HPLC

Question 1

Para que serve a cromatografia líquida se a gasosa já consigo analisar gás, líquido e sólido?

Answer 1

Porque existem substâncias que não podem ser aquecidas, que são termicamente instáveis

Question 2

Como são as partículas usadas na coluna?

Answer 2

Partículas muito finas (3 a 10 micrometros)
Quanto mais finas (maior superfície de contato - mais equilíbrios vou ter) as partículas da fase estacionária mais eficiente é a separação (maior número de pratos teóricos)

• Mas quanto menor as partículas, mais pressão preciso fazer

Question 3

Quais são as características gerais das colunas p HPLC?
Tamanho da partícula, comprimento, diâmetro interno, revestimento externo, suporte e FE

Answer 3

Empacotada - partículas de 3 a 10 micrometros
Comprimento: 5 e 30cm
Diâmetro interno entre 1 e 5mm
Revestimento externo: aço ou plástico
Suporte: sílica
FE: compostos orgânicos química ou fisicamente ligados ao suporte

Question 4

Quais cuidados devo ter na utilização da coluna para HPLC?

Answer 4

Realizar limpeza antes de guardar
Manter extremidades vedadas no armazenamento
Evitar mudanças abruptas de pressão e temperatura
Usar solventes grau cromatográficos e soluções filtradas
Observar o sentido da coluna
Utilizar coluna de proteção
2 < pH < 8
Evitar precipitações durante a análise

Question 5

Vantagens e desvantagens entre a HPLC de Fase Normal e de Fase Reversa

Answer 5

FN:
- V: estabilidade da coluna, solubiliza muitas substâncias orgânicas, aplicável a amostras incompatíveis com água, versatilidade satisfatória
- D: Ruim para separar compostos iônicos, eluição demorada, baixa resolução, custo elevado de solventes orgânicos, maior tendência a formação de caldas (distorção do pico)

FR:
- V: ampla gama de aplicação, maior repro, água pode ser usada como FM, modificadores metanol e acetonitrila são de fácil acesso, ordem de eluição previsível, eluição em gradiente facilitada, menor ocorrência de adsorção irreversível
- D: não tem

Question 6

Sobre força de eluição. Como que é utilizar FM polar e apolar para fase normal e reversa?

Answer 6

Fase normal:
- FM Polar: Eluição mais rápida/ Maior força de eluição
- FM Apolar: Eluição mais lenta/ Menor força de eluição

Fase Reversa:
- FM Polar: Eluição mais lenta / Menor força de eluição
- FM Apolar: Eluição mais rápida / Maior força de eluição