GE: section 6 Flashcards
(31 cards)
Lorsque l’on procède à la production d’un extrait de protéine totale, dans certains cas on doit ajouter dans le tampon d’extraction des inhibiteurs de phosphatases, pourquoi ?
Pour inhiber la perte des groupements phosphates des protéines (maintenir la phosphorylation post-traductionnelle)
Lorsque l’on souhaite évaluer la concentration protéique d’un échantillon, quel appareil de base est requis pour effectuer les lectures ? (autre qu’un réfractomètre utilisé lors de l’estimation des protéines totales dans le plasma ou le sérum)
Spectrophotomètre
Nommez 1 protéine qui est utilisée comme référence pour générer une courbe standard (étalon).
Albumine
immunoglobine
Pourquoi dois-je produire 2 à 3 dilutions de mon échantillon protéique inconnu dont je souhaite déterminer la concentration protéique afin d’obtenir une quantification plus précise ?
Pour s’assurer que l’une des dilutions entre dans l’intervalle défini par ma courbe standard. Si l’échantillon n’est pas assez dilué et qu’il n’entre pas dans la courbe, on ne pourra pas déterminer sa concentration.
Quel type de gel est principalement utilisé lors de la séparation par électrophorèse des protéines ?
Le gel PAGE-SDS
PolyAcrylamide Gel Electrophoresis-SDS
Lors d’une analyse par électrophorèse, on ajoute un détergent nommé SDS (sodium docécyl sulfate), quel est le rôle de ce détergent dans la migration des protéines ?
Conférer une charge négative aux protéines pour qu’elles migrent vers l’anode (+)
La séparation des protéines selon leur masse (poids moléculaire) nécessite une migration sur gel de type vertical discontinu où l’on retrouve 2 gels superposés. Quel est le rôle de chacun de ces gels ?
1er gel permet de concentrer les protéines,
2e gel permet de séparer les protéines.
Lors de certaines analyses d’extraits protéiques, pourquoi réalise-t-on une analyse de type bi-dimensionnelle ?
Pour prendre en compte le fait que la charge totale des protéines varie selon le pH du milieu et arriver à une identification plus précise des protéines.
L’analyse des protéines par électrophorèse bi-dimensionnelle se base sur quels paramètres pour séparer les protéines et dans quel ordre la séparation des protéines est-elle effectuée ?
- Par charge électrique (électrofocalisation)
2. Par poids moléculaire
Suite à la séparation des protéines par électrophorèse (1D ou 2D), vous souhaitez réaliser l’analyse d’une protéine spécifique. Quel est l’un des noms donnés à ce type d’analyse ?
Immunoblot (analyse Western)
Dans cette approche analytique, quel est “l’outil” de base qui me permet de reconnaître la protéine que je souhaite analyser ?
Un anticorps primaire et un anticorps secondaire couplé à une enzyme.
Quel est le rôle du « blocking agent » (lait ou BSA)
Empêcher que les anticorps/enzymes se fixent directement à la membrane où il n’y a pas de protéine.
Quel est le nom donné à la technique d’analyse, lorsque je souhaite identifier une protéine exprimée (ou contenue) sur une coupe histologique ?
Immunohistochimie
Quel est le rôle du 2ième anticorps utilisé lors de cette technique ?
Le 2e anticorps reconnaît le 1er anticorps et augmente la sensibilité à reconnaître le complexe protéine/premier anticorps.
Nommez les différentes méthodes pouvant permettre la détection du complexe «protéine/1er anticorps/2e anticorps».
- Colorimétrie enzymatique
- Excitation par une longueur d’onde (fluorescence)
- par autoradiographie (radioactivité)
- microscopie électronique (particule d’or)
Dans les techniques d’ELISA, neutralisation sérique, agglutination, pourquoi est-il nécessaire d’incorporer une courbe standard (étalon) ?
Comme on veut déterminer une concentration d’un échantillon inconnu, il est nécessaire de pouvoir comparer avec une concentration connue.
Dans la technique d’ELISA, quel est “l’outil” de base qui me permet de déterminer la concentration de ma protéine d’intérêt
2 anticorps, dont une est couplé à une enzyme.
En quoi le test de neutralisation sérique est-il plus complexe à réaliser que le test ELISA
Le test de neutralisation sérique implique des cellules vivantes, tandis que l’ELISA ne demande que le sérum de l’animal.
Expliquer le concept du test d’inhibition de l’hémagglutination (IHA)
Les virus se lient aux globules rouges pour faire de l’hémagglutination. En présence d’anticorps, ceux-ci se lient aux virus et empêchent l’hémagglutination.
Qu’est-ce qu’un sérum pairé? Quel est son utilité?
Un sérum pairé c’est quand on compare deux sérums provenant du même animal mais prélevés à des intervalles différents.
Sert à observer l’augmentation du tire d’Ac contre un virus donné et confère une valeur diagnostique au résultat.
Quels types d’anticorps (Immunoglobulines) sont les plus fréquemment utilisés dans les techniques d’analyse et de dosage protéique ?
IgG
Quel nom donne-t-on au site par lequel l’anticorps se lie aux protéines ?
Paratope (sur l’anticorps)
Quel nom donne-t-on au site sur la protéine où se lie l’anticorps ?
Épitope
Comment produit-on des anticorps polyclonaux ?
Ils sont obtenus suite à des vaccinations répétées (contenant l’antigène & l’adjuvant) chez un animal. L’adjuvant (protéine) stimule le système immunitaire de l’animal à former des anticorps dirigés contre l’antigène.
