H. Pylori Flashcards
Quais são as características do H. Pylori?
◦ Gram negativo
◦ Espiralado
◦ Não esporulado
◦ Móvel e de superfície lisa
◦ Quatro - seis flagelos
◦ Microaerófila
◦ Cresce bem a 37ªC
◦ Período de incubação de 3-7 dias
◦ Catalase e urease positivo → Hidrólise de ácidos estomacais → alcalinizar/neutralizar um ambiente ácido
Sintomas: desconforto, refluxo, inchaço e plenitude
Cronificação: carencias nutricionais pela má absorção de nutrientes e vitaminas
Quais são os fatores de virulência ?
• cagA (gene) → prot CagA
• vacA (gene) → prot VacA
Quais as características e ações do gene cagA?
• Fator de Virulência ADQUIRIDO
• Faz a transformação e proliferação das celulas danificadas
• Faz mudança de citoesqueleto do estômago fazendo a formação de pedestais/micro-filamentos que aumentam a aderência/colonização bacteriana
• Ativação do fator de transcrição AP-1 e ativação a expressão dos oncogenes c-fos e c-jun. → proliferação e transformação celular → Processo inflamatório crônico → oncogênese
Quais as características e ações do gene vagA?
• Inibe a resposta específica (não gera resposta adaptativa)
• Forma uma exotoxina → citotoxina vacuolizantes → Formação de vacúolos intracelulares fazendo a destruição de mitocôndrias de uma forma que reduz o sinal inflamatório, ou seja não chama a atenção do sistema imunológico e o dano é mascarado → Liberação de citocromo C
• Estimula a resposta inflamatória gástrica → COX2 → Neu, Macrófago (APC), Linf. T
• Inibe IL-2 → não tem a proliferação celular → carcinogênese (tanto pela VacA quanto pela cagA) → Não gera memória imulonogica
• Demora mais para a doença ser avistada (sinalização clinica demorada)
Qual o teste para detectar gene?
Teste de biologia molecular (PCR)
Qual o teste para detectar proteína?
Teste de Western Blot
Quais são os principais anticorpos formados para se procurar em sorologias?
• IgA: presente na mucosa e secreções
• IgG: pela cronificação e por ser menor (facilidade para chegar no local do estômago)
◦ Criança gera IgG mais rápido que em adulto
Quais são os métodos invasivos (biópsia)? (6)
◦ Teste Rápido da Urease - TRU
◦ Histopatologia — padrão ouro
◦ Cultura
◦ Imunohistoquímica
◦ Técnica de Hibridização Fluorescente - FISH
◦ Testes moleculares - PCR
Quais são os métodos não invasivos (sangue ou fezes)?
◦ Teste respiratório com ureia marcada
‣ Não se faz pois é muito caro e com local especifico
◦ Testes sorológicos
‣ ELISA
◦ Pesquisa de antígeno fecal
◦ Testes rápidos
‣ Busca por anticorpos
O que é o teste rápido da urease (TRU)? Como interpretar?
Detecta a presença da catalase produzida pelo H. Pylori
Material coletado da mucosa do antro gástrico
Interpretação:
• **Negativo:** coloração permanece AMARELA → ambiente ácido (normal do estômago) • **Positivo:** coloração torna-se ROSA CHOQUE → presença de catalase → hidrólise da ureia → formação de amônia e gás carbônico → pH aumenta → transforma um ambiente ácido em um ambiente neutro ou alcalino
Explique como é feito o Histopatológico e quais as colorações a serem feitas
O exame histopatológico é realizado após endoscopia a partir da retirada de dois ou mais fragmentos da região do corpo e antro gástrico.
Colorações:
‣ WS (Warthin-Starry) → diagnostico + biópsia de corpo ou antro
• Preferência para esse pois tem prata que possui afinidade pela superfície da bactéria
OU
‣ Giemsa
+
‣ Hematoxilina-eosina (HE) → avaliação da gastrite, grau e padrão de inflamação, atrofia, metaplasia intestinal e displasia do epitélio gástrico (ou seja, informação da amostra de tecido é feito pela coloração HE)
Quais as funções da Imunohistoquímica?
É um teste complementar ao histopatológico
Detecção direta do H. Pylori
Expressão de oncogenes (detecção de antígeno por um anticorpo monoclonal ou policlonal) → verificar a evolução de linfomas gástricos, que têm estreita relação com a infecção por H. pylori.
O que é a técnica de hibridização fluorescente (FISH) ? Qual sua função?
É um método histoquímico que permite a visualização, identificação e localização de microrganismos in situ sem a necessidade de cultivos celulares, esta leva visualização direta da bactéria na amostra através da utilização de um conjunto de sondas fluorescentes, os oligonucleotídeos, que se ligam a bactéria, permitindo sua detecção.
◦ Funções: detecção da bactéria (reconhecimento do material genético da bactéria - apenas 1 cromossomo) e detecção dos genes que são responsáveis pelos fartares de virulência
Quais as características da cultura (pela biópsia)?
• Possui excelente desempenho
• Diagnóstico definitivo
• A cultura permite ainda a realização de testes de sensibilidade do H. pylori aos antimicrobianos
Empecilhos: numero de biópsias, exigência de meios de crescimento complexos in vitro e temperatura de transporte
Qual a diferença de transporte entre materiais que serão analisada os pela patologia e pela cultura?
Para o laboratório de patologia (histopatológico e Imunohistoquímica) deve transportar a amostra por meio de formol para conservar o tecido
Já para a analise clinica para cultura deve-se transportar em soro fisiológico (pois o formol mata a bactéria impedindo o crescimento)
Quais são os meios os meios de cultura utilizados e por quê?
‣ Ágar Sangue (AS)
‣ Ágar Chocolate (CHOC)
→ Mais ricos em nutrientes
Qual a diferença entre os testes sorológicos Diretos e Indiretos pelo método ELISA?
Como interpretar o resultado ?
‣ Divisão do método ELISA e Função:
• Direta — detecção da H. Pylori
• Indireta — detectar anticorpo anti-H. Pylori
‣ Resultado
• Amarelo Claro → Negativo
• Amarelo Escuro → Positivo
Obs: sozinho não da diagnostico precisa ser confirmado por histologia e/ou cultura para iniciar o diagnostico
Quando pedir a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR)? Quais suas funções?
Quando você suspeita basicamente que aquele paciente pode ter um fator de virulência ou que o paciente possa ter no contexto de infecção algo sugestivo de neoplasia
‣ Funções:
• Detecção do material genético da bactéria
• Detecção de um oncogene de tecido gástrico
• Detecção de gene de resistência a antimicrobiano
• Detecção da cepa de H. Pylori naquela infecção
• Identificação de infecções pós tratamento (teste coprológico)
◦ Por ser utilizado em fezes (nesse caso em especifico, nos de cima usa sangue normal)
O que fazer quando no processo de aumentar o numero de copias do material genético?
Deve-se fazer mais dois testes dentro do próprio PCR chamados:
◦ PCR quantitativa (sim, PCR do PCR) → para identificação dos genes alvos (número de cópias) → Pode ser chamado de Ciclagem (fazer as copias do material genético pelo alvo gênico por amplificação exponencial)
◦ Eletroforese → identificação do gene (visualização ao olho nu)
O que fazer quando um paciente já foi tratado porem ainda tem sintomas?
Solicitar Teste de antígeno fetal
◦ Resultado
‣ 1 linha — Negativo
‣ 2 linhas — Positivo
• Fazer outra biópsia para fazer cultura para fazer um teste de sensibilidade ao antimicrobiano devido a resistência da bactéria ao ATB utilizado anteriormente
