HPLC

Question 1

wat is HPLC

Answer 1

• scheiden van stoffen met behulp van een vloeibare mobiele fase en een gepakte kolom.
• het oplosmiddel wordt door de kolom geduwd dmv een hoge druk.
• de hplc is populair omdat deze gevoelig is, geschikt voor het scheiden van niet-vluchtige stoffen en er kunnen aanpassingen gedaan worden aan nauwkeurige kwantitatieve bepalingen.

Question 2

Mobiele fase in RP-HPLC + afgiftesysteem voor oplosmiddelen, wat kan je hier over zeggen?

Answer 2

• mobiele fase bestaat meestal uit 2 polaire vloeistoffen die worden gemengd voordat ze de kolom in komen.
• 1 vloeistof is op waterbasis en vaak gebufferd terwijl de andere stof een organische modificator is zoals methanol of acetonitril.
• kan worden aangepast voor optimalisering van het scheidingsproces.
• de definitieve samenstelling van de mobiele fase is afhankelijk van de kenmerken van de stationaire fase in relatie tot de kenmerken van de moleculen die gescheiden moeten worden.

Question 3

gradient vs isocratic

Answer 3

isocratic: samenstelling van mobiele fase is consistent.
gradient: samenstelling van mobiele fase wordt gewisseld tijdens de meting

Question 4

hoe werkt de sample introductie

Answer 4

monsters worden geïnjecteerd via de injectiepoort, deze bestaat uit een injectieklep en monsterlus. het monster wordt in een injectiespuit geknepen, vervolgens via de injectieklep in de lus geinjecteerd. Een rotatie van de value rotor sluit de klep en opent de lus waardoor het monster in de stroom van de mobiele fase terecht komt.

Question 5

Silica kolom

Answer 5

silica kolommen (C18-kolom): deze kolommen bevatten silica deeltjes en zijn extreem apolair. Deze kolom wordt beschermd m.b.v. een guard colomn.

Question 6

Wat gebeurt er tijdens de stationaire fase in de RP-HPLC

Answer 6

wanneer het monster + mobiele fase door de stationaire fase gaan, zullen de bestanddelen van die oplossing migreren door de niet-covalente interacties van die bestanddelen met de stationaire fase. (moleculen met een sterkere interactie met de stationaire fase dan de mobiele fase elueren minder snel uit de kolom.) Bij RP-HPLC is de stationaire fase extreem apolair, polaire componenten zullen deze fase dus snel verlaten.

Question 7

Detectors in HPLC

Answer 7

1. UV: deze detecteert de absorptie van UV-licht.
2. brekeningsindex detector: detecteert de brekingsindexvariaties van de bewegende fasestroom.
3. Fluorescentie: deze detecteert de fluorescentie van de bewegende fasestroom.

De detectie wordt omgezet in een chromatogram.

Question 8

wat is ionisatie

Answer 8

base wil een H+ opnemen en een zuur wil H+ afstaan.