Génie génétique

Question 1

Qu’est-ce qu’une enzyme de restriction ?

Answer 1

Enzymes produites par les bactéries qui coupent l’adn à une séquence spécifique .
protection donc contre les bactériophages –> ADN viral coupé lors de l’infection
Chromosome et plasmide bactériens non affectés

Question 2

Mécanisme d’action des enzymes de restriction

Answer 2

Coupent des séquences d’ADN soit de façon cohésive ou de façon franche
cohésives –> coupe d’une façon a ce que les extrémités soient complémentaires , comme ca la bactérie n’est pas affectée( coupe à gauche et à droite)
Franches —> extrémités aussi complémentaires
coupe au milieu de deux séquences complémentaires

Question 3

Utilisation des fragments cohésifs

Answer 3

recombinaison avec l’adn dans un autre

soit ADN recombinant ou plasmide recombinant

Question 4

Nommer les étapes générales du clonage

Answer 4

1. Isolement de l’ADN du plasmide (vecteur de clonage) et d’un ADN d’intérêt à étudier
2. Digestion du plasmide et de l’ADN d’intérêt par les mêmes enzymes de restriction.
3. Production de plasmides recombinants entre l’ADN et le plasmide coupés
4. Transformation des bactéries avec les plasmides produits
5. Sélection des bactéries avec un plasmide recombinant recherché
6. Identification de la bactérie contenant le plasmide recombinant
7. Production massive des gènes recombinants ou des protéines associées

Question 5

Expliquer le processus d’isolement des ADN

Answer 5

Sélection d’un plasmide contenant au moins 2 gènes de sélection : 1. Un gène de résistance aux antibiotiques , 2. Un gène contenant un site de clonage
site de clonage: Section d’ADN pouvant êtres découpées par différentes enzymes de restriction et où un gène sera inséré.

Question 6

Expliquer le processus de digestion des ADN

Answer 6

Utilisation des mêmes enzymes de restriction pour couper le vecteur de clonage (ou plasmide) au site de polyclonage et l’ADN d’intérêt
dans l’ADN d’intérêt , on coupe et crées des bouts complémentaires Cohésifs

Question 7

Expliquer le processus de production de plasmides recombinants

Answer 7

On mélange le vecteur de clonage et l’ADN d’intérêt en les liants avec de l’ADN ligase
produits trois types de plasmides possible–>
1. plasmide non recombinant
2. plasmide recombinant sans gènes d’intérêt
3. plasmide recombinant avec gènes d’intérêt

Question 8

Expliquer le processus de transformation des plasmides

Answer 8

…..?