Gentechnik

Question 1

PCR Zutaten

Answer 1

Zutaten: ein DNA Fragment,viele Nukleotide, hitzestable Polymerasen, Primer, Pufferlösung (phWert stabil), Mg Ionen

Question 2

PCR-Methode Durchführung

Answer 2

mit Thermocycler
Schritt 1: Denaturierung -> Erhitzung auf 92-96Grad, Trennung der Stränge
Schritt 2: Primerhybridisierung -> schnelles abkühlen auf 50-65Grad (Primerabhängig), für 20-30sek damit Primer sich richtig anlagern können
Schritt 3: Elongation -> Erhitzen auf 72Grad (je nach Polymerase)
nach 1. Zyklus ->2,nach 2.Zyklus 4 usw (exponentieller Anstieg)

Question 3

Plasmide bei Klonierung

Answer 3

Enthält:

• ORI (Replikationsursprung) -> zum Vervielfältigen des Plasmids
• Antibiotikaresistenz -> Hift zum Nachweis, ob E. coli, das Plasmid aufgenomen hat
• MSC (multiplecloningside) -> biotechnisch hinzugefügt, sodass Restriktionsschnittstellen herausgeschnitten werden um Platz für die Fremd -DNA zu machen

Question 4

Klonierung: Wie kommt Fremd-DNA in Plasmid?

Answer 4

Nur wenn Retriktionsenzyme Fremd-DNA genau so geschnitten, dass in MSC rein passt, somit teil von Plasmid wird

-> DNA-Ligase: verbindet Alk und Phosphatgruppen

Question 5

Transformation: Plasmid in E. Coli Bakterium

Answer 5

= E.Coli wird dadurch verändert, dass Plasmid mit Fremd-DNA rein kommt

Dafür E.Coli kompetent machen: in CaCl +42 Grad wird Membran durchlässig
auf Vollmedium -> Wachstum

wird auf LB-Medium mit Ampicilin, ein E. Coli gegeben und Pasmid wächst, dann Plasmid aufgnommen

Question 6

Klonierung

Answer 6

Einbringen von fremder DNA in einen Organismus, der diese verfvielfältigt und vlt sogar Proteininfo dieser DNA herstellt

NICHT Klonen = erzeugen von komplett identischen Organismus

Question 7

PCR Zyklen

Answer 7

1*2^Zyklus