Geeniteknologian perusmenetelmät

Question 1

Mitkä ovat yleisimmät geenitekniikassa käytetyt entsyymit?

Answer 1

1. RNA- ja DNA-polymeraasi
2. käänteiskopioijaentsyymi
3. RNA-nukleaasit
4. restriktioentsyymit
5. ligaasit
6. cas-entsyymit
7. proteaasit

Question 2

Miten RNA- ja DNA-polymeraasientsyymejä hyödynnetään?

Answer 2

Hyödynnetään etenkin PCR-tekniikassa, jossa juosteita rakennetaan lisää.

Question 3

Miten käänteiskopioijaentsyymi toimii?

Answer 3

Käänteiskopioijaentsyymi rakentaa lähetti-RNA:n pohjalta vastin-DNA-juosteen, josta puuttuvat intronit, tehostajajaksot ja promoottori.

Question 4

Mitä RNA-nukleaasit tekevät?

Answer 4

Ne pilkkovat RNA-juostetta käänteiskopioinnissa.

Question 5

Mitä restriktioentsyymit tekevät?

Answer 5

Restriktioentsyymit katkaisevat DNA:n kukin määrätyn emäsjärjestyksen kohdalta.

Question 6

Miten ligaasit toimivat?

Answer 6

Ligaasit liittävät valmiiden RNA- ja DNA-juosteiden päät yhteen.

Question 7

Missä hyödynnetään cas-entsyymejä?

Answer 7

cas-entsyymejä käytetään erityisesti crispr-tekniikassa.

Question 8

Mitä proteaasit ovat?

Answer 8

Proteaasit ovat proteiineja pilkkovia entsyymejä.

Question 9

Miten tumattomien DNA voidaan eristää?

Answer 9

DNA on vapaana solulimassa, jolloin tumattomat solut hajotetaan emäksisellä kemikaalikäsittelyllä ja kuumentamalla, jonka jälkeen DNA saostetaan.

Question 10

Miten tumallisen DNA eristetään?

Answer 10

• ensin solunäyte jäädytetään typessä, jonka jälkeen solut murskataan
• lipidit irroitetaan pesuaineella ja proteiinit hajotetaan proteaasientsyymeillä
• lipidit ja proteiinit liuotetaan alkoholiin
• näyte sentrifugoidaan
• DNA saostetaan näkyviin kylmällä alkoholilla.

Question 11

Millä kahdella tavalla DNA:ta voidaan monistaa.

Answer 11

PCR tekniikalla tai bakteereissa.

Question 12

Mitkä ovat PCR:n vaiheet?

Answer 12

1. lämpötila nostetaan +95 asteeseen, jolloin DNA juosteet erkanevat
2. lämpötila lasketaan +55 asteeseen, jolloin alukkeet sitoutuvat DNA juosteiden päihin
3. lämpötila nostetaan noin +72 asteeseen, jolloin DNA polymeraasit alkavat rakentaa uusia juosteita

Question 13

Millä toisella nimellä kutsutaan DNA:n monistamista bakteereissa?

Answer 13

yhdistelmä-DNA-tekniikka

Question 14

Miten yhdistelmä-DNA-tekniikka toimii?

Answer 14

• haluttu DNA-näyte liitetään restriktio ja ligaasientsyymeillä osaksi plasmidia
• muokattuja plasmideja siirretään bakteerien kasvualustalle ja bakteerit ottavat ne sisäänsä
• bakteerit jakautuvat, jolloin ne monistavat oman perimänsä ja siirretyn DNA:n

Question 15

Miten todennetaan onnistunut siirto?

Answer 15

Antibioottivalinnalla, jossa plasmidiin lisätään myös antibioottiresistennin antava geeni.

Question 16

Miten elektroforeesi toimii?

Answer 16

Elektroforeesissa tutkittavat näytteet ajetaan verkkomaisen geelin läpi sähkövirran avulla. Molekyylit kulkevat geelissä eri nopeuksilla riippuen niiden koosta, sähkövarauksesta tai muodosta. Näin erikokoiset palat saadaan eroteltua toisistaan.

Question 17

Mitä tarkoittaa sekvensointi?

Answer 17

Sekvensointi on emäsjärjestyksen selvittämistä.