédiction de rx d’hypersensibilité médiées par les ¢T
TEST PLNA
Injection du composé/véhicule ds plantes des 2 pattes postérieures
=> 7 jrs
=> prélèvemnt des ganglions lymphatiques drainants
mesure des poids des gang. drainant le comp/véhicule
Sclérose en plaques
description
maladie chronique à composante auto-immune du SNC
=>affecte principalement les pts jeunes
Sclérose en plaques
2 types de profils d’évolution
80% :
cyclique
10-20% :
progressive primaire
moitié des pts :
cyclique qui évolue vers une forme progressive
rare:
forme progressive ak épisodes aggravations soudains
Sclérose en plaques
pathophysiologie
(2)
MRI
- caractéristique pathologie de la sclérose en plaques : présene de plaques démyélinisées résultant de l’infiltration de ¢inflammatoires
- présence de zones périvasculaires inflammées et démyélinisées ak infiltrations par ¢T et macrophages ds matière blanche du cerveau
Sclérose en plaques
pathophysiologie
ya quoi ds les lésions de la sclérose
chimiokines chemiotractantes pr lymphocytes et monocytes
- augmentation du niveau de molécules d’Adhésion
- ¢T CD8 autoréactives
- ¢T CD4
Sclérose en plaques
pathophysiologie
modèle activation des ¢T
- activation des ¢T par Ag drainés du CNs par des Ag de pathogène mimétique
- régulation à la hausse des molécules d’adhésion (¢ vont adhérer au niveau des vaisseaux sanguins du snc => passer à travers les BHE et migre vers plaques)
- adhésion sur les ¢ end. des Vaisseaux à proximité des zones d’inflammation
4) réactivation par des ¢PA locales présentant des Ag de myéline - cytotox spécifiques et n-spécifiques, cytokines pro inflam, etc.
Sclérose en plaques
pathophysiologie
modèles EAE
vaccin contre rage
contamination ak tisseu neutral => encéphalomyélite disséminée aigue post vaccin => base pour modèles EAE de s.e.p
Sclérose en plaques
modèles EAE
met adjuvant ds souris,rats singes => démyélinisation inflammatoire du SNC => paralysie,mort
quantifier la paralysie du snc chez l’animal et qtfier l’infiltration et dommages
Sclérose en plaques
modèles EAE
induire indirectement des ¢T4 pour la myéline activée
=>démyélinisation => paralysie mort
natalizumab: rationnel (zip code)
bloquer l’Adhésion des intégrines vers le cerveau
natalizumab : identification :
criblage d’anti-intégrines
=>induction EAE par injections de clones ¢T spécifiques pr la prot. basique de la myéline
ou
=> protection par admin. d’anti intégrine
natalizumab :
préclin
2 tests
souris NOD :admin antia4b1 réduit infiltration des lymphocytes ds ilots de langerhans et prévient db de type 1 sans effets sur auto-immunité
pas d’effet sur immunité au CMV
pas d’effet sur la réponse à l’ovalbumine
TGN1412
pr qu’une ¢ T soit activée, un AG doit être présentée par un CMH et doit être reconnu par le rc de la ¢T
mais signal pas suffisant pr être activé => faut des cosignaux
si ya pas de cosignaux => mécanisme pr éviter des rx autoimmunes
=> on peut mimer ces cosignaux pr anticd28
permet prolifération, différentiation et fonctions effectrices
TGN1412 :
études cliniques
tempête cytokinique => surtout IL6
contrairement aux humains, les rongeurs de labo ont des nbrs limités de Tem. Léquilibre entre les Treg et Tem est donc très différent.
BITE :
blinatumomab
ac chimérique lié ak un anticd19
couple les ¢T ak les molécules de lymphomes => les ¢T vont pouvoir lyser les ¢du lymphome => ce qui va amener un relarguage de cytokines
auto immunité
eg : lupus :
perte de tolérance pour les Ag du soi qui entraine l’activation des ¢ B et la production d’auto-anticorps antinucléaires pr ADN db ou sb
auto immunité
conséquences lupus
myalgies, effusions pleurales
fièvre
perte de poids
faiblesse musculaire
